發(fā)布時(shí)間：2020-12-19 19:19

　　本論文以刺參生殖發(fā)育相關(guān)神經(jīng)肽的功能基因篩選及活性研究為核心,通過生物信息學(xué)分析、分子克隆、細(xì)胞水平的活性驗(yàn)證及生理功能評(píng)價(jià),開展較為系統(tǒng)的研究探索,以期為刺參生殖發(fā)育的神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)控研究奠定基礎(chǔ)。具體基于刺參基因組、轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)篩選到4條刺參生殖發(fā)育相關(guān)神經(jīng)肽編碼基因,并重點(diǎn)圍繞刺參Kisspeptin神經(jīng)肽,初步闡明了分子結(jié)構(gòu)、活性特征及生理功能。主要研究成果如下:1、篩選獲得4條刺參生殖調(diào)控相關(guān)的神經(jīng)肽樣蛋白編碼基因序列（AjKisspeptin、NPS/CCAP型肽（NG）、F-likeSALMF（FS）、L-likeSALMF（LS））。其中刺參kisspepetin前體肽ORF區(qū)長543bp,預(yù)測編碼180個(gè)氨基酸長度的前體肽,包含長23aa信號(hào)肽、兩段長度分別為32aa（AjKiss1a（AGSLDcEDVERRGRQPNRNAHYRTLPF-NH₂））和18aa（AjKiss1b（SAVKNKNKSRARPPLLPF-NH₂））的成熟肽。預(yù)測其前體肽的等電點(diǎn)（pI）為4.90,分子量（Mw）為20.283 kD。通過熒光定量基因... 

【文章來源】：浙江海洋大學(xué)浙江省

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

以HPG軸為核心的生殖調(diào)控網(wǎng)絡(luò)模型

技術(shù)路線

刺參生殖相關(guān)神經(jīng)肽發(fā)掘及功能研究16圖2.1AjKisspeptin前體肽編碼基因的編碼區(qū)及預(yù)測的氨基酸序列。藍(lán)色表示信號(hào)肽，方框表示起始密碼子，星號(hào)表示終止密碼子，綠色方框表示預(yù)測到的切割位點(diǎn)，紅色方框表示成熟肽，黃色方框表示切割后殘留的C端甘氨酸殘基Fig2.1TheCDSandpredictedaminoacidsequenceoftheAjKisspeptinprecursorgene.Blueindicatessignalpeptide,boxindicatesstartcodon,asteriskindicatesstopcodon,greenboxindicatespredictedcleavagesite,redboxindicatesmaturepeptide,yellowboxindicatesC-terminalglycineremainingaftercleavageResidues2.3.1.2氨基酸同源性和系統(tǒng)發(fā)育分析為了探究新發(fā)的AjKisspeptin與其它物種Kisspeptin的近緣關(guān)系，從NCBI數(shù)據(jù)庫中篩選到8條不同物種的Kisspeptin氨基酸序列（負(fù)鼠（Monodelphisdomestic）、智人（Homosapines）、非洲爪蟾（Xenopuslaevis）、石斑魚（Epinehelusbruneus）、金魚（Carassiusauratus）、斑馬魚（Daniorerio）、海星（Ophionotunvictorae））用MEGA5.0軟件，以最大似然法（ML），重復(fù)1000次，構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹（圖2.2）。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Kisspeptin在進(jìn)化中明顯的分為兩支，一支是脊椎動(dòng)物分支，另一支為無脊椎動(dòng)物分支，恰好與這些動(dòng)物類群的分類階元和進(jìn)化地位相一致。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：2926435