發(fā)布時間：2020-12-18 23:59

　　F-box是真核生物中普遍存在的最大的蛋白質(zhì)家族之一,主要在SCF復合體中負責待降解底物的特異性識別。在擬南芥中已揭示該家族部分成員的功能,但其在小麥中的功能研究報道較少。本研究在篩選小麥逆境相關(guān)轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫的基礎(chǔ)上,利用生物信息學、qRT-PCR、酵母雙雜交、BiFC和Co-IP等技術(shù),借助于熒光顯微觀察、超表達分析和亞細胞定位等手段,對F-box基因TaPP2-A13和TaSKIP27參與小麥TcLr15的逆境響應(yīng)過程及與其互作的蛋白進行了分析和鑒定。取得的主要研究結(jié)果如下:1.獲得了小麥F-box基因TaPP2-A13和TaSKIP27的全長編碼區(qū),預(yù)測其編碼蛋白分別為 298 aa 和 164 aa。其中TaPP2-A13屬于 F-box/PP2 亞家族（FBP）,TaSKIP27屬于未知功能結(jié)構(gòu)域亞家族（FBU）。兩個基因所編碼的蛋白在小麥近緣種屬中進化比較保守。2.在小麥TcLr15中,經(jīng)MeJA、SA和ABA三種激素處理后,TaPP2-A13基因均明顯地上調(diào),其中ABA誘發(fā)表達最早,而SA誘導表達最強;TaSKIP27基因在MeJA處理后變化不明顯,而在ABA和SA處理后... 

【文章來源】：河北農(nóng)業(yè)大學河北省

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２?和７Ｖ／ＳＡ：／Ｐ２７ｃ：ＤＮＡ全長序列擴增結(jié)果??：ａｒｅｒ：７？（１：

?河北農(nóng)業(yè)大學碩士學位（畢業(yè)）論文???Ａ?Ｃ??ｆ￣?＼?ｐ－ｂｏｘ?卜’巧巧卿觀?ｐｐ２??Ｂ??ｉｉ＾０ｍ｜｜ｉｉｉ｜｜｜ｍ｜＾??５０?１?明?１５６?７ｍ?Ｖ？?＾?￣?－?－?－?—?＇??圖３小麥ＴａＰＰ２－Ａ１３序列特征分析??Ａ：?ＴａＰＰ２－Ａ１３結(jié)構(gòu)域預(yù)測；Ｂ：?ＴａＰＰ２－Ａ１３二級結(jié)構(gòu)預(yù)測；Ｃ：?ＴａＰＰ２－Ａ丨３三維模型預(yù)測??Ｆｉｇｕｒｅ?３?Ｓｅｑｕｅｎｃｅ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｗｈｅａｔ?ＴａＰＰ２－Ａ１３??Ａ：?Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ＴａＰＰ２－Ａ１３?ｄｏｍａｉｎ；?Ｂ：?Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ＴａＰＰ２－Ａ１３?ｓｅｃｏｎｄａｒｙ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ；?Ｃ：?Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ?ｏｆ??ＴａＰＰ２－Ａ１３?３Ｄ?ｍｏｄｅｌ??以ｒ？ＰＰ２－ＡＪ為輸入序列，在ＮＣＢＩ網(wǎng)站上進行ＢＬＡＳＴｘ比對，結(jié)果表明，該序列與普通小??安Ｄ染色體組的供體種一粗山羊草（ｄｅｇ／／ｏ／ｗ?登錄號ＸＰ＿０２０１８７１７８．１?）的ＡｅｔＰＰ２－Ａ１３－ｌｉｋｅ??相似性域高，為丨００％，其次｜）＿：德短柄草（５陽（：／？＞＾〇￡／／；？？而恤／＾〇／７，登錄號＼？＿０１０２４０２８１．１）??中對丨、＾序列的相似性為９０．６６％。與短花藥野生稻，登錄號ＸＰ」）０６６５２６６３．１，??８４．８７％）、印度粳稻／Ｗ／ｃａ?Ｇｒｏｗ／；，登錄號?ＥＥＣ７７８２６．１，?８３．９９％）和彎葉畫眉草??ＣｆｒａｇｎｗｔｏｃｗｎＷａ，登錄號?ＴＶＵ１６１０３．１，?８１．７２％）的?ＰＰ２－Ａ１３／ＰＰ２－Ａ１３－ｌｉｋｅ?相似性均大于?８

應(yīng)答模式及互作蛋白鑒定???３．２．２?ＴａＳＫＩＰ２７?為?ＦＢＵ?類?Ｆ－ｂｏｘ?蛋白??由ＷｈｅａｔＥｘｐ中的編號ＴｒａｅｓＣＳ２Ｄ０２Ｇ２１１０００．１可知，基因位于小麥２Ｄ染色體上。??使用ＤＮＡｓｔａｒ等軟件對ｒａＳＡ７Ｐ２７基因編碼的蛋白序列進行分析，發(fā)現(xiàn)７ｂＳＡ７尸２７基因ＯＲＦ大小??為４９５?ｂｐ，編碼蛋白大小為１６４個氨基酸，其預(yù)測分子量大小為１７．６０?ｋＤ，理論等電點是９．６０。??結(jié)構(gòu)域分析表明，ＴａＳＫＩＰ２７蛋白第６６？１００位是Ｆ－ｂｏｘ結(jié)構(gòu)域（圖６Ａ），除了?Ｆ－ｂｏｘ結(jié)構(gòu)域外，??該蛋白序列中再無其他結(jié)構(gòu)域，因此７ｂ從７Ｐ２７屬于Ｆ－ｂｏｘ蛋白家族ＦＢＵ亞家族。經(jīng)預(yù)測，??ＴａＳＫｌＰ２７蛋白不含信號肽序列和跨膜結(jié)構(gòu)域。該蛋白二級結(jié)構(gòu)中ａ－螺旋占４３．２９％，?ｐ－轉(zhuǎn)角占??１．８３％，無規(guī)則卷曲和延伸鏈分別為４２．６８％和１２．２％?（圖６Ｂ），蛋白親疏水性預(yù)測顯示ＴａＳＫＩＰ２７??為親水性蛋白。由－：維結(jié)構(gòu)預(yù)測可見，該蛋白主要由ａ－螺旋、無規(guī)則卷曲和延伸鏈構(gòu)成（圖６Ｃ），??４?級預(yù)測結(jié)果基本一致，且三維結(jié)構(gòu)趨近于圓球形，符合其蛋白的親水性特征。??Ａ?Ｃ??１６４??Ｉ?????＂＂＇＂－？＂ｉ?Ｆ－ｂｏｘ?ｒ…ｖ＇？．．．＇一巧＇ｒ?????Ｉ?！?：?ｉ?；?Ｉ?）：�。欤椋。椋颍椋。�?ｉ?！；：?■?｜｜！?Ｕ?Ｍ?Ｍｌｉ：丨，ｌｌ“：??２８?４６?６ｆｌ?０８?１０８?１２８??圖６小麥ＴａＳＫｌＰ２７序列特征分析??Ａ：?ＴａＳＫＩＰ２７結(jié)構(gòu)域Ｍ測；Ｂ：?ＴａＳＭＰ２７?：級結(jié)構(gòu)預(yù)測；Ｃ：?ＴａＳＫＩＰ２７?維校吧Ｍ測??Ｆｉｇｕｒｅ

【參考文獻】：
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博士論文
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碩士論文
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本文編號：2924847