流蘇體細胞胚發(fā)生及莖段再生體系的構(gòu)建
發(fā)布時間：2020-12-06 12:34
流蘇（Chionanthus retusus）是木樨科（Oleaceae）流蘇樹屬（Chionanthus）植物,國家二級珍稀植物,落葉灌木或喬木,集食用、藥用、觀賞和經(jīng)濟價值于一身。其耐鹽、耐旱、耐寒,對復雜的南北方氣候具有較強的適應能力。目前流蘇傳統(tǒng)繁殖方式主要以播種繁殖為主,生產(chǎn)周期較長,發(fā)芽率較低,為推進流蘇無性系快速發(fā)展,進行以下研究。本試驗首先以流蘇幼胚為外植體,通過開展流蘇體細胞胚發(fā)生的相關研究,篩選出了較為合適的培養(yǎng)基與培養(yǎng)條件,培養(yǎng)出了流蘇體細胞胚再生植株;其次通過測定流蘇體細胞胚不同發(fā)育階段主要生理生化指標進一步揭示其生理機理;最后以莖段為外植體,確定了莖段快速繁殖技術的培養(yǎng)基及不同激素配比。研究結(jié)果如下:1、流蘇幼胚體細胞胚發(fā)生（1）流蘇幼胚體細胞胚誘導最適培養(yǎng)基:WPM+1.0 mg/L 6-BA+2.0 mg/L 2,4-D,體細胞胚誘導率可達12.36%。（2）最適誘導流蘇體細胞胚萌發(fā)成苗培養(yǎng)基:MS+1.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L GA3,萌發(fā)率可達41.3%,成苗率為29.82%。（3）通過設置不同暗培養(yǎng)時間0 d,3...
【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學山東省
【文章頁數(shù)】：61 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
不同植物生長調(diào)節(jié)劑對體細胞胚誘導的影響
流蘇體細胞胚發(fā)生及莖段再生體系的構(gòu)建183.1.4基本培養(yǎng)基對流蘇體細胞胚萌發(fā)成苗的影響由表10可以看出，流蘇體細胞胚萌發(fā)率及成苗率與基礎培養(yǎng)基類型具有顯著關系，萌發(fā)率方面：MS>WPM>B5，萌發(fā)率分別為26.78%、16.10%、5.16%；成苗率情況：MS>WPM>B5,萌發(fā)率分別為11.25%、7.05%、0.32%。在B5培養(yǎng)基上難以萌發(fā)成苗，WPM培養(yǎng)基萌發(fā)率較低，成苗情況較差。MS培養(yǎng)基與其他培養(yǎng)基誘導萌發(fā)成苗情況差異顯著。如圖3-A，將已發(fā)育成熟顏色轉(zhuǎn)綠的子葉形體細胞胚接種至MS培養(yǎng)基7d后，胚根長出，子葉膨大（見圖2-A），培養(yǎng)至30d后胚芽萌發(fā)長出（見圖2-B），胚根伸長至3cm左右，再培養(yǎng)60d長成完整植株（見圖2-C）。經(jīng)過多重比較與方差性分析，選擇用MS培養(yǎng)基時，萌發(fā)率與成苗率均與其他培養(yǎng)基呈現(xiàn)顯著差異（P<0.05），因此MS培養(yǎng)基最適誘導流蘇體細胞胚萌發(fā)成苗。表10基本培養(yǎng)基對流蘇體細胞胚萌發(fā)成苗的影響Table10EffectofbasicmediumonthegerminationandseedlingformationofsomaticembryoofChionanthusretusus組別Group基本培養(yǎng)基basalculturemedium萌發(fā)率Germinationrate（%）成苗率Seedlingrate（%）1B55.16±1.13c0.32±1.12c2WPM16.10±1.16b7.05±1.16b3MS26.78±2.78a11.25±3.02c圖2流蘇體細胞胚萌發(fā)成苗過程Fig.2ProcessofsomaticembryogerminationandseedlingformationofChionanthusretusus。A、接種至MS培養(yǎng)基7d后胚根長出B、30d胚芽萌發(fā)C100d長成3cm左右無菌苗3.1.5不同生長調(diào)節(jié)劑對流蘇體細胞胚萌發(fā)成苗的影響由表11可以看出，以MS及基本培養(yǎng)基，單獨添加1.0mg/L6-BA，培養(yǎng)7d后有胚根長出，體細胞胚萌發(fā)率為30.21%，成苗率為13.2%。保持6-BA濃度1.0mg/L不變，ABC
流蘇體細胞胚發(fā)生及莖段再生體系的構(gòu)建203.1.6.2體細胞胚發(fā)生過程中可溶性蛋白含量的變化由圖4可以看出，可溶性蛋白在幼胚體細胞胚發(fā)生過程中呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢�？扇苄缘鞍缀吭�0-45d平穩(wěn)上升，表明幼胚非胚性愈傷組織向胚性愈傷組織轉(zhuǎn)變過程中，可溶性蛋白得到積累；在45-60d時，可溶性蛋白含量顯著上升，并在60d時達到峰值為4.18mg/g，此時處于體細胞胚分化初期；在60-90d可溶性蛋白含量下降，在90d時可溶性蛋白含量為1.1mg/g，表明在幼胚體細胞胚分化后期及萌發(fā)過程中可溶性蛋白質(zhì)被消耗。圖4體胚發(fā)生過程中可溶性蛋白含量的變化Fig4Changesofsolublesugarincallus圖3體胚發(fā)生過程中可溶性糖含量的變化Fig3Changesofsolublesugarincallus
本文編號：2901375
【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學山東省
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【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
不同植物生長調(diào)節(jié)劑對體細胞胚誘導的影響
流蘇體細胞胚發(fā)生及莖段再生體系的構(gòu)建183.1.4基本培養(yǎng)基對流蘇體細胞胚萌發(fā)成苗的影響由表10可以看出，流蘇體細胞胚萌發(fā)率及成苗率與基礎培養(yǎng)基類型具有顯著關系，萌發(fā)率方面：MS>WPM>B5，萌發(fā)率分別為26.78%、16.10%、5.16%；成苗率情況：MS>WPM>B5,萌發(fā)率分別為11.25%、7.05%、0.32%。在B5培養(yǎng)基上難以萌發(fā)成苗，WPM培養(yǎng)基萌發(fā)率較低，成苗情況較差。MS培養(yǎng)基與其他培養(yǎng)基誘導萌發(fā)成苗情況差異顯著。如圖3-A，將已發(fā)育成熟顏色轉(zhuǎn)綠的子葉形體細胞胚接種至MS培養(yǎng)基7d后，胚根長出，子葉膨大（見圖2-A），培養(yǎng)至30d后胚芽萌發(fā)長出（見圖2-B），胚根伸長至3cm左右，再培養(yǎng)60d長成完整植株（見圖2-C）。經(jīng)過多重比較與方差性分析，選擇用MS培養(yǎng)基時，萌發(fā)率與成苗率均與其他培養(yǎng)基呈現(xiàn)顯著差異（P<0.05），因此MS培養(yǎng)基最適誘導流蘇體細胞胚萌發(fā)成苗。表10基本培養(yǎng)基對流蘇體細胞胚萌發(fā)成苗的影響Table10EffectofbasicmediumonthegerminationandseedlingformationofsomaticembryoofChionanthusretusus組別Group基本培養(yǎng)基basalculturemedium萌發(fā)率Germinationrate（%）成苗率Seedlingrate（%）1B55.16±1.13c0.32±1.12c2WPM16.10±1.16b7.05±1.16b3MS26.78±2.78a11.25±3.02c圖2流蘇體細胞胚萌發(fā)成苗過程Fig.2ProcessofsomaticembryogerminationandseedlingformationofChionanthusretusus。A、接種至MS培養(yǎng)基7d后胚根長出B、30d胚芽萌發(fā)C100d長成3cm左右無菌苗3.1.5不同生長調(diào)節(jié)劑對流蘇體細胞胚萌發(fā)成苗的影響由表11可以看出，以MS及基本培養(yǎng)基，單獨添加1.0mg/L6-BA，培養(yǎng)7d后有胚根長出，體細胞胚萌發(fā)率為30.21%，成苗率為13.2%。保持6-BA濃度1.0mg/L不變，ABC
流蘇體細胞胚發(fā)生及莖段再生體系的構(gòu)建203.1.6.2體細胞胚發(fā)生過程中可溶性蛋白含量的變化由圖4可以看出，可溶性蛋白在幼胚體細胞胚發(fā)生過程中呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢�？扇苄缘鞍缀吭�0-45d平穩(wěn)上升，表明幼胚非胚性愈傷組織向胚性愈傷組織轉(zhuǎn)變過程中，可溶性蛋白得到積累；在45-60d時，可溶性蛋白含量顯著上升，并在60d時達到峰值為4.18mg/g，此時處于體細胞胚分化初期；在60-90d可溶性蛋白含量下降，在90d時可溶性蛋白含量為1.1mg/g，表明在幼胚體細胞胚分化后期及萌發(fā)過程中可溶性蛋白質(zhì)被消耗。圖4體胚發(fā)生過程中可溶性蛋白含量的變化Fig4Changesofsolublesugarincallus圖3體胚發(fā)生過程中可溶性糖含量的變化Fig3Changesofsolublesugarincallus
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