發(fā)布時(shí)間：2018-01-13 12:29

  本文關(guān)鍵詞：益生菌對(duì)高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平的影響及機(jī)制　出處：《青島大學(xué)》2017年博士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】：第一章 益生菌對(duì)原發(fā)性高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平的影響及機(jī)制目的:檢測(cè)原發(fā)性高尿酸血癥發(fā)生時(shí)腸道乳酸桿菌和雙歧桿菌的變化,以及益生菌治療對(duì)原發(fā)性高尿酸血癥血清尿酸水平及腸道尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ABCG2/BCRP表達(dá)的影響及機(jī)制。方法:1.構(gòu)建尿酸氧化酶(Uricase,Uox)基因敲除的C57BL/6小鼠原發(fā)性高尿酸血癥模型,采用Real-time PCR及Western-blot技術(shù)方法對(duì)該模型的敲除效率進(jìn)行驗(yàn)證;2.實(shí)驗(yàn)小鼠分為4組(每組12只)。正常組:正常對(duì)照C57BL/6小鼠,每天灌胃0.2ml生理鹽水;高尿酸組:Uox基因敲除的原發(fā)性高尿酸血癥C57BL/6小鼠,每天灌胃0.2ml生理鹽水;正常組+益生菌組(益生菌N組):正常C57BL/6小鼠每天灌胃益生菌(分別含雙歧桿菌和乳酸桿菌1.0×106 CFU,溶解于0.2ml生理鹽水);高尿酸組+益生菌組(益生菌H組):Uox基因敲除的原發(fā)性高尿酸血癥C57BL/6小鼠每天灌胃益生菌(分別含雙歧桿菌和乳酸桿菌1.0×106 CFU,溶解于0.2ml生理鹽水)。3.提取各組小鼠糞便樣本中總DNA,基于16S r RNA設(shè)計(jì)特異性引物,絕對(duì)定量RT-PCR法檢測(cè)腸道菌群特別是乳酸桿菌及雙歧桿菌的變化;采用全自動(dòng)生化儀及相關(guān)檢測(cè)試劑盒檢測(cè)各組小鼠血清尿酸(Uric Acid,UA)、內(nèi)毒素(Lipopolysaccharides,LPS)以及黃嘌呤氧化酶(Xanthine Oxidase,XO)的活性水平;采用RT-PCR及Western-blot法檢測(cè)各組小鼠腸道尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ABCG2/BCRP m RNA及蛋白表達(dá)變化;采用酶比色法檢測(cè)腸道菌群對(duì)尿酸的分解水平。在實(shí)驗(yàn)進(jìn)行第0、7、14、21、28及35天檢測(cè)上述指標(biāo)。4.采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果:與正常組比較,高尿酸組小鼠腸道中雙歧桿菌和乳酸桿菌的數(shù)量明顯下降(P0.05)。血清尿酸、內(nèi)毒素以及黃嘌呤氧化酶活性水平明顯升高(P0.01)。腸道菌群對(duì)尿酸的分解水平顯著降低(P0.05)。腸道尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ABCG2/BCRP表達(dá)顯著增加(P0.05)。益生菌N組腸道中雙歧桿菌和乳酸桿菌的數(shù)量明顯升高(P0.05),其余指標(biāo)未見(jiàn)顯著差異。與高尿酸組比較,益生菌H組腸道中雙歧桿菌和乳桿菌的數(shù)量明顯增加(P0.05)。血清尿酸、內(nèi)毒素以及黃嘌呤氧化酶活性水平明顯降低(P0.01),但數(shù)值仍高于正常組(P0.05)。腸道菌群對(duì)尿酸的分解水平顯著升高(P0.05),腸道尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ABCG2/BCRP表達(dá)水平未見(jiàn)顯著差異。結(jié)論:1.Uox基因敲除成功建立原發(fā)性高尿酸血癥C57BL/6小鼠模型,原發(fā)性高尿酸血癥模型鼠腸道雙歧桿菌和乳酸桿菌數(shù)量減少。2.益生菌干預(yù)治療改變?cè)�發(fā)性高尿酸血癥C57BL/6小鼠模型腸道菌群的結(jié)構(gòu),使腸道雙歧桿菌和乳酸桿菌的數(shù)量增加。3.益生菌干預(yù)治療使原發(fā)性高尿酸血癥C57BL/6小鼠模型血清內(nèi)毒素和黃嘌呤氧化酶活性水平降低,進(jìn)而尿酸生成減少,血清尿酸水平降低;4.原發(fā)性高尿酸血癥C57BL/6小鼠模型尿酸腸道轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ABCG2/BCRP表達(dá)水平代償性增加。益生菌干預(yù)治療并未進(jìn)一步上調(diào)ABCG2/BCRP的表達(dá),但可增加尿酸在腸道中的分解,進(jìn)而尿酸腸道排泄增加,血清尿酸水平降低。第二章益生菌對(duì)輪狀病毒感染導(dǎo)致的繼發(fā)性高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平的影響及機(jī)制目的:兒童輪狀病毒(rotavirus,RV)腸胃炎(gastro-enteritis,GE)發(fā)生時(shí),可能會(huì)伴隨高尿酸血癥。因此,我們建立RV GE小鼠模型,進(jìn)而檢測(cè)血清尿酸(Uric Acid,UA)水平,以及腸道尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ABCG2/BCRP的表達(dá)變化。同時(shí),應(yīng)用益生菌乳酸桿菌及雙歧桿菌治療RV GE小鼠,進(jìn)一步觀察血清尿酸以及腸道尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ABCG2/BCRP的表達(dá)變化。方法:通過(guò)灌胃RV建立RV GE小鼠模型。日齡為3天的小鼠隨機(jī)分為4組:正常組,RV GE組,益生菌N組及益生菌RV組。RV GE組及益生菌RV GE組給予灌胃0.2 ml含RV培養(yǎng)液(2×108 PFU),正常組及益生菌N組給予不含病毒的培養(yǎng)液灌胃0.2 ml。益生菌N組及益生菌RV GE組給予灌胃0.2 ml培養(yǎng)液后,同時(shí)每天給予益生菌灌胃治療(分別含雙歧桿菌和乳酸桿菌1.0×106 CFU,溶解于0.1 ml生理鹽水),正常組及RV GE組每天灌胃0.1 ml生理鹽水。采用全自動(dòng)生化儀檢測(cè)各組小鼠血清尿酸。采用RT-PCR法檢測(cè)各組小鼠腸道尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ABCG2/BCRP的m RNA表達(dá)變化。在實(shí)驗(yàn)灌胃RV后第1、2、3、4、5、6、7、10天檢測(cè)上述指標(biāo)。結(jié)果:與正常組比較,RV GE組及益生菌RV組血清尿酸水平在實(shí)驗(yàn)進(jìn)行第2,3,4,5,6,7天顯著升高(P0.01),益生菌N組血清尿酸水平未見(jiàn)明顯差異;與RV GE組比較,益生菌N組血清尿酸水平在實(shí)驗(yàn)進(jìn)行第2,3,4,5,6,7天顯著降低(P0.01),益生菌RV組血清尿酸水平實(shí)驗(yàn)進(jìn)行第3,4,5,6,7,10天顯著降低(P0.05),但數(shù)值在各時(shí)間點(diǎn)仍高于正常組。與正常組比較,RV GE組腸道尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ABCG2/BCRP m RNA表達(dá)水平在實(shí)驗(yàn)進(jìn)行第3,4,5,6,7,10天顯著降低(P0.05),益生菌N組ABCG2/BCRP m RNA表達(dá)水平未見(jiàn)明顯差異,益生菌RV組在個(gè)時(shí)間點(diǎn)ABCG2/BCRP m RNA表達(dá)水平降低,在實(shí)驗(yàn)第2,3,4天差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與RV GE組比較,益生菌N組ABCG2/BCRP m RNA表達(dá)水平在實(shí)驗(yàn)進(jìn)行第3,4,5,6,7,10天顯著升高(P0.05),益生菌RV組ABCG2/BCRP m RNA表達(dá)水平在各時(shí)間點(diǎn)升高,在實(shí)驗(yàn)進(jìn)行第3,4,5,6,7,10天差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),但數(shù)值在各時(shí)間點(diǎn)仍低于正常組。結(jié)論:1.RV灌胃成功建立了輪狀病毒感染小鼠模型。2.輪狀病毒感染小鼠模型血清尿酸水平增加。3.輪狀病毒感染小鼠腸道尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ABCG2/BCRP表達(dá)下降。4.益生菌增加輪狀病毒感染小鼠腸道尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ABCG2/BCRP表達(dá),降低了模型小鼠血清尿酸水平。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R589.7

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本文編號(hào)：1418850