發(fā)布時間：2024-07-07 01:38

　　植物通過轉(zhuǎn)化酶將蔗糖分解為葡萄糖和果糖,來為植物提供生長發(fā)育的能源物質(zhì),以及作為與外界環(huán)境反應(yīng)的信號因子,以此來調(diào)控植物的生長發(fā)育周期。轉(zhuǎn)化酶分為酸性轉(zhuǎn)化酶和堿性/中性轉(zhuǎn)化酶(alkaline/neutral invertase,cytoplasmic invertases,CINs)。目前對于酸性轉(zhuǎn)化酶的功能及其作用機(jī)制已有深入地研究,但CINs由于該家族蛋白的非糖基化特征造成其不穩(wěn)定性,對其功能知之甚少。近來研究表明其在擬南芥、水稻等模式植物的器官發(fā)育和產(chǎn)品品質(zhì)形成具有重要作用。但在以果實(shí)作為產(chǎn)品器官的園藝作物-番茄中的功能尚不清楚。本研究以Micro-Tom番茄為試材,對果實(shí)中表達(dá)量較高的SlCIN7基因進(jìn)行轉(zhuǎn)化酶活性、組織細(xì)胞定位及基因的沉默與過表達(dá)研究,對其功能進(jìn)行了初步探究。主要研究結(jié)果如下:1)番茄SlCIN7開放閱讀框長1996bp,它編碼一個等電點(diǎn)為5.84,具有655個氨基酸殘基的蛋白質(zhì),其分子量是73.51kDa。通過構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹發(fā)現(xiàn)SlCIN7被分類為α亞族,亞細(xì)胞定位預(yù)測表明其定位于線粒體中。2)構(gòu)建pET30-SlCIN7原核表達(dá)載體,在大腸桿菌中誘導(dǎo)表達(dá)...

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 植物體中轉(zhuǎn)化酶種類
    1.2 堿性/中性轉(zhuǎn)化酶理化性質(zhì)
    1.3 堿性/中性轉(zhuǎn)化酶生理功能
    1.4 堿性/中性轉(zhuǎn)化酶功能的研究進(jìn)展
    1.5 研究目的與意義
2、試驗(yàn)材料與方法
    2.1 植物材料
    2.2 體外酶活的鑒定
        2.2.1 原核表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.2 SlCIN7 酶活性的體外測定
    2.3 SlCIN7-GUS啟動子表達(dá)載體的構(gòu)建及組織化學(xué)染色
        2.3.1 SlCIN7-GUS啟動子表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.3.2 GUS組織化學(xué)染色分析
    2.4 SlCIN7 亞細(xì)胞定位載體的構(gòu)建
    2.5 SlCIN7 沉默及過表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.5.1 沉默載體的構(gòu)建
        2.5.2 過表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.5.3 番茄遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立和轉(zhuǎn)基因植株的檢測
    2.6 花粉活性的測定
    2.7 活性氧含量的測定
    2.8 可溶性固形物含量的測定
    2.9 蔗糖轉(zhuǎn)化酶活性的測定
3、結(jié)果與分析
    3.1 番茄SlCIN7 基因的系統(tǒng)進(jìn)化分析
    3.2 SlCIN7 體外酶活性鑒定
        3.2.1 SlCIN7 原核表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.2.2 pET30a-SlCIN7 原核表達(dá)菌株的轉(zhuǎn)化
        3.2.3 S1CIN7 酶活性檢測
    3.3 SlCIN7 基因的表達(dá)特性
        3.3.1 組織定位分析
        3.3.2 SlCIN7 亞細(xì)胞定位分析
    3.4 SlCIN7 轉(zhuǎn)基因植株獲得與鑒定
        3.4.1 沉默載體SlCIN7-RNAi的構(gòu)建
        3.4.2 番茄的遺傳轉(zhuǎn)化
        3.4.3 SlCIN7-RNAi轉(zhuǎn)基因植株的鑒定
        3.4.4 SlCIN7-RNAi轉(zhuǎn)基因植株葉片SlCIN7 表達(dá)量的分析
        3.4.5 過表達(dá)載體pCAMBIA3301-SlCIN7 的構(gòu)建
        3.4.6 pCAMBIA3301-SlCIN7 過表達(dá)轉(zhuǎn)基因株系的獲得
        3.4.7 過表達(dá)SlCIN7 轉(zhuǎn)基因番茄表達(dá)量的分析
    3.5 轉(zhuǎn)基因植株轉(zhuǎn)化酶活性的分析
    3.6 轉(zhuǎn)基因植株表型的鑒定
    3.7 SlCIN7-RNAi植株中SlCIN7 對花粉活性的影響
    3.8 轉(zhuǎn)基因植株可溶性固形物含量的分析
    3.9 轉(zhuǎn)基因植株花粉粒中活性氧含量的分析
4.討論
    4.1 SlCIN7 具有典型的中性轉(zhuǎn)化酶活性
    4.2 SlCIN7 的線粒體靶向定位特征
    4.3 SlCIN7 對番茄果實(shí)單性結(jié)實(shí)的影響
5.結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄
攻讀學(xué)位論文期間發(fā)表文章



本文編號：4002955