發(fā)布時間：2024-06-28 04:54

　　駱駝血清中能表達(dá)一種沒有輕鏈的抗體,通過克隆其可變區(qū)獲得了目前已知分子量最小的抗原結(jié)合片段,稱為納米抗體。與傳統(tǒng)抗體相比,納米抗體的分子量小,親水性高,比較容易地與其他分子或前體藥物共價連接。因此在新藥開發(fā)、臨床診斷等方面具有廣闊的開發(fā)前景。Cathepsin蛋白家族在免疫細(xì)胞內(nèi)參與抗原降解、加工和傳遞,進(jìn)而調(diào)節(jié)宿主的免疫反應(yīng)。而人體被蜱叮咬后,蜱唾液腺中的Ds Cystatin蛋白會被分泌到人體內(nèi),抑制Cathepsin蛋白家族的活性,幫助蜱長時間在宿主上吸血,逃避宿主免疫反應(yīng),促進(jìn)了蜱攜帶的病原體傳播到宿主體上。我們希望能獲得針對Ds Cystatin蛋白的納米抗體,以便幫助人們在關(guān)于蜱叮咬方面的診斷治療中發(fā)揮作用。本研究中我們采用原核表達(dá)系統(tǒng)獲得帶有GST標(biāo)簽的Ds Cystatin融合蛋白,利用GST標(biāo)簽純化該蛋白。純化后的蛋白帶有GST標(biāo)簽,使用procession蛋白酶切除,最終得到單一的Ds Cystatin抗原蛋白。用純化后的抗原蛋白免疫健康的雙峰駝,經(jīng)過數(shù)次的免疫后以其外周血為材料建立納米抗體免疫文庫,利用噬菌體展示技術(shù)通過吸附、洗脫、富集等一系列操作篩選具有抗原特異...

【文章頁數(shù)】：94 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.1抗體結(jié)構(gòu)

1圖1.1抗體結(jié)構(gòu)系統(tǒng)的重要組成部分，抗體可以保護(hù)機體免受外來異物學(xué)研究領(lǐng)域，抗體也是一類使用極其頻繁的試劑，在蛋

圖1.2駱駝血清抗體IgG結(jié)構(gòu)圖

圖1.2駱駝血清抗體IgG結(jié)構(gòu)圖

圖1.3單域抗體模圖[39]

4圖1.3單域抗體模圖[39]

圖2.1目的片段序列與PGEX-6P-2質(zhì)粒圖譜

圖2.1目的片段序列與PGEX-6P-2質(zhì)粒圖譜2.2.2DsCystatin蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)將構(gòu)建好并測序正確的重組載體經(jīng)BL21（DE3）感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化后，挑取單隆菌落搖菌。經(jīng)過多次實驗條件的摸索，我們最終選取誘導(dǎo)溫度30℃、IPTG終濃

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