發(fā)布時間：2024-10-02 21:05

　　哺乳動物卵母細胞的正常發(fā)育是確保卵子成熟,受精以及胚胎發(fā)育的前提條件,是生命啟始的物質(zhì)基礎。由于環(huán)境污染及自身老化等原因造成的卵母細胞質(zhì)量下降,嚴重影響了動物繁殖力從而制約了畜牧業(yè)的發(fā)展。目前已有研究表明,許多在有絲分裂進程中發(fā)揮關(guān)鍵作用的分子都參與了卵子成熟和受精過程,其中有些分子的功能并不保守,在減數(shù)分裂中是特有的。此外,環(huán)境毒素和老化等外部因素影響卵子質(zhì)量導致受精失敗的作用機理也尚不明確。因此,系統(tǒng)開展對卵母細胞減數(shù)分裂成熟過程的內(nèi)在調(diào)控機制和外在影響因素的研究,將有助于豐富和完善卵子發(fā)育成熟和卵子質(zhì)量控制的理論基礎,為提高家畜繁殖力提供可靠依據(jù)。本試驗選用豬作為研究對象,通過對豬卵母細胞體外培養(yǎng)、體外受精、胚胎培養(yǎng)、熒光染色和免疫印跡等技術(shù)研究不同條件下豬卵母細胞質(zhì)量變化的規(guī)律,探索卵母細胞成熟和受精的影響因素及調(diào)控機制。本研究共分為兩個部分,首先發(fā)現(xiàn)環(huán)境毒素苯并芘(Benzo(a)pyrene,BaP)通過誘導卵子產(chǎn)生氧化應激和細胞早期凋亡損害豬卵母細胞成熟和受精過程,并證明褪黑素作為天然抗氧化劑能有效改善苯并芘誘導的卵子質(zhì)量低下。此外,本課題還闡明了排卵后老化過程通過破壞卵子...

【文章頁數(shù)】：130 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要 ABSTRACT 符號及縮略語 前言 第一部分 文獻綜述
第一章 哺乳動物卵母細胞成熟與受精的研究進展
    1 卵母細胞減數(shù)分裂成熟
    
1.1 卵母細胞減數(shù)分裂成熟過程的事件
    
1.2 哺乳動物的早期胚胎發(fā)育過程
    
1.3 卵母細胞成熟異常對胚胎發(fā)育的影響
    2 哺乳動物的受精過程
    
2.1 受精過程的生物學事件
    
2.2 受精過程中的關(guān)鍵蛋白
第二章 苯并芘對生殖細胞影響的研究進展
    1 苯并芘對哺乳動物生殖細胞發(fā)育的影響
    2 苯并芘損傷生殖細胞機制的研究進展
    
2.1 苯并芘誘發(fā)DNA損傷
    
2.2 苯并芘誘導氧化應激產(chǎn)生活性氧
    3 現(xiàn)有研究存在的問題及本研究的目的和意義
第三章 老化對生殖細胞影響的研究進展
    1 卵母細胞老化過程的變化
    
1.1 卵母細胞老化過程中結(jié)構(gòu)與功能的改變
    
1.2 卵母細胞老化對卵母細胞成熟與受精的影響
    2 卵母細胞老化的機制研究
    3 現(xiàn)有研究存在的問題及本研究的目的和意義 第二部分 試驗研究
第四章 苯并芘誘導氧化應激抑制豬卵母細胞發(fā)育成熟的機制及褪黑素的保護作用
    1 試驗材料
    
1.1 抗體和試劑
    
1.2 主要儀器與耗材
    
1.3 試劑的配制和抗體的稀釋
    2 試驗方法
    
2.1 豬卵母細胞的收集和體外培養(yǎng)
    
2.2 BaP和褪黑素處理
    
2.3 免疫熒光染色
    
2.4 免疫蛋白印跡(Western Blot)
    
2.5 精子計數(shù)及稀釋前準備
    
2.6 精子結(jié)合檢測
    
2.7 體外受精
    
2.8 免疫熒光強度及統(tǒng)計學分析
    3 結(jié)果與分析
    
3.1 不同濃度BaP和褪黑素對豬卵母細胞成熟的影響
    
3.2 苯并芘誘導紡錘體/染色體缺陷及褪黑素的挽救作用
    
3.3 苯并芘影響α-tubulin的乙酰化水平及褪黑素的保護作用
    
3.4 苯并芘損傷微絲的分布及褪黑素的挽救作用
    
3.5 苯并芘破壞皮質(zhì)顆粒和線粒體的完整性及褪黑素的改善作用
    
3.6 苯并芘影響ovastacin的分布及褪黑素的保護作用
    
3.7 苯并芘影響質(zhì)膜上Juno蛋白的表達水平
    
3.8 苯并芘處理損傷受精能力及褪黑素的改善作用
    
3.9 苯并芘誘導產(chǎn)生的氧化應激及褪黑素的抗氧化作用
    4 討論
    5 小結(jié)
第五章 老化誘導氧化應激損害豬卵母細胞質(zhì)量的機制研究
    1 試驗材料
    
1.1 抗體和試劑
    
1.2 主要儀器與耗材
    
1.3 試劑的配制和抗體的稀釋
    2 試驗方法
    
2.1 豬卵母細胞的收集和體外培養(yǎng)
    
2.2 卵母細胞老化處理
    
2.3 免疫熒光染色
    
2.4 免疫蛋白印跡(Western Blot)
    
2.5 精子計數(shù)及稀釋前準備
    
2.6 精子結(jié)合檢測
    
2.7 體外受精
    
2.8 免疫熒光強度及統(tǒng)計學分析
    3 結(jié)果與分析
    
3.1 老化導致卵丘細胞的擴展減少和胞質(zhì)碎裂
    
3.2 老化損害紡錘體組裝與染色體排列
    
3.3 老化破壞微絲骨架及定位
    
3.4 老化損害線粒體的完整性
    
3.5 老化破壞皮質(zhì)顆粒和ovastacin的分布及表達量
    
3.6 老化削弱了精子結(jié)合和受精能力
    
3.7 老化誘導活性氧水平和凋亡率的增加
    4 討論
    5 小結(jié) 參考文獻 全文結(jié)論 創(chuàng)新性 存在的問題及進一步研究內(nèi)容 附錄 攻讀博士學位期間發(fā)表的論文 致謝



本文編號：4006358