發(fā)布時(shí)間：2016-12-06 16:17

  本文關(guān)鍵詞：黃曲霉毒素B1呼吸道暴露與肝癌發(fā)病關(guān)系的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《廣西醫(yī)科大學(xué)》 2015年

黃曲霉毒素B1呼吸道暴露與肝癌發(fā)病關(guān)系的研究

賴浩  

【摘要】：原發(fā)性肝癌(Primary Liver Carcinoma, PLC)是全球常見(jiàn)的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一,其中90%以上為肝細(xì)胞肝癌(Hepatocellular Carcinoma, HCC)。據(jù)統(tǒng)計(jì),80%以上的HCC出現(xiàn)在發(fā)展中國(guó)家,如亞洲的東南部及非洲的中部和西部。我國(guó)每年有360,000例HCC新增病例及350,000例HCC死亡病例。廣西是我國(guó)HCC的高發(fā)區(qū),流行病學(xué)研究提示黃曲霉毒素飲食暴露和乙肝病毒(HBV)慢性感染是廣西地區(qū)HCC高發(fā)的兩大重要的環(huán)境致病因素,而且,這兩大重要環(huán)境致病因素誘發(fā)肝癌的相關(guān)分子機(jī)理也有了較深入的研究。之前的研究均認(rèn)為,黃曲霉毒素的攝入主要是通過(guò)消化道暴露途徑；近十余年來(lái),各種針對(duì)黃曲霉素飲食攝入的防范措施已經(jīng)得到了廣泛的重視,理論上有望一定程度降低我區(qū)HCC的發(fā)病率,但據(jù)相關(guān)的研究和我們的臨床觀察發(fā)現(xiàn),廣西肝癌的發(fā)病率并沒(méi)有明顯下降,反而呈現(xiàn)逐年上升的趨勢(shì),某些特定區(qū)域或人群HCC的發(fā)病率仍然較高,如農(nóng)民,糖廠、造紙廠及家禽養(yǎng)殖場(chǎng)某些工作環(huán)境的工人等等。但這些人群的飲食習(xí)慣及HBV感染率與其他人群并無(wú)明顯差異。我們前期的相關(guān)調(diào)查還發(fā)現(xiàn),上述一些特定人群血清AFB1或人血清AFB1白蛋白加合物(AFB1-ALB)檢測(cè)呈陽(yáng)性的發(fā)生率較高；國(guó)外相關(guān)的文獻(xiàn)亦有類(lèi)似報(bào)道。這一現(xiàn)象很值得我們高度重視和進(jìn)一步的研究。我們的一些前期現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查發(fā)現(xiàn),這些特定人群有一個(gè)共同的特點(diǎn),就是在工作中會(huì)經(jīng)常接觸某些粉塵,如蔗渣粉塵、谷物粉塵等。我們知道,廣西是一個(gè)亞熱帶地區(qū),溫暖潮濕的天氣周期較長(zhǎng),極利于霉菌的生長(zhǎng),這類(lèi)粉塵被霉毒素污染的情況普遍存在；因此,我們懷疑,經(jīng)呼吸道吸入含霉毒素的粉塵,可能是AFB1進(jìn)入人體的另一途徑,并且可能與這些特定人群HCC的發(fā)病有關(guān)。為證實(shí)這一判斷,本研究選取了區(qū)內(nèi)一家大型糖廠作為現(xiàn)場(chǎng),通過(guò)流行病學(xué)調(diào)查,采取回顧性分析的方法,分析長(zhǎng)時(shí)間暴露于蔗渣粉塵的人群及其他崗位人群30年肝癌及其他惡性腫瘤的發(fā)病情況,對(duì)比檢測(cè)某些特定環(huán)境粉塵中AFB1的含量,采集高粉塵工作環(huán)境人群及其他崗位人群的靜脈血,檢測(cè)并對(duì)比二組人群血清中AFB1-ALB的濃度,初步探討高粉塵工作環(huán)境呼吸道暴露與肝癌及其他惡性腫瘤發(fā)病的可能聯(lián)系；同時(shí)通過(guò)建立AFB1呼吸道暴露的動(dòng)物模型,探索AFB1經(jīng)呼吸道吸入與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物AFB1-ALB血清濃度變化的關(guān)系,驗(yàn)證AFB1呼吸道暴露對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血清AFB1-ALB濃度的影響。并且通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn),動(dòng)態(tài)檢測(cè)AFB1呼吸道暴露的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肝臟組織學(xué)、細(xì)胞學(xué)及其P53、P21等基因表達(dá)的分子學(xué)改變,探討AFB1呼吸道暴露對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肝臟的影響。本研究的結(jié)果有助于更全面地了解AFB1不同暴露途徑與肝癌發(fā)病的關(guān)系,為更有效地預(yù)防黃曲霉毒素暴露所導(dǎo)致的肝癌提供新的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。本研究分以下三個(gè)部分：第一部分現(xiàn)場(chǎng)流行病學(xué)調(diào)查及相關(guān)崗位人群血清AFB1-ALB檢測(cè)分析目的：分析蔗渣粉塵暴露與肝癌等惡性腫瘤發(fā)病的聯(lián)系,檢測(cè)高粉塵作業(yè)場(chǎng)所AFB1的污染情況,探索AFB1呼吸道暴露對(duì)相關(guān)作業(yè)人群血清AFB1-ALB濃度的影響。方法：采用回顧性隊(duì)列研究的方法,選取廣西區(qū)內(nèi)一家大型糖廠作為現(xiàn)場(chǎng),選擇該調(diào)查現(xiàn)場(chǎng)1984-2013年的員工為研究對(duì)象,統(tǒng)計(jì)同一現(xiàn)場(chǎng)接觸蔗渣粉塵的人群及其他崗位人群30年間肝癌等惡性腫瘤的發(fā)病情況。采集高粉塵作業(yè)場(chǎng)所及其他作業(yè)場(chǎng)所的空氣樣本,以及高粉塵作業(yè)場(chǎng)所的物表蔗渣粉塵樣本,使用ELISA法檢測(cè)所有樣本中AFB1的含量。根據(jù)納入標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn),本研究檢測(cè)符合納入標(biāo)準(zhǔn)的相關(guān)人員血清AFB1-ALB含量共384人,其中,在高粉塵作業(yè)場(chǎng)所(壓榨車(chē)間、蔗渣倉(cāng)庫(kù)、紙廠)的人群為181人(A組),其他崗位的人群203人(B組)。并采用隨機(jī)抽樣的方法,從血清AFB1-ALB檢測(cè)陽(yáng)性的職工家庭中采集大米(主食)50例樣本,檢測(cè)這些家庭日常主食的AFB1含量。結(jié)果：本研究總計(jì)觀察119852.9人年,共隨訪該調(diào)查現(xiàn)場(chǎng)1984-2013年的職工5791人。從1984年1月至2013年12月,該調(diào)查現(xiàn)場(chǎng)職工(包括退休)共有835人患病,其中患惡性腫瘤的人數(shù)為330人,占39.52%。在接觸蔗渣粉塵的人群中,惡性腫瘤發(fā)病排在疾病譜第一位,其余依次為呼吸系統(tǒng)疾病、心血管疾病等；在其他崗位人群中,位列疾病譜前三位的分別為心血管疾病、惡性腫瘤及呼吸系統(tǒng)疾病。研究分析發(fā)現(xiàn),在接觸蔗渣粉塵的人群中,肝癌、肺癌發(fā)病的相對(duì)危險(xiǎn)度顯著上升,分別為其他崗位人群的4.30倍及2.63倍,而其他惡性腫瘤發(fā)病的相對(duì)危險(xiǎn)度上升不明顯。糖廠不同作業(yè)場(chǎng)所的空氣樣本AFB1檢測(cè)均呈陰性,但蔗渣粉塵中的AFB1檢測(cè)呈陽(yáng)性。ELISA試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果提示,在181例A組工人中,有102名工人AFB1-ALB檢測(cè)陽(yáng)性,濃度為38.51±44.80 pg/ml;B組的203名工人僅有12名陽(yáng)性,濃度為15.58±6.42 pg/ml。兩組人群血清AFB1-ALB陽(yáng)性率及濃度的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在血清AFB1-ALB陽(yáng)性的職工家中采集到的50份大米均未發(fā)現(xiàn)AFB1污染。第二部分通過(guò)新西蘭兔AFB1呼吸道暴露的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血清AFB1-ALB濃度變化與呼吸道暴露的關(guān)系目的：探討AFB1呼吸道暴露對(duì)新西蘭兔血清AFB1-ALB濃度及肝功能ALT、AST、ALP及TP的影響。方法：選取新西蘭兔60只,采取隨機(jī)分組的方法,分為高暴露組(A組,N=20)、中暴露組(B組,N=20)及低暴露組(C組,N=20)。連續(xù)7日通過(guò)呼吸道插管滴注AFB1溶液的方法,建立AFB1呼吸道暴露的動(dòng)物模型。A組、B組及C組新西蘭兔每日吸入的AFB1溶液量分別為75ug/Kg、 50ug/Kg及25ug/Kg。檢測(cè)新西蘭兔第1、第3、第7及第21日血清AFB1-ALB的濃度及肝功能ALT、AST、ALP及TP。結(jié)果：至實(shí)驗(yàn)結(jié)束,共有4只新西蘭兔死亡,包括A組3只,B組1只。A組的17只新西蘭兔中,第1日有8只(47.06%)血清AFB1-ALB檢測(cè)陽(yáng)性,濃度為3.35±1.86(1.3-6.8)pg/ml,第3天血清AFB1-ALB陽(yáng)性的新西蘭兔升至10只(58.82%),第7天為11只(64.71%),而到了第21天則降至3只(17.64%)。B組的19只新西蘭兔中,第1日有3只(15.79%)血清AFB1-ALB檢測(cè)陽(yáng)性,濃度為1.97±0.95(0.9-2.7)pg/ml,第3天血清AFB1-ALB陽(yáng)性的新西蘭兔升至5只(26.32%),第7天為5只(26.32%),而到了第21天則降至2只(10.53%)。C組未發(fā)現(xiàn)有血清AFB1-ALB檢測(cè)陽(yáng)性的新西蘭兔。經(jīng)呼吸道吸入AFB1后,血清AFB1-ALB陽(yáng)性的新西蘭兔肝功能ALT、AST、ALP及TP的值呈動(dòng)態(tài)性升高,但未發(fā)現(xiàn)血清AFB1-ALB陰性新西蘭兔肝功能的值出現(xiàn)顯著改變。我們分析了AFB1-ALB檢測(cè)陽(yáng)性新西蘭兔的肝功能,其中,第3天A組新西蘭兔的ALT、ALP的值,第7天A、B二組新西蘭兔ALT、AST、ALP、TP的值,第21天A組新西蘭兔TP的值與對(duì)照(吸入AFB1前的兔血清標(biāo)本)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。第7日的新西蘭兔肝功能ALT及AST的值與血清AFB1-ALB的值存在顯著正相關(guān)(P0.05)；但ALP及TP的值與血清AFB1-ALB的值不存在相關(guān)(P0.05)。第三部分 通過(guò)建立樹(shù)鼩AFB1呼吸道暴露的模型,進(jìn)一步了解實(shí)驗(yàn)動(dòng)物AFB1呼吸道暴露后肝臟組織形態(tài)學(xué)及P53、P21等基因表達(dá)的分子學(xué)改變目的：觀察AFB1呼吸道暴露對(duì)樹(shù)鼩肝臟P53、P21基因表達(dá)的影響及樹(shù)鼩肝組織形態(tài)學(xué)的改變,探討AFB1呼吸道暴露誘發(fā)肝癌的可能性。方法：選取健康樹(shù)鼩80只,采用隨機(jī)分組的方法,分為A組(空白組,N=40)和B組(呼吸道暴露組,N=40)。A組樹(shù)鼩只進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)喂養(yǎng),不作任何其他干預(yù)；B組樹(shù)鼩除標(biāo)準(zhǔn)喂養(yǎng)外,通過(guò)呼吸道插管的方法,給予樹(shù)鼩霧化吸入AFB1溶液,每日吸入量為200 ug/Kg/D,每周吸入AFB1溶液6次。按設(shè)計(jì)方案定期采集樹(shù)鼩血清樣本,取樹(shù)鼩肝組織活檢,檢測(cè)組織形態(tài)學(xué)改變及P53、P21基因的動(dòng)態(tài)表達(dá)情況。結(jié)果：本部分實(shí)驗(yàn)從2013年9月11號(hào)開(kāi)始,至2015年1月28號(hào)結(jié)束,共進(jìn)行了504天(72周)。在實(shí)驗(yàn)期間,B組有7只樹(shù)鼩死亡。至實(shí)驗(yàn)結(jié)束,A組未發(fā)現(xiàn)血清AFB1-ALB陽(yáng)性的樹(shù)鼩血清樣本,活檢提示未發(fā)現(xiàn)有肝組織出現(xiàn)異常改變,P53、P21基因動(dòng)態(tài)檢測(cè)未發(fā)現(xiàn)有異常表達(dá)。而B(niǎo)組第一周抽血即發(fā)現(xiàn)有8只出現(xiàn)血清AFB1-ALB陽(yáng)性,至第三周,B組全部樹(shù)鼩出現(xiàn)血清AFB1-ALB陽(yáng)性。B組樹(shù)鼩中,從第33周開(kāi)始,即發(fā)現(xiàn)肝組織有輕度炎癥反應(yīng),以炎細(xì)胞浸潤(rùn)匯管區(qū)為主,伴肝細(xì)胞點(diǎn)狀壞死,偶爾見(jiàn)灶狀及碎屑樣壞死。第43周活檢時(shí),可發(fā)現(xiàn)肝臟Kuffer細(xì)胞增生,炎細(xì)胞浸潤(rùn),還可以見(jiàn)到空泡變性或者透明變性的肝細(xì)胞。自72周時(shí),還可見(jiàn)肝組織內(nèi)結(jié)構(gòu)絮亂,伴嗜酸樣變及重度水樣變性。B組樹(shù)鼩P53、P21基因動(dòng)態(tài)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)有異常表達(dá)。通過(guò)以上的系列研究,我們可以得出以下的幾點(diǎn)結(jié)論：1,經(jīng)呼吸道吸入是AFB1進(jìn)入機(jī)體的途徑；2,血清AFB1白蛋白加合物濃度的升高與其AFB1呼吸道暴露的量及暴露的持續(xù)時(shí)間有關(guān)；3,經(jīng)呼吸道持續(xù)吸入AFB1可造成血清AFB1-ALB陽(yáng)性的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肝損害;4,AFB1呼吸道暴露是否與HCC的發(fā)生有直接聯(lián)系,值得進(jìn)一步的研究。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R735.7
【目錄】：

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【相似文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：黃曲霉毒素B1呼吸道暴露與肝癌發(fā)病關(guān)系的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：206635