隨著人們生活水平的提高，腦血管病成為了嚴(yán)重影響人們健康和生命安全的疾病之一。近年來，醫(yī)療水平亦不斷提高，雖然腦血管疾病病死率有所下降，但腦血管病造成的各種功能和智力障礙卻得不到有效治療。血管性癡呆(VD)是由多種因素導(dǎo)致腦組織受到損傷后引起的癡呆綜合征的總稱。臨床實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)，中醫(yī)藥在治療VD方面有較顯著療效，但治療本病的最佳時(shí)機(jī)卻不明確。

　　本研究通過復(fù)制血管性癡呆小鼠模型，觀察不同時(shí)間窗中藥益氣活血方治療血管性癡呆的療效，為臨床選擇合適時(shí)機(jī)治療該病提供可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

　　1 實(shí)驗(yàn)材料

　　1．1 動物雄性昆明小鼠50只，體質(zhì)量29 g±2．5 g(由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物學(xué)部提供)。

　　1．2 益氣活血方的藥物組成 黃芪120 g，赤芍、當(dāng)歸各9 g，地龍、桃仁、紅花、川芎各6 g(課題組自制成1 g生藥／mL)。本實(shí)驗(yàn)中所應(yīng)用的中藥均購自北京同仁堂藥房，經(jīng)過河北醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院中藥系的鑒定后均符合國家藥典標(biāo)準(zhǔn)。

　　1．3 本實(shí)驗(yàn)主要試劑去甲腎上腺素(NE)、5一羥色胺(5一TH)、多巴胺(DA)均由中國生物藥品制品檢驗(yàn)所提供。

　　1．4 本實(shí)驗(yàn)主要儀器 C—R2Ax數(shù)據(jù)處理機(jī)、LC一4A高效液相色譜儀均為日本島津公司生產(chǎn)。

　　2 方法

　　2．1 模型復(fù)制模型的制備參照文獻(xiàn)，將動物用10％水合氯醛(350 mg／kg，腹腔注射)麻醉，頸正中部常規(guī)消毒后切口，分離雙側(cè)頸總動脈，套“4”號絲線扣，拉緊絲扣，阻斷血流20 min，同時(shí)在距尾尖1 em處剪斷放血約0．3 mL，熱凝止血。

　　松開絲扣使血液灌注10 min后，再次阻斷血流20min，第2次再灌注后觀察30 min，縫合皮膚。其中假手術(shù)組只分離頸總動脈，穿線不結(jié)扎，尾部不放血，觀察時(shí)間與其他組相同。術(shù)后每日肌注青霉素0．2萬U，連續(xù)3 d。本實(shí)驗(yàn)維持動物肛溫36℃±0．5℃，防止低溫對缺血所致腦損傷的保護(hù)作用。

　　2．2 實(shí)驗(yàn)的分組及給藥途徑 將實(shí)驗(yàn)用昆明小鼠隨機(jī)分為5組，每組為1O只，均連續(xù)給藥治療l0天，每日給藥1次。(1)假手術(shù)組：予蒸餾水按10 mL／kg體質(zhì)量灌服；(2)模型組：予蒸餾水按10 mL／kg體質(zhì)量灌服；(3)益氣活血方即刻治療組：每日予36 g生藥／kg體質(zhì)量灌服(此劑量相當(dāng)于成人服藥劑量的15倍)，造模后即刻給藥。

　　(4)益氣活血方3天治療組：相同劑量藥物，造模3天后給藥。(5)益氣活血方10天治療組：相同劑量藥物，造模lO天后給藥。

　　2．3 腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)測定在治療結(jié)束后，各組小鼠均快速斷頭取腦組織，在冰盤上分離出其大腦皮層，放于一80℃ 冰箱中。取部分組織做樣品，以3 000 r／min、4℃離心10 min，將離心后的上清液，置于1．5 mL Ependorf管中，提取NE、DA、5一TH時(shí)備用。標(biāo)準(zhǔn)品與樣品的處理方法相同。

　　計(jì)算NE、DA的公式為：

　　NE、DA含有量=補(bǔ)正系數(shù)×面積×內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)量×100／內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)峰面積×試樣量。

　　計(jì)算5一TH的公式為：5一TH含有量=補(bǔ)正系數(shù)×面積×100／試用量，分析標(biāo)準(zhǔn)試樣后求得補(bǔ)正系數(shù)。

　　2．4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 實(shí)驗(yàn)中的所有數(shù)據(jù)用SPSS13．0 for windos統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，用成組設(shè)計(jì)的方差分析，數(shù)據(jù)采用 ±s表示。以0．05、0．01為差異有顯著性水平的標(biāo)準(zhǔn)。

　　3 結(jié)果益氣活血方對各組VD模型小鼠其大腦皮層中的各種神經(jīng)遞質(zhì)影響：研究結(jié)果顯示，大腦皮層組織中的神經(jīng)遞質(zhì)模型組與假手術(shù)組相比明顯降低(P<0．01)；經(jīng)用益氣活血方后，即刻治療組、3天治療組NE、DA、5一TH含量均較模型組小鼠明顯增高(P <0．05)，l0天治療組含量雖有增高，但差異無顯著性(P>0．05)，其中，即刻治療組腦組織中的NE、DA、5一TH含量均較3天治療組明顯增高(P<0．05)。詳見表1。

　　4 討論中醫(yī)對VD的研究由來已久，《景岳全書》中第一次提出癡呆的病名、病因與臨床表現(xiàn)，古代醫(yī)學(xué)家認(rèn)為本病系年邁體衰，正氣虧虛，運(yùn)行不暢，氣虛血瘀等導(dǎo)致，并認(rèn)為其主要病機(jī) 為中風(fēng)導(dǎo)致氣血瘀滯，清竅失靈，漸至癡呆。病位在腦，病性多為本虛標(biāo)實(shí)，精血虧虛為本，痰瘀互結(jié)、蒙蔽清竅為標(biāo)。益氣活血方藥物組成應(yīng)用補(bǔ)陽還五湯原方。該方為益氣活血通絡(luò)的經(jīng)典方，由黃芪、當(dāng)歸、川芎、赤芍、桃仁、紅花、地龍組成。方中黃芪重用為君，大補(bǔ)元?dú)猓�意在氣旺以促血行，祛瘀而不傷正；配以�?dāng)歸尾為臣，有活血祛瘀而不傷正氣之妙；桃仁、紅花、川芎、赤芍助當(dāng)歸尾活血祛瘀，其中川芎具升浮之性，善上行頭巔，為治腦部瘀血證之良藥，地龍通經(jīng)活絡(luò)，共為佐使。諸藥合用，使氣旺血型、祛瘀絡(luò)通，腦髓得養(yǎng)，靈機(jī)記性漸歸于常。

　　現(xiàn)代研究表明，引起血管性癡呆的因素主要為腦缺血，而腦缺血又可以造成神經(jīng)遞質(zhì)的代謝異常。腦缺血早期，由于ATP尚未消耗完畢，所以神經(jīng)遞質(zhì)的合成與釋放受到的影響均較小，減少不明顯，然而神經(jīng)遞質(zhì)的分解過程耗能相對更大，故而受到影響較大，造成其合成釋放較分解增加，所以突觸間隙神經(jīng)遞質(zhì)的含量會較前有所升高。大腦缺血的時(shí)間越長，胺泵以及膜泵受到抑制越大，造成突觸前膜再次攝取神經(jīng)遞質(zhì)會明顯減少甚至停止。在這時(shí)，鈉泵轉(zhuǎn)運(yùn)受到阻礙又會造成一部分細(xì)胞變得水腫，進(jìn)而破裂。遞質(zhì)外溢后，細(xì)胞外液遞質(zhì)仍會較前增高；腦缺血的后期，遞質(zhì)合成受到影響，遞質(zhì)合成不足，故儲存在囊泡中的神經(jīng)遞質(zhì)也會相應(yīng)的減少，神經(jīng)元會更加受損，以致于部分神經(jīng)元壞死，也就喪失了合成、釋放神經(jīng)遞質(zhì)的能力。 本實(shí)驗(yàn)中血管性癡呆的模型就是反復(fù)缺血再灌注引起，筆耕論文，而時(shí)間窗的概念正是緣于治療缺血性卒中。

　　研究表明，“缺血半暗帶” 的提出，為缺血性卒中的治療提供了理論基礎(chǔ)。 缺血半暗帶是壞死灶的中心與正常組織問的交接區(qū)，該區(qū)域雖然細(xì)胞結(jié)構(gòu)存在但細(xì)胞功能受到損害，這一部分缺血的腦組織因缺血影響細(xì)胞的電生理活動，造成電生理活動的停止，但是仍然可以維持跨膜離子的平衡。距離腦缺血中心較近的腦組織發(fā)展為不可逆性腦損傷時(shí)間較為緩慢，甚至可能延遲到數(shù)小時(shí)。缺血半暗帶從可逆性的缺血向不可逆性損傷的進(jìn)展由多種病理機(jī)制參與，隨著缺血時(shí)間的延長，最終導(dǎo)致治療效果降低。研究提示，缺血半暗帶的面積、大小受很多因素的影響，例如：側(cè)支循環(huán)的建立、患者血壓、當(dāng)時(shí)的體溫以及缺血組織對缺血的耐受性等。

　　因此，因缺血導(dǎo)致卒中的治療時(shí)間窗有一定的個(gè)體差異。由此可見，因腦缺血再灌注導(dǎo)致的血管性癡呆，在治療中也存在時(shí)間窗的概念。