高溫和甲基睪酮聯(lián)合處理對尼羅羅非魚性別分化的影響研究
發(fā)布時間：2020-12-06 20:38
尼羅羅非魚是世界上第三大養(yǎng)殖魚類,具有重要的經(jīng)濟價值。由于尼羅羅非魚的雄性生長速度比雌性快30%以上,且繁殖周期短,繁殖后代會極大影響其生長速度,進行單雄性養(yǎng)殖可以提高養(yǎng)殖效益。通過外源雄激素處理可以有效誘導(dǎo)雌性尼羅羅非魚性逆轉(zhuǎn)成雄性,然而雄激素是環(huán)境內(nèi)分泌干擾物質(zhì),會對生態(tài)環(huán)境產(chǎn)生極大的危害。另外,尼羅羅非魚的性別分化還受溫度變化控制,高溫會使一部分雌性發(fā)生性逆轉(zhuǎn)變?yōu)樾坌?我們推測高溫處理可以減少雄激素的使用量。為了探究高溫處理可以補償多少雄激素的使用量,弄清高溫及甲基睪酮聯(lián)合處理對尼羅羅非魚性別分化過程的影響,我們在尼羅羅非魚性別決定與分化的關(guān)鍵時期,通過高溫和添加濃度梯度外源雄激素的飼料共同處理尼羅羅非魚,統(tǒng)計分析了各組的雄性率,篩選出了高溫協(xié)助處理下外源雄激素添加的最低濃度;分析了在性逆轉(zhuǎn)過程中,尼羅羅非魚體內(nèi)雌雄激素水平變化情況;明確了高溫和外源雄激素處理下,參與尼羅羅非魚性別分化的關(guān)鍵基因Cyp19a1a與Dmrt1的mRNA和蛋白表達水平變化趨勢,為尼羅羅非魚的全雄養(yǎng)殖實踐提供了科學(xué)依據(jù),為羅非魚的性別控制提供了理論基礎(chǔ)。具體結(jié)果如下:1.高溫和甲基睪酮（MT）聯(lián)合處理下...
【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省
【文章頁數(shù)】：53 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
dpf性腺組織學(xué)觀察Fig.1Histologicalobservationofgonadsat91dpf
山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士專業(yè)學(xué)位論文19溫條件有效減少了激素使用量。.圖2尼羅羅非魚雄性率統(tǒng)計Fig.2NiletilapiamaleratestatisticsC+0MT，C+2MT，C+10MT，C+20MT分別代表在9dpf時，尼羅羅非魚使用含不同濃度（0mg/kg，2mg/kg，10mg/kg，20mg/kg）甲基睪酮的飼料在28°C水體中飼喂12天。T+0MT，T+2MT，T+10MT，T+20MT分別代表在9dpf時，尼羅羅非魚使用含不同濃度（0mg/kg，2mg/kg，10mg/kg，20mg/kg）甲基睪酮的飼料在36°C水體中飼喂12天。數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準差表示。（P<0.05）C+0MT,C+2MT,C+10MT,C+20MTrespectivelyrepresentat9dpf,Niletilapiawasfedinwaterat28°Cfor12dayswithdifferentconcentrationsofMT（0mg/kg，2mg/kg，10mg/kg，20mg/kg），T+0MT,T+2MT,T+10MT,T+20MTrespectivelyrepresentat9dpf,Niletilapiawasfedinwaterat36°Cfor12dayswithdifferentconcentrationsofMT（0mg/kg，2mg/kg，10mg/kg，20mg/kg），Dataareexpressedasthemean±SD.(P<0.05)3.2高溫和甲基睪酮聯(lián)合處理后內(nèi)源性雌、雄激素水平的檢測結(jié)果3.2.1尼羅羅非魚仔魚遺傳性別的鑒定對于21dpf的尼羅羅非魚仔魚，無法直接分辨雌雄，需要利用性別特異分子標(biāo)記引物SCAR進行普通PCR擴增來鑒別各組雌雄魚的遺傳性別。PCR產(chǎn)物通過瓊脂糖凝膠電泳進行檢測，結(jié)果如圖3所示，遺傳性別為雌性的羅非魚只有一條帶，長度為1151bp；遺傳性別為雄性的羅非魚則有兩條帶，長度分別為1151bp、711bp。
高溫和甲基睪酮聯(lián)合處理對尼羅羅非魚性別分化的影響研究20圖3尼羅羅非魚遺傳性別鑒定Fig.3Niletilapiageneticsexidentification.注：M：DL1000DNAMarker：XX：雌性尼羅羅非魚；XY：雄性尼羅羅非魚Note:M：DL1000DNAMarker：XX：FemaleNiletilapia；XY：MaleNiletilapia3.2.2高溫和甲基睪酮聯(lián)合處理對尼羅羅非魚體內(nèi)E2水平的影響使用ELISA法檢測21dpf尼羅羅非魚體內(nèi)雌激素E2水平。除了XY組是檢測對照雄魚（28℃，0mg/kgMT）體內(nèi)的E2水平，其他組均是檢測不同處理組雌魚體內(nèi)的E2水平。以分析誘導(dǎo)雌性發(fā)生性逆轉(zhuǎn)的過程中，高溫和甲基睪酮處理對內(nèi)源性雌激素E2水平的影響。體內(nèi)E2水平檢測結(jié)果如圖4。由圖4可見，所有雌魚組E2水平都顯著高于XY組。無甲基睪酮條件下，高溫處理組（T+0MT）E2水平顯著高于對照溫度組（C+0MT），說明高溫條件顯著下調(diào)了羅非魚體內(nèi)的E2水平。無論高溫組還是對照組，隨著飼料中MT濃度的增加，E2水平皆呈下降趨勢，但隨著MT濃度的增加，E2水平下降趨勢不明顯。說明甲基睪酮處理會下調(diào)羅非魚體內(nèi)的E2水平。另外，高溫對照組（0MT）的E2水平低于低溫20MT組，說明高溫下調(diào)E2水平的效果比甲基睪酮處理更顯著。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]石斑魚性逆轉(zhuǎn)研究現(xiàn)狀[J]. 邢晨光,金珊,袁思平. 水產(chǎn)科學(xué). 2006(04)
[2]魚類人工性別控制[J]. 郝漢舟,楊桂軍,謝從新. 水產(chǎn)科學(xué). 2004(07)
[3]脊椎動物性別決定和分化的分子機制研究進展[J]. 周林燕,張修月,王德壽. 動物學(xué)研究. 2004(01)
[4]提高奧尼羅非魚雄性率的主要措施[J]. 趙永志. 水產(chǎn)養(yǎng)殖. 2001(04)
[5]魚類性別決定及其機制的研究進展[J]. 王德壽,吳天利,張耀光. 西南師范大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2000(03)
[6]激素誘導(dǎo)羅非魚雄性化的試驗研究[J]. 錢暉,楊文. 淡水漁業(yè). 1993(04)
碩士論文
[1]外源補償高溫下調(diào)的雌二醇水平對尼羅羅非魚性比及表達的影響研究[D]. 許高朋.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2019
[2]高溫下調(diào)雌二醇在尼羅羅非魚基因—溫度性別決定中的作用及機制研究[D]. 滕建.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2019
[3]雌、雄激素對羅非魚性別分化和性腺基因表達的影響[D]. 陳立黎.西南大學(xué) 2016
[4]性類固醇激素在尼羅羅非魚性別決定與分化中的作用[D]. 蔣小龍.西南大學(xué) 2014
本文編號：2901995
【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省
【文章頁數(shù)】：53 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
dpf性腺組織學(xué)觀察Fig.1Histologicalobservationofgonadsat91dpf
山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士專業(yè)學(xué)位論文19溫條件有效減少了激素使用量。.圖2尼羅羅非魚雄性率統(tǒng)計Fig.2NiletilapiamaleratestatisticsC+0MT，C+2MT，C+10MT，C+20MT分別代表在9dpf時，尼羅羅非魚使用含不同濃度（0mg/kg，2mg/kg，10mg/kg，20mg/kg）甲基睪酮的飼料在28°C水體中飼喂12天。T+0MT，T+2MT，T+10MT，T+20MT分別代表在9dpf時，尼羅羅非魚使用含不同濃度（0mg/kg，2mg/kg，10mg/kg，20mg/kg）甲基睪酮的飼料在36°C水體中飼喂12天。數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準差表示。（P<0.05）C+0MT,C+2MT,C+10MT,C+20MTrespectivelyrepresentat9dpf,Niletilapiawasfedinwaterat28°Cfor12dayswithdifferentconcentrationsofMT（0mg/kg，2mg/kg，10mg/kg，20mg/kg），T+0MT,T+2MT,T+10MT,T+20MTrespectivelyrepresentat9dpf,Niletilapiawasfedinwaterat36°Cfor12dayswithdifferentconcentrationsofMT（0mg/kg，2mg/kg，10mg/kg，20mg/kg），Dataareexpressedasthemean±SD.(P<0.05)3.2高溫和甲基睪酮聯(lián)合處理后內(nèi)源性雌、雄激素水平的檢測結(jié)果3.2.1尼羅羅非魚仔魚遺傳性別的鑒定對于21dpf的尼羅羅非魚仔魚，無法直接分辨雌雄，需要利用性別特異分子標(biāo)記引物SCAR進行普通PCR擴增來鑒別各組雌雄魚的遺傳性別。PCR產(chǎn)物通過瓊脂糖凝膠電泳進行檢測，結(jié)果如圖3所示，遺傳性別為雌性的羅非魚只有一條帶，長度為1151bp；遺傳性別為雄性的羅非魚則有兩條帶，長度分別為1151bp、711bp。
高溫和甲基睪酮聯(lián)合處理對尼羅羅非魚性別分化的影響研究20圖3尼羅羅非魚遺傳性別鑒定Fig.3Niletilapiageneticsexidentification.注：M：DL1000DNAMarker：XX：雌性尼羅羅非魚；XY：雄性尼羅羅非魚Note:M：DL1000DNAMarker：XX：FemaleNiletilapia；XY：MaleNiletilapia3.2.2高溫和甲基睪酮聯(lián)合處理對尼羅羅非魚體內(nèi)E2水平的影響使用ELISA法檢測21dpf尼羅羅非魚體內(nèi)雌激素E2水平。除了XY組是檢測對照雄魚（28℃，0mg/kgMT）體內(nèi)的E2水平，其他組均是檢測不同處理組雌魚體內(nèi)的E2水平。以分析誘導(dǎo)雌性發(fā)生性逆轉(zhuǎn)的過程中，高溫和甲基睪酮處理對內(nèi)源性雌激素E2水平的影響。體內(nèi)E2水平檢測結(jié)果如圖4。由圖4可見，所有雌魚組E2水平都顯著高于XY組。無甲基睪酮條件下，高溫處理組（T+0MT）E2水平顯著高于對照溫度組（C+0MT），說明高溫條件顯著下調(diào)了羅非魚體內(nèi)的E2水平。無論高溫組還是對照組，隨著飼料中MT濃度的增加，E2水平皆呈下降趨勢，但隨著MT濃度的增加，E2水平下降趨勢不明顯。說明甲基睪酮處理會下調(diào)羅非魚體內(nèi)的E2水平。另外，高溫對照組（0MT）的E2水平低于低溫20MT組，說明高溫下調(diào)E2水平的效果比甲基睪酮處理更顯著。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]石斑魚性逆轉(zhuǎn)研究現(xiàn)狀[J]. 邢晨光,金珊,袁思平. 水產(chǎn)科學(xué). 2006(04)
[2]魚類人工性別控制[J]. 郝漢舟,楊桂軍,謝從新. 水產(chǎn)科學(xué). 2004(07)
[3]脊椎動物性別決定和分化的分子機制研究進展[J]. 周林燕,張修月,王德壽. 動物學(xué)研究. 2004(01)
[4]提高奧尼羅非魚雄性率的主要措施[J]. 趙永志. 水產(chǎn)養(yǎng)殖. 2001(04)
[5]魚類性別決定及其機制的研究進展[J]. 王德壽,吳天利,張耀光. 西南師范大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2000(03)
[6]激素誘導(dǎo)羅非魚雄性化的試驗研究[J]. 錢暉,楊文. 淡水漁業(yè). 1993(04)
碩士論文
[1]外源補償高溫下調(diào)的雌二醇水平對尼羅羅非魚性比及表達的影響研究[D]. 許高朋.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2019
[2]高溫下調(diào)雌二醇在尼羅羅非魚基因—溫度性別決定中的作用及機制研究[D]. 滕建.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2019
[3]雌、雄激素對羅非魚性別分化和性腺基因表達的影響[D]. 陳立黎.西南大學(xué) 2016
[4]性類固醇激素在尼羅羅非魚性別決定與分化中的作用[D]. 蔣小龍.西南大學(xué) 2014
本文編號：2901995
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