發(fā)布時間：2018-03-08 19:42

  本文選題：豬丹毒桿菌　切入點：表面保護性蛋白SpaA　出處：《微生物學通報》2017年03期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：【目的】利用表達純化的豬丹毒桿菌表面保護性蛋白SpaA,建立檢測豬丹毒桿菌抗體的間接ELISA方法�！痉椒ā靠寺�擴增豬丹毒桿菌SpaA基因,并將SpaA基因與原核表達載體p GEX-6P-1連接,通過PCR、雙酶切及測序鑒定后,將陽性重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入受體菌E.coli Rosetta(DE3),并利用IPTG進行誘導表達,SDS-PAGE和Western blot鑒定表達產(chǎn)物。將SpaA重組蛋白按不同濃度包被酶標板,通過方陣滴定法確定最佳抗原包被濃度及血清稀釋度,并對其他條件進行優(yōu)化,最終建立檢測豬丹毒桿菌抗體的間接ELISA方法�！窘Y(jié)果】利用克隆表達的豬丹毒桿菌SpaA蛋白作抗原,通過方陣滴定法確定蛋白最佳包被濃度為1.0 mg/L,血清的最佳稀釋度為1:100,建立了檢測豬丹毒桿菌抗體的間接ELISA方法,批內(nèi)及批間變異系數(shù)均小于10%,具有較好的重復性及特異性。用建立的間接ELISA方法檢測豬丹毒疫苗免疫后的健康豬血清樣品,檢測結(jié)果與美國TSZ公司豬丹毒桿菌抗體檢測試劑盒和Western blot鑒定結(jié)果進行對比,兩者總符合率分別為92.20%、92.59%�！窘Y(jié)論】試驗利用原核表達的SpaA重組蛋白作抗原建立的檢測豬丹毒桿菌抗體的間接ELISA方法,特異性強、重復性好、敏感性高,可用于豬丹毒桿菌的抗體檢測及流行病學調(diào)查。
[Abstract]:[objective] to establish an indirect ELISA method for the detection of porcine erysipelas antibody using purified SpaA protein. [methods] SpaA gene was cloned and amplified, and the SpaA gene was ligated with prokaryotic expression vector p GEX-6P-1. The positive recombinant plasmid was transformed into E. coli Rosetta-DE3 by PCR, double enzyme digestion and sequencing. The expressed product was identified by IPTG induced expression of SDS-PAGE and Western blot. The recombinant protein of SpaA was coated with different concentration of enzyme labeling plate. The best antigen coating concentration and serum dilution were determined by square array titration, and other conditions were optimized. An indirect ELISA method was established to detect the antibody of erysipelas. [results] the cloned SpaA protein of erysipelas was used as antigen. The best coating concentration of protein was 1.0 mg / L and the optimal dilution of serum was 1: 100. An indirect ELISA method was established for the detection of erysipelas antibodies. The coefficient of variation within and between batches was less than 10, with good reproducibility and specificity. The established indirect ELISA method was used to detect the serum samples of healthy pigs immunized with porcine erysipelas vaccine. The results were compared with those of TSZ's antibody detection kit and Western blot. The total coincidence rates of the two methods were 92.20 and 92.59.Conclusion the indirect ELISA method using prokaryotic expressed SpaA recombinant protein as antigen to detect the antibody of erysipelas is highly specific, reproducible and sensitive. It can be used for antibody detection and epidemiological investigation of erysipelas.
【作者單位】： 安徽農(nóng)業(yè)大學動物科技學院;安徽省畜禽產(chǎn)業(yè)共性技術研究院;
【基金】：國家星火計劃重點項目(No.2014GA710002) 安徽省質(zhì)量工程項目(No.2013sxzx008) 安徽農(nóng)業(yè)大學大學生創(chuàng)新基金項目(No.XJ2015142) 安徽省生豬產(chǎn)業(yè)體系基金項目~~
【分類號】：S852.6

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本文編號：1585283