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  本文關(guān)鍵詞：ADAMTS5在肝細(xì)胞性肝癌中的表達(dá)及其作用機(jī)制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《第三軍醫(yī)大學(xué)》 2015年

ADAMTS5在肝細(xì)胞性肝癌中的表達(dá)及其作用機(jī)制的研究

李崇義  

【摘要】：背景肝細(xì)胞性肝癌(HCC)是肝臟最常見(jiàn)的原發(fā)惡性腫瘤,具有較高的發(fā)病率和致死率。由于其容易轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的特點(diǎn),HCC患者常表現(xiàn)為預(yù)后不良。因此,我們需要進(jìn)一步研究肝細(xì)胞性肝癌的分子生物學(xué)機(jī)制,為其診斷和治療提供新的策略。含I型血小板結(jié)合蛋白基序的解聚蛋白樣金屬蛋白酶5(ADAMTS5),與基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)和解聚蛋白樣金屬蛋白酶(ADAM)同屬Zn2+依賴的金屬蛋白酶家族。其異常表達(dá)在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。關(guān)于其蛋白結(jié)構(gòu)的研究顯示,ADAMTS5除具有蛋白聚糖酶的活性外,更具有抗血管生成的作用。因此研究ADAMTS5在HCC中的表達(dá)及其作用機(jī)制具有重要意義。rs2830585是位于編碼ADAMTS5的TSP重復(fù)序列1(TSR1)結(jié)構(gòu)域的基因序列中的非同義單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)(nsSNP),SNPs3D軟件預(yù)測(cè)結(jié)果顯示rs2830585可通過(guò)改變蛋白質(zhì)的氨基酸序列從而影響ADAMTS5的功能,而TSR1結(jié)構(gòu)域是ADAMTS5發(fā)揮抗血管生成活性的關(guān)鍵。因此,對(duì)于以豐富腫瘤血管生成為重要特征的的肝細(xì)胞性肝癌,研究ADAMTS5 rs2830585單核苷酸多態(tài)性與肝細(xì)胞性肝癌腫瘤易感性之間的關(guān)系具有重要意義。目的1、檢測(cè)ADAMTS5在肝細(xì)胞性肝癌中的表達(dá)情況及其與臨床病理因素之間的關(guān)系。2、闡明ADAMTS5在肝細(xì)胞性肝癌發(fā)生、發(fā)展中的作用機(jī)制。3、明確ADAMTS5 rs2830585單核苷酸多態(tài)性與肝細(xì)胞性肝癌腫瘤易感性之間的關(guān)系。方法第一部分ADAMTS5在肝細(xì)胞性肝癌中的表達(dá)及其意義1、采用肝細(xì)胞性肝癌組織芯片及免疫組化,檢測(cè)肝細(xì)胞性肝癌組織中ADAMTS5、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、CD34的表達(dá)。2、采用McNemar檢驗(yàn)比較ADAMTS5在肝細(xì)胞性肝癌癌組織及癌周正常組織的表達(dá)差異。3、采用卡方檢驗(yàn)或fisher精確概率檢驗(yàn)比較adamts5的表達(dá)與臨床病理因素之間的相關(guān)性。4、采用spearman等級(jí)相關(guān)系數(shù)比較adamts5、vegf、微血管密度(mvd)和腫瘤體積的相關(guān)性。5、采用生存分析比較adamts5的表達(dá)與患者總生存時(shí)間的關(guān)系。6、采用westernblot檢測(cè)adamts5在正常肝細(xì)胞系與不同hcc細(xì)胞系中的表達(dá)。第二部分adamts5在血管形成中的作用及其機(jī)制1、通過(guò)構(gòu)建高表達(dá)adamts5的肝細(xì)胞性肝癌細(xì)胞系及酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(elisa),確定肝細(xì)胞性肝癌中adamts5的表達(dá)對(duì)vegf分泌的影響。2、通過(guò)huvec細(xì)胞遷移和管狀形成實(shí)驗(yàn),檢測(cè)肝細(xì)胞性肝癌細(xì)胞條件培養(yǎng)基對(duì)huvec細(xì)胞遷移和管狀形成的影響。3、通過(guò)移植物成瘤實(shí)驗(yàn),進(jìn)一步在體內(nèi)確定adamts5對(duì)肝細(xì)胞性肝癌腫瘤生長(zhǎng)及血管生成的影響。第三部分adamts5單核苷酸多態(tài)性與中國(guó)漢族人群肝細(xì)胞癌易感性的研究1、收集220例肝細(xì)胞性肝癌患者和220例非肝細(xì)胞性肝癌對(duì)照患者臨床資料,并進(jìn)行隨訪。2、經(jīng)知情同意,提取患者外周血dna,針對(duì)rs2830585單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)進(jìn)行進(jìn)行基因測(cè)序。3、使用spss19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果第一部分adamts5在肝細(xì)胞性肝癌中的表達(dá)及其意義1、adamts5在肝細(xì)胞性肝癌癌組織中的表達(dá)顯著低于癌周正常肝組織(mcnemar檢驗(yàn),p0.05)2、adamts5的表達(dá)與腫瘤分期顯著相關(guān)(p0.01)。3、肝細(xì)胞性肝癌組織中adamts5的表達(dá)與mvd(r=-0.530,p0.001)、vegf(r=-0.640,p0.001)及腫瘤體積(r=-0.361,p0.05)顯著負(fù)相關(guān)。4、adamts5陽(yáng)性表達(dá)肝細(xì)胞性肝癌患者總生存時(shí)間顯著優(yōu)于陰性表達(dá)adamts5患者(29.56versus12.96,p0.001),adamts5可作為獨(dú)立的預(yù)后因子預(yù)測(cè)肝細(xì)胞性肝癌患者的總生存時(shí)間(p0.05)。5、ADAMTS5在正常肝細(xì)胞系L02中的表達(dá)高于肝細(xì)胞性肝癌細(xì)胞系。第二部分ADAMTS5在血管形成中的作用及其機(jī)制1、高表達(dá)ADAMTS5肝細(xì)胞性肝癌細(xì)胞條件培養(yǎng)基中VEGF的表達(dá)顯著低于其對(duì)照組細(xì)胞條件培養(yǎng)基(p0.001)。2、與對(duì)照組細(xì)胞條件培養(yǎng)基相比較,高表達(dá)ADAMTS5肝細(xì)胞性肝癌細(xì)胞條件培養(yǎng)基可顯著抑制人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)遷移和管狀形成能力(p0.01),并且人重組VEGF可以從很大程度上恢復(fù)HUVEC細(xì)胞被抑制的遷移和管狀形成能力(p0.01)。3、高表達(dá)ADAMTS5肝細(xì)胞性肝癌細(xì)胞裸鼠移植瘤生長(zhǎng)受到顯著抑制(p0.01),免疫組化結(jié)果顯示ADAMTS5在裸鼠移植瘤中的高表達(dá)抑制了腫瘤內(nèi)的血管形成和VEGF表達(dá)。第三部分ADAMTS5單核苷酸多態(tài)性與中國(guó)漢族人群肝細(xì)胞癌易感性的研究1、Logistic回歸分析結(jié)果顯示,與rs2830585 G等位基因相比,A等位基因顯著降低肝細(xì)胞性肝癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)(adjusted OR,0.348;95%CI 0.236-0.512;P0.001);攜帶rs2830585 GA基因型的個(gè)體發(fā)生肝細(xì)胞性肝癌風(fēng)險(xiǎn)顯著低于GG基因型攜帶者(adjusted OR,0.339;95%CI,0.044-11.535;P0.001)。2、分層分析結(jié)果顯示,rs2830585基因型與分層因素之間不存在顯著交互作用。3、相關(guān)性分析結(jié)果顯示,rs2830585基因型與肝細(xì)胞性肝癌臨床病理因素間不存在顯著相關(guān)性。結(jié)論1、ADAMTS5在肝細(xì)胞性肝癌中表達(dá)下調(diào),其高表達(dá)與肝細(xì)胞性肝癌患者的良好預(yù)后相關(guān)。2、ADAMTS5通過(guò)減少肝細(xì)胞性肝癌中VEGF的分泌,抑制腫瘤血管生成及生長(zhǎng)。3、ADAMTS5 rs2830585與肝細(xì)胞性肝癌的易感性顯著相關(guān),其突變型等位基因A顯著降低肝細(xì)胞性肝癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R735.7
【目錄】：

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【參考文獻(xiàn)】

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10 劉圣;施海彬;王杰;馮耀良;楊正強(qiáng);戴曦;李麟蓀;;α-氰基丙烯酸正丁酯栓塞治療肝細(xì)胞性肝癌并肝動(dòng)脈門(mén)靜脈瘺的臨床價(jià)值[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第16次全國(guó)放射學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2009年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 李崇義;ADAMTS5在肝細(xì)胞性肝癌中的表達(dá)及其作用機(jī)制的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

2 李曉麗;不同葡萄糖、胰島素水平對(duì)人肝細(xì)胞性肝癌生長(zhǎng)作用研究[D];鄭州大學(xué);2012年

3 劉宏;人內(nèi)皮抑素基因轉(zhuǎn)染治療肝細(xì)胞性肝癌的實(shí)驗(yàn)研究[D];浙江大學(xué);2005年

4 李亮;循環(huán)miR-429在肝細(xì)胞性肝癌早期預(yù)警及診斷中的作用和機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2012年

5 花瞻;復(fù)發(fā)肝細(xì)胞性肝癌相關(guān)基因的研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2004年

6 張斌;蜈蚣提取液的分離純化與治療肝細(xì)胞性肝癌機(jī)制的研究[D];中南大學(xué);2010年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 馬華星;Kindlin-1在肝細(xì)胞性肝癌中的表達(dá)作用及其臨床意義[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

2 劉霖;端粒酶基因多態(tài)性與肝細(xì)胞性肝癌預(yù)后的相關(guān)性分析[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2015年

3 黃濤;肝細(xì)胞性肝癌TACE術(shù)后影響療效的多因素分析[D];四川醫(yī)科大學(xué);2015年

4 池俊萌;2型糖尿病對(duì)肝細(xì)胞性肝癌發(fā)病的影響[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2011年

5 周寧;高爾基蛋白73（Golgi protein 73）在肝細(xì)胞性肝癌中的表達(dá)[D];中南大學(xué);2011年

6 洪玉才;性激素受體在肝細(xì)胞性肝癌中表達(dá)的研究[D];浙江大學(xué);2002年

7 鄒浩;靶向性融合基因?qū)θ烁渭?xì)胞性肝癌治療作用的體外研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2005年

8 李?lèi)倗?guó);肝細(xì)胞性肝癌患者血清蛋白質(zhì)指紋圖譜檢測(cè)及其臨床意義[D];天津醫(yī)科大學(xué);2006年

9 孫磊;肝細(xì)胞性肝癌肝動(dòng)脈門(mén)靜脈分流形成的相關(guān)因素分析[D];南京醫(yī)科大學(xué);2012年

10 虞長(zhǎng)春;肝細(xì)胞性肝癌中環(huán)氧化酶-2的表達(dá)及其與細(xì)胞凋亡的關(guān)系[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2007年

  本文關(guān)鍵詞：ADAMTS5在肝細(xì)胞性肝癌中的表達(dá)及其作用機(jī)制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：165567