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廣西獼猴糞便中諾如病毒與星狀病毒的全基因組序列分析

發(fā)布時間:2020-12-10 23:20
  目的:了解廣西龍虎山獼猴諾如病毒和星狀病毒的感染狀態(tài),分析其全基因組序列、探討遺傳進(jìn)化及與人類間的關(guān)系。方法:采用RT-PCR方法對收集的廣西龍虎山獼猴糞便標(biāo)本進(jìn)行諾如病毒和星狀病毒篩查,挑選陽性標(biāo)本各一份進(jìn)行基因擴(kuò)增、克隆、測序、拼接,獲得基因組全長。通過GenBank中Blastx在線比對分析,利用MEGA6.0軟件進(jìn)行多序列比對及遺傳進(jìn)化分析。結(jié)果:1.篩查發(fā)現(xiàn),400份標(biāo)本中諾如病毒陽性2份,陽性率為0.5%;星狀病毒1份,陽性率為0.25%。2.獲得的諾如病毒基因組全長為7565nt(包括PloyA尾),分為三個 ORFs:ORF1(10~5112nt)、ORF2(5093~6715nt)和 ORF3(6715~7494nt)。全基因組分析顯示其與人GII.17型諾如病毒CUHK-NS-613(GenBank 登錄號:KU561248)同源性最高(99.5%)。ORF1、ORF3區(qū)核苷酸和氨基酸序列都與CUHK-NS-613同源性最高(99.5%和 99.4%,99.5%和 99.2%);ORF2 區(qū)與人GⅡ.17 型諾如病毒CUHK-NS-491(GenBank登錄號:KP... 

【文章來源】:湖南師范大學(xué)湖南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】:67 頁

【學(xué)位級別】:碩士

【部分圖文】:

廣西獼猴糞便中諾如病毒與星狀病毒的全基因組序列分析


圖2-1?—步法RT-PCR驗證出的GII?.17型諾如病毒陽性標(biāo)本??注:1和2為陽性標(biāo)本;3為陽性對照;4為陰性對照;M為DL5000Marker??

基因結(jié)構(gòu)


?廣西獼猴糞便中諾如病毒與星狀病毒的全基因組序列分析???2.2全基因序列擴(kuò)增和拼接??本實驗選擇其中一份GII.17型諾如病毒陽性糞便標(biāo)本進(jìn)行全基因序列的擴(kuò)??增,命名為GX213。經(jīng)相應(yīng)的特異性引物擴(kuò)增后分別獲得了?5個特異性PCR片??段,長度分別為?1684nt、1511nt、1323nt、1483nt?和?2500nt,利用?DNAStar?中的??SeqMan軟件將分段獲得的基因片段進(jìn)行序列拼接得到全基因組序列,長度為??7565nt。經(jīng)和其它GII.17型諾如病毒序列比對發(fā)現(xiàn),GX213可分為3個ORFs、??5,/3’UTR?和?PloyA?尾:ORF1(10?5112nt)、ORF2(5093?6715nt)和?ORF3(6715???7494nt),其中?ORF1?與?ORF2?之間重疊?20bp,0RF2?和?ORF3?之間重疊?1?bp。GX213??基因結(jié)構(gòu)圖如圖2-2所示。此序列已被NCB1的GenBank數(shù)據(jù)庫所收錄(GenBank??登錄號:MF918359)。??

氨基酸序列分析,亞群,氨基酸,病毒


??變位點相比,GX213也沒有氨基酸變化,如圖2-4所示。同時發(fā)現(xiàn),GX213比??III亞群中Earlier?GII.17?2013-2014群病毒株VP1區(qū)多2個氨基酸,比II亞群病毒??少1個氨基酸,而與I亞群病毒VP1區(qū)氨基酸長度相同。??Epitope?A?Site?I?Epitope?A?Site?II?Epitope?D?Epitope?E?Site?111??294?296?298?347?368?372?374?393?394?407?440??????*?^?^???=???????:?=??I?8?41?154?171?221?244?:45?258?274?275?2S0?282?293?294?2%?298?320?333?342?347?362?368?370?372?m?374?377?380?m?394?400?407?414?440?44J?M?505?530?540??^sf^/Hn'Gii.n/HKGaoirMlVT^ITTQZTPGQlQDlG^lTsNRTYDSTST^LCGYW^??KX3S6_?k?GII.丨7/CHX/2。丨WX?▽丁萬IT7?Q?萬??MBi8359/Mk/Gii.i7/CHNy20i5"?M?A?V?1?Q?E?v||q?G^T?P?G?Q?I?Q?D?A?G?N?77?S?N?R?1?S?D?Q?D?丘UMi??丨丨、?■丨丁?丨丨'?丨??圖2-4?GX213?VP?1區(qū)氨基酸序列分析??3.討論??自2002年以來,GII.4型諾如病毒一直在全球暴發(fā)流行的腹瀉病中占優(yōu)勢地??位


本文編號:2909462

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