發(fā)布時(shí)間：2020-11-20 23:17

　　 目的:臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(UC-MSCs)是存在于臍帶華通膠組織中的一種多能成體干細(xì)胞,具有自我更新和多向分化能力,還具有重要的免疫調(diào)節(jié)功能和旁分泌效應(yīng)。UC-MSCs被廣泛用于治療各種神經(jīng)系統(tǒng)疾病。大量數(shù)據(jù)顯示,UCMSCs能跨胚層分化為神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞。然而,至今仍缺乏簡單有效的方法誘導(dǎo)UC-MSCs形成神經(jīng)干細(xì)胞(NSCs)。為此,本實(shí)驗(yàn)采用神經(jīng)干細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基誘導(dǎo)UC-MSCs成球,并進(jìn)一步探索這些UC-MSCs來源的神經(jīng)球的生物學(xué)特性。方法:首先分離及培養(yǎng)人臍帶來源的間充質(zhì)干細(xì)胞。第二步采用神經(jīng)干細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基(DMEM/F12,EGF,b FGF,B27和N2)誘導(dǎo)UC-MSCs成球。然后利用次級成球?qū)嶒?yàn)檢測UC-MSCs的自我更新能力。應(yīng)用免疫熒光染色法檢測UC-MSCs來源的神經(jīng)球的神經(jīng)分化能力。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測UC-MSCs誘導(dǎo)成球前后相關(guān)神經(jīng)生成基因和干細(xì)胞標(biāo)志基因m RNA的表達(dá)情況。接下來應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測UC-MSCs誘導(dǎo)成球前后常用細(xì)胞表面標(biāo)志的表達(dá)變化。最后通過蛋白芯片檢測UC-MSCs誘導(dǎo)成球前后上清液中細(xì)胞因子的分泌情況。結(jié)果:臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞能在12-24h之內(nèi)被神經(jīng)干細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基(DMEM/F12,EGF,b FGF,B27和N2)有效誘導(dǎo)形成神經(jīng)干細(xì)胞球樣結(jié)構(gòu),這些UC-MSCs來源的神經(jīng)球能夠自我更新形成次級神經(jīng)球,并能被誘導(dǎo)分化為神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞。實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示多種與神經(jīng)干細(xì)胞自我更新和多向分化有關(guān)的基因表達(dá)上調(diào)。流式細(xì)胞檢測結(jié)果顯示誘導(dǎo)成球后第3天UC-MSCs常用表面標(biāo)志CD13,CD44,CD90,CD105表達(dá)明顯下降。蛋白芯片結(jié)果顯示誘導(dǎo)成球前后大多數(shù)細(xì)胞因子的表達(dá)水平?jīng)]有明顯變化。結(jié)論:我們的數(shù)據(jù)顯示,UC-MSCs能夠有效誘導(dǎo)產(chǎn)生NSCs,這些UC-MSCs來源的NSCs將為未來神經(jīng)替代治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病提供理想的細(xì)胞來源。
【學(xué)位單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R329.2
【部分圖文】：

圖 1：MSCs 來源的神經(jīng)球。A：骨髓 MSCs 來源的神經(jīng)球 B：脂肪 MSCs 來源的神經(jīng)球 C：臍帶 MSCs 來源的神經(jīng)球 D：誘導(dǎo)UC-MSCs 成球后 2h,4h,6h,8h,24h的成球情況。

不同體積的神經(jīng)球

2. UC-MSCs 來源的神經(jīng)球能夠自我更新并被誘導(dǎo)分化為神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞為了證實(shí)UC-MSCs來源的神經(jīng)球是真正的神經(jīng)干細(xì)胞球而不是由于培養(yǎng)造成的人為現(xiàn)象，我們對其進(jìn)行了自我更新和多向分化能力檢測。對于自我更新能力的檢測，我們收集 UC-MSCs 來源的神經(jīng)球并將其打散成單個(gè)細(xì)胞，然后用神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基重懸置于 24 或 96 孔板中，觀察次級神經(jīng)球形成情況。我們發(fā)現(xiàn)從第 3 天開始陸續(xù)開始有一些孔有次級神經(jīng)球形成，到第 5 天幾乎所有孔都有次級球形成。如圖 5A 所示。對于多向分化能力檢測，我們選取一些神經(jīng)球置于六孔板的蓋玻片上，然后用含有 2%胎牛血清的 DMEN/F12 培養(yǎng)基誘導(dǎo)神經(jīng)球分化，如圖 5B。6 天后，用免疫熒光染色檢測分化情況。如圖 5 所示，Tuj1 和 GFAP染色陽性，說明 UC-MSCs 來源的神經(jīng)球可以被誘導(dǎo)分化為神經(jīng)細(xì)胞（Tuj1）和膠質(zhì)細(xì)胞(GFAP)。
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 郭子寬;;間充質(zhì)干細(xì)胞及其臨床應(yīng)用中的幾個(gè)問題[J];中國組織工程研究;2012年01期

2 王恒湘;郭子寬;;間充質(zhì)干細(xì)胞在組織再生應(yīng)用中的諸多問題[J];組織工程與重建外科雜志;2008年05期

本文編號：2892154