發(fā)布時(shí)間：2020-12-07 23:03

　　辣椒（Capsicum ssp.）是深受人們青睞的蔬菜和調(diào)味品,果實(shí)具有獨(dú)特的辛辣味,其成分是辣椒素類(lèi)物質(zhì);同時(shí),辣椒素類(lèi)物質(zhì)又是重要的次生代謝物,具有抗癌、鎮(zhèn)痛和減肥等醫(yī)療和保健作用。目前栽培辣椒（Capsicum annuum）果實(shí)辣椒素含量很低,通過(guò)怎樣途徑促進(jìn)辣椒素合成和積累,為辣椒素提取提供優(yōu)質(zhì)原料成為重要研究課題。辣椒基因組測(cè)序已經(jīng)完成,辣椒素途徑已經(jīng)明確。Pun1是辣椒素合成途徑中關(guān)鍵基因,它決定果實(shí)辣味的有無(wú)和辣椒素含量的多少,因此,研究該基因的表達(dá)調(diào)控,為解析辣椒素生物合成調(diào)控的分子機(jī)理,為辣椒種質(zhì)資源遺傳改良提供重要理論依據(jù)。為此,本論文對(duì)AP2/ERF家族轉(zhuǎn)錄因子與辣椒素生物合成關(guān)鍵基因Pun1的關(guān)系進(jìn)行了探討,主要研究結(jié)果如下:1.ERF/JERF轉(zhuǎn)錄因子的克隆和生物信息學(xué)分析在辣椒中克隆出ERF家族轉(zhuǎn)錄因子名為ERF和JERF的兩個(gè)基因,Gen Bank登錄號(hào)分別為KF060657,KF169943。ERF基因全長(zhǎng)950bp,編碼264個(gè)氨基酸,在序列533-706位置編碼一個(gè)含有58個(gè)氨基酸的AP2結(jié)構(gòu)域。JERF基因全長(zhǎng)1219bp,編碼145個(gè)氨基酸,在... 

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【文章頁(yè)數(shù)】：101 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 辣椒和辣椒素
        1.1.1 辣椒
        1.1.2 辣椒素
    1.2 辣椒素的生物合成及Pun1基因
        1.2.1 辣椒素的生物合成及途徑
        1.2.2 Pun1基因表達(dá)及與辣椒素合成關(guān)系
    1.3 AP2/ERF家族轉(zhuǎn)錄因子研究進(jìn)展
        1.3.1 轉(zhuǎn)錄因子概述
        1.3.2 AP2/ERF轉(zhuǎn)錄因子的起源與分類(lèi)
        1.3.3 AP2/ERF轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)與功能
    1.4 立題依據(jù)
第2章 ERF和JERF的克隆與生物信息學(xué)分析
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 載體與菌株信息
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)藥品與培養(yǎng)基的配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 辣椒的總RNA提取
        2.2.2 cDNA第一鏈合成
        2.2.3 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）擴(kuò)增目的基因
        2.2.4 PCR產(chǎn)物的回收
        2.2.5 載體質(zhì)粒的提取
        2.2.6 載體的酶切與線性化載體的回收
        2.2.7 目的片段與載體的連接反應(yīng)
        2.2.8 重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化
        2.2.9 菌液PCR鑒定
        2.2.10 重組質(zhì)粒提取
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 辣椒的總RNA提取與cDNA第一鏈的合成
        2.3.2 目的基因的擴(kuò)增與回收
        2.3.3 載體的切割與回收
        2.3.4 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.3.5 生物信息學(xué)分析
            2.3.5.1 ERF轉(zhuǎn)錄因子分析
                2.3.5.1.1 蛋白分析
                2.3.5.1.2 功能域分析
                2.3.5.1.3 亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)
                2.3.5.1.4 蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)分析
                2.3.5.1.5 磷酸化位點(diǎn)分析
                2.3.5.1.6 同源性分析
            2.3.5.2 JERF轉(zhuǎn)錄因子分析
                2.3.5.2.1 蛋白分析
                2.3.5.2.2 功能域分析
                2.3.5.2.3 亞細(xì)胞定位分析
                2.3.5.2.4 蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)分析
                2.3.5.2.5 磷酸化位點(diǎn)分析
                2.3.5.2.6 同源性分析
第3章 ERF和JERF的表達(dá)分析
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 主要藥品與試劑
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 總RNA的提取
        3.2.2 cDNA第一鏈的合成
        3.2.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        3.2.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR引物
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 辣椒果實(shí)的總RNA提取與質(zhì)量檢測(cè)
        3.3.2 ERF和JERF基因與下游基因表達(dá)量分析
            3.3.2.1 衡陽(yáng)伏地尖品種（Capsicum annuum ）
            3.3.2.2 云南小米辣品種（Capsicum frutescens ）
            3.3.2.3 海南黃燈籠椒品種（Capsicum chinense ）
第4章 Pun1基因啟動(dòng)子片段的克隆與生物信息學(xué)分析
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 植物材料
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)菌株與載體
        4.1.3 主要儀器
        4.1.4 主要試劑與培養(yǎng)基配制
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 辣椒基因組DNA的提取
        4.2.2 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增啟動(dòng)子片段
        4.2.3 PCR產(chǎn)物的回收
        4.2.4 載體質(zhì)粒的提取
        4.2.5 載體的酶切與線性化載體的回收
        4.2.6 啟動(dòng)子片段與報(bào)告載體的連接反應(yīng)
        4.2.7 重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化
        4.2.8 菌液PCR鑒定
        4.2.9 重組質(zhì)粒提取
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 辣椒的基因組DNA提取
        4.3.2 啟動(dòng)子片段的擴(kuò)增與回收
        4.3.3 載體的酶切與回收
        4.3.4 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        4.3.5 生物信息學(xué)分析
第5章 ERF家族轉(zhuǎn)錄因子與Pun1相互作用的驗(yàn)證
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.1 實(shí)驗(yàn)菌株與重組載體
        5.1.2 主要試劑
        5.1.3 實(shí)驗(yàn)藥品與培養(yǎng)基的配制
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 酵母菌株感受態(tài)細(xì)胞的制備
        5.2.2 目標(biāo)質(zhì)粒的單酶切與回收
        5.2.3 線性目標(biāo)質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化
        5.2.4 PCR鑒定
        5.2.5 報(bào)告質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化
        5.2.6 PCR鑒定
        5.2.7 顯色反應(yīng)實(shí)驗(yàn)
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 目標(biāo)質(zhì)粒的單酶切與回收
        5.3.2 菌液PCR驗(yàn)證
        5.3.3 液體顯色實(shí)驗(yàn)結(jié)果
第6章 討論與結(jié)論
    6.1 討論
        6.1.1 基因與啟動(dòng)子片段的克隆
        6.1.2 表達(dá)量分析
        6.1.3 酵母單雜實(shí)驗(yàn)
        6.1.4 展望
    6.2 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：2904034