發(fā)布時(shí)間：2020-11-20 01:43

　　 紅樹莓(Rubus idaeus L.)為薔薇科懸鉤子屬植物,含有多種具有抗炎、抗氧化、抑菌等活性成分。隨著花色苷功能性研究的不斷深入,針對(duì)紅樹莓花色苷成分鑒定以及更加深入功能性研究有著重要意義。因此本論文以紅樹莓為原料提取花色苷,通過制備和結(jié)構(gòu)鑒定,然后利用衰老模型小鼠和肺癌細(xì)胞A549進(jìn)行深入功能性研究,為紅樹莓花色苷未來在食品和醫(yī)藥等領(lǐng)域應(yīng)用提供一定數(shù)據(jù)參考。主要研究結(jié)果如下:1.利用超聲輔助酶法來提取紅樹莓花色苷,經(jīng)過單因素實(shí)驗(yàn)和響應(yīng)面優(yōu)化設(shè)計(jì)得出花色苷最佳提取工藝:果膠酶濃度為5 mg/g、料液比為1:15(g/mL)、酶解pH為3.0、酶解溫度為50℃、超聲時(shí)間為20 min、超聲功率為450 W、酶解時(shí)間60 min,在此條件下花色苷含量為127.51 mg/100 g,較超聲法提高46.38%,較酶法提高23.88%,因此說明聯(lián)合提取法與單一法相比提取更充分。2.通過大孔樹脂吸附和解吸附能力的比較,從AB-8、D101和D406中篩選出AB-8;采用花色苷濃度為40μg/mL、pH為3.0、速度為2 mL/min上樣并采用90%的乙醇進(jìn)行洗脫,經(jīng)AB-8純化的紅樹莓花色苷色價(jià)為61.3±0.22、純度為27.3±0.48%;紅樹莓花色苷種類經(jīng)UPLC-Q/TOF-MS鑒定出4種花色苷,分別為:芍藥素-3-葡萄糖苷、矢車菊素-3-葡萄糖苷、矢車菊素-3-阿拉伯糖苷和矢車菊素-3-蕓香糖苷。3.通過對(duì)衰老模型小鼠進(jìn)行紅樹莓花色苷干預(yù),通過小鼠的器官指數(shù)計(jì)算、器官和血清抗氧化酶活力檢測(cè)及心臟和腎臟病理學(xué)觀察,初步對(duì)紅樹莓花色苷的抗衰老作用進(jìn)行評(píng)估。結(jié)果表明:紅樹莓花色苷對(duì)衰老造成的胸腺和脾臟指數(shù)的下降有一定的改善作用,使衰老小鼠器官和血清中SOD、CAT、GSH-Px活性顯著提高、降低MDA含量,同時(shí)也顯著提高皮膚組織中HYP含量,對(duì)改善內(nèi)臟和皮膚衰老狀況起到積極的作用;病理學(xué)切片顯示經(jīng)過紅樹莓花色苷干預(yù)后心肌細(xì)胞和腎臟細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰、數(shù)量增加、逐漸恢復(fù)接近于正常狀態(tài),說明紅樹莓花色苷對(duì)于自由基造成氧化損傷起到緩解作用、對(duì)衰老起到抑制作用。4.通過MTT法、細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察和流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡三方面進(jìn)行紅樹莓花色苷對(duì)肺癌細(xì)胞A549作用的評(píng)價(jià)。結(jié)果顯示:MTT法顯示100μg/mL紅樹莓花色苷作用A549細(xì)胞48 h細(xì)胞抑制率達(dá)到80.39%。倒置顯微鏡顯示100μg/mL花色苷作用下的A549細(xì)胞附著能力下降、細(xì)胞變圓或者不規(guī)則。細(xì)胞凋亡情況顯示100μg/mL花色苷處理組細(xì)胞凋亡率為40.53%,說明紅樹莓花色苷具有抑制肺癌細(xì)胞A549增殖的作用。
【學(xué)位單位】：錦州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：TS264.4;TS201.4
【部分圖文】：

進(jìn)行 3 次平行試驗(yàn)。驗(yàn)設(shè)計(jì)及數(shù)據(jù)處理采用 Design Expert8.0.5 軟件處理數(shù)據(jù)， Excel2007 軟件處理。驗(yàn)結(jié)果濃度對(duì)花色苷含量的作用影響 可以看出，果膠酶濃度在 2~6 mg/g 范圍內(nèi)，花色苷的含量上升的趨勢(shì)。這是因?yàn)楣�膠酶濃度的增加有利于果膠的分增加；當(dāng)果膠酶濃度大于 5 mg/g 時(shí)，酶質(zhì)量濃度達(dá)到飽和不顯著（p>0.05），說明酶解反應(yīng)已經(jīng)基本完成，因此本實(shí)圍在 4~6 mg/g。

圖 2-2 料液比對(duì)花色苷含量的作用Fig.2-2 Effect of material/liquid ratio on the extraction of anthocyaninpH 對(duì)花色苷含量的作用影響3 可以看出，隨著 pH 的增高，提取液中花色苷含量呈現(xiàn)升，花色苷提取量不再繼續(xù)增加。這說明，在 pH3.0 左右達(dá)酶酶解效果增強(qiáng)，使得提取液中花色苷充分暴露，提取液色苷可以較穩(wěn)定存在于酸性環(huán)境中。因此，本實(shí)驗(yàn)選擇。

圖 2-2 料液比對(duì)花色苷含量的作用Fig.2-2 Effect of material/liquid ratio on the extraction of anthocyaninpH 對(duì)花色苷含量的作用影響 可以看出，隨著 pH 的增高，提取液中花色苷含量呈現(xiàn)升，花色苷提取量不再繼續(xù)增加。這說明，在 pH3.0 左右達(dá)酶酶解效果增強(qiáng)，使得提取液中花色苷充分暴露，提取液色苷可以較穩(wěn)定存在于酸性環(huán)境中。因此，本實(shí)驗(yàn)選擇。
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2890749