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人小涎腺上皮干/祖細(xì)胞成肝誘導(dǎo)的相關(guān)研究

發(fā)布時(shí)間:2024-06-27 21:48
  目的1.體外對(duì)人小涎腺上皮干/祖細(xì)胞(hMSG-EpiPCs)進(jìn)行成肝誘導(dǎo),鑒定誘導(dǎo)獲得細(xì)胞的表型和檢測(cè)其是否具有成熟肝臟細(xì)胞相關(guān)功能。2.移植hMSG-EpiPCs給急性肝損傷模型小鼠,鑒定其對(duì)小鼠急性肝功能損傷的修復(fù)能力,評(píng)估移植細(xì)胞成活率及肝內(nèi)轉(zhuǎn)歸。方法1.利用組織塊貼壁法從人小涎腺組織中分離培養(yǎng)出上皮干/祖細(xì)胞,體外傳代擴(kuò)增培養(yǎng)。利用免疫熒光和流式細(xì)胞術(shù)鑒定其干細(xì)胞表型和特異性標(biāo)記物。體外Matrigel構(gòu)建三維培養(yǎng)環(huán)境下對(duì)hMSG-EpiPCs進(jìn)行成肝誘導(dǎo)并設(shè)立空白對(duì)照組。利用免疫熒光及Real-time PCR檢測(cè)誘導(dǎo)而來的細(xì)胞相關(guān)肝臟細(xì)胞表型表達(dá),并通過PAS染色、ICG攝取和CYP450功能測(cè)定檢測(cè)其相關(guān)成熟肝臟細(xì)胞功能。2.使用CM-Dil熒光標(biāo)記hMSG-EpiPCs并觀察標(biāo)記后細(xì)胞生長(zhǎng)情況。建立聯(lián)合免疫缺陷(SCID/Beige)小鼠20%CC14腹腔注射急性肝損傷模型,隨機(jī)分為兩組:實(shí)驗(yàn)組移植hMSG-EpiPCs(n=12),對(duì)照組注射PBS(n=12),另取正常SCID小鼠作為空白對(duì)照組(n=3)。術(shù)后觀察小鼠體重變化。并于移植后1天、3天、1周及2周分別取...

【文章頁數(shù)】:65 頁

【學(xué)位級(jí)別】:博士

【部分圖文】:

圖1-1hMSCrEpiPCs原代及傳代培養(yǎng)

圖1-1hMSCrEpiPCs原代及傳代培養(yǎng)

a?hMSG-EpiPCs原代培養(yǎng);b?hMSG-EpiPCs傳至P3獲得形態(tài)均一細(xì)胞;hMSG-EpiPCs傳至P25出現(xiàn)衰老細(xì)胞??-HI?ff??0??,?K4?V?0?W*???,?^???10*???,?w4??¥miA?mm?tttr-A?rrm*?m-a?m??j:....


圖1-2?hMSG-EpiPCs流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)結(jié)果??

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圖1-4hE}SCr-EpiPC:體外成肝誘導(dǎo)

圖1-4hE}SCr-EpiPC:體外成肝誘導(dǎo)

mma—■??圖1-3?hMSG-EpiPCs免疫熒光??紅色及綠色示陽性染色,藍(lán)色示DAPI染核,標(biāo)尺見右下角??


圖1-3hMSCrEpiPCs免疫熒光紅色及綠色示陽性染色,藍(lán)色示DAPI染核,標(biāo)尺見右下角

圖1-3hMSCrEpiPCs免疫熒光紅色及綠色示陽性染色,藍(lán)色示DAPI染核,標(biāo)尺見右下角

■■■■??圖1-4?hMSG-EpiPCs體外成肝誘導(dǎo)??誘導(dǎo)初期,細(xì)胞狀態(tài)好,逐漸生長(zhǎng)聚集成細(xì)胞球;后期隨細(xì)胞誘導(dǎo)成熟,增殖能??力下降,出現(xiàn)壞死細(xì)胞碎片??



本文編號(hào):3995975

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