發(fā)布時(shí)間：2020-12-19 21:04

　　甜瓜（Cucumis melo L.）品種河套蜜瓜是葫蘆科的雙子葉二倍體植物,其果實(shí)是典型的呼吸躍變型果實(shí),是內(nèi)蒙古西部的特色作物,具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。CmRMA1H1基因?qū)儆赗ING型E3泛素連接酶家族,對(duì)植物激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和逆境脅迫等方面有調(diào)控作用。本論文以河套蜜瓜為實(shí)驗(yàn)材料,克隆了CmRMA1H1基因序列,進(jìn)行了亞細(xì)胞定位,對(duì)其進(jìn)行生物信息學(xué)分析顯示,其啟動(dòng)子區(qū)存在RAV2轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控元件,利用酵母單雜交對(duì)其進(jìn)行了驗(yàn)證;構(gòu)建超表達(dá)和CRISPR/cas9編輯載體,采用花粉管通道法轉(zhuǎn)化甜瓜,對(duì)T₁代果實(shí)和幼苗分別進(jìn)行成熟表型鑒定和脅迫耐受性分析。主要研究結(jié)果如下:（1）克隆CmRMA1H1基因cDNA序列,克隆片段的ORF全長(zhǎng)為723 bp,共編碼241個(gè)氨基酸。生物信息學(xué)分析表明,CmRMA1H1蛋白為疏水性、熱不穩(wěn)定蛋白,含有信號(hào)肽剪切位點(diǎn)、跨膜結(jié)構(gòu)域、磷酸化位點(diǎn);蛋白質(zhì)含有一個(gè)高度保守的RING finger結(jié)構(gòu)域;啟動(dòng)子區(qū)域含有脫落酸、茉莉酸、赤霉素、干旱、乙烯等應(yīng)答元件,猜測(cè)CmRMA1H1可能參與調(diào)控果實(shí)成熟和脅迫響應(yīng);系統(tǒng)進(jìn)化樹發(fā)現(xiàn)甜瓜與... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：111 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

泛素化過程[22]

E3泛素連接酶的分類[35]

甜瓜泛素連接酶基因CmRMA1H1在果實(shí)成熟中功能的初步分析8TIR1和AFB1是生長(zhǎng)素受體蛋白，SCF（TIR1/AFB）復(fù)合體在生長(zhǎng)素存在的條件下泛素化降解下游轉(zhuǎn)錄抑制因子Aux/IAA家族[67-68]，調(diào)控生長(zhǎng)素合成過程中基因的表達(dá)。UPS對(duì)乙烯的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)也有調(diào)控作用，與其他激素降解轉(zhuǎn)錄抑制因子不同，對(duì)乙烯轉(zhuǎn)導(dǎo)的調(diào)控方式是維持正轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子EIN3和EIL1的穩(wěn)定[69]，主要通過抑制SCF(EBF1/2)活性[70]和降解F-box中的EBF1和EBF2[71]實(shí)現(xiàn)。除了直接參與乙烯的感知，一種BTB蛋白ETO1還可以通過靶定ACS5調(diào)節(jié)乙烯的水平[72]。茉莉酸在調(diào)節(jié)生長(zhǎng)和防御方面發(fā)揮作用，與GA的機(jī)理相似，茉莉酸酯的ZIM結(jié)構(gòu)域（JAZ）蛋白質(zhì)被降解。首先將F-box復(fù)合體中COI1蛋白結(jié)合到JAZ上，結(jié)合后由SCF(COI1)直接泛素化降解JAZ抑制因子同時(shí)釋放與JAZ相互結(jié)合的MYB2蛋白[73-74]。圖1.3SCF復(fù)合體參與激素的感知[35]Fig.1.3SCFcomplexisinvolvedinhormoneperception以上研究表明，SCF復(fù)合體直接參與激素的感知，與激素的轉(zhuǎn)錄因子相互結(jié)合調(diào)控植物的生長(zhǎng)發(fā)育，但是，目前也有研究表明，RING型E3家族的一些基因也可以獨(dú)立的通過其他機(jī)理對(duì)植物生長(zhǎng)發(fā)育進(jìn)行調(diào)節(jié)。研究發(fā)現(xiàn)，ATL31/CNI作為一種新型調(diào)節(jié)劑可以促進(jìn)擬南芥植物有效利用碳/氮營(yíng)養(yǎng)素[75-76]。植物的生殖生長(zhǎng)對(duì)碳/氮營(yíng)養(yǎng)的有效利用具有高度依賴性，這說明ATL31/CNI在番茄果實(shí)發(fā)育中有重要作用[77]。同時(shí)，對(duì)番茄SlATL基因家族進(jìn)行特異性表達(dá)后發(fā)現(xiàn)，SlATL31在成熟果實(shí)和花中高度表達(dá)，結(jié)合之前的研究表明，ATL蛋白對(duì)番茄果實(shí)有顯著的生理學(xué)意義[78]。2019年XinT[79]等人發(fā)現(xiàn)了一個(gè)通過微調(diào)乙烯含量控制黃瓜果實(shí)伸長(zhǎng)的機(jī)理。研究中，鑒定出一個(gè)由于細(xì)胞分裂受到抑制導(dǎo)致果實(shí)較短的突變體sf1，SF1是RING型E3蛋白。該

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Overexpressed BRH1, a RING finger gene, alters rosette leaf shape in Arabidopsis thaliana[J]. Xiaoqian Wang,Eryong Chen,Xiaoyang Ge,Qian Gong,HamamaIslam Butt,Chaojun Zhang,Zuoren Yang,Fuguang Li,Xueyan Zhang.  Science China(Life Sciences). 2018(01)
[2]泛素化修飾調(diào)控脫落酸介導(dǎo)的信號(hào)途徑[J]. 于菲菲,謝旗.  遺傳. 2017(08)
[3]去泛素化酶研究進(jìn)展[J]. 劉文斌.  武漢輕工大學(xué)學(xué)報(bào). 2016(03)
[4]蛋白酶體激活因子PA28α對(duì)Eca109和EC9706細(xì)胞細(xì)胞周期和凋亡的影響[J]. 蔣海麗,張彥婷,石科,韓康,王瑞莉,龔方華,王靜,薛樂勛,關(guān)方霞.  鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2014(04)



本文編號(hào)：2926573