發(fā)布時間：2024-10-05 06:45

　　 目的利用活細胞顯微成像術對腦微血管內(nèi)皮細胞內(nèi)肌動蛋白的動態(tài)變化實現(xiàn)實時觀察。方法構建綠色熒光蛋白(GFP)標記Lifeact的真核表達載體即Lifeact-pEGFP,利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將Lifeact-pEGFP質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至腦微血管內(nèi)皮細胞中,利用共聚焦激光掃描顯微鏡對Lifeact-pEGFP在細胞內(nèi)的分布進行分析,并檢測其在細胞伸展和遷移過程中的動態(tài)變化。結果成功將Lifeact-p EGFP質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至人腦微血管內(nèi)皮細胞,細胞存活未受到影響。Lifeact-pEGFP能將活細胞中的肌動蛋白絲標記為綠色熒光,并能夠有效監(jiān)測細胞伸展和遷移過程中肌動蛋白絲的動態(tài)變化。結論 Lifeact-p EGFP轉(zhuǎn)染結合活細胞顯微成像術可以用于實時記錄和分析腦微血管內(nèi)皮細胞內(nèi)肌動蛋白絲的動態(tài)變化。

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 細胞：
        1.1.2 主要試劑：
    1.2 方法
        1.2.1 質(zhì)粒構建和鑒定：
        1.2.2 細胞培養(yǎng)：
        1.2.3 細胞轉(zhuǎn)染：
        1.2.4 細胞增殖實驗：
        1.2.5 免疫熒光染色：
        1.2.6 細胞伸展實驗：
        1.2.7 細胞劃痕實驗：
    1.3 統(tǒng)計學分析
2 結果
    2.1 Lifeact-pEGFP質(zhì)粒的構建和鑒定
    2.2 Lifeact-pEGFP的表達不影響B(tài)MEC的存活
    2.3 BMEC中表達的Lifeact-pEGFP與肌動蛋白絲呈共定位
    2.4 Lifeact-pEGFP的表達可以顯示BMEC在伸展過程中肌動蛋白絲的動態(tài)變化
    2.5 Lifeact-pEGFP能夠標記運動細胞前導緣肌動蛋白絲的動態(tài)變化
3 討論



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