發(fā)布時間：2018-03-10 21:09

  本文選題：生長抑制素　切入點：pET-32a表達系統(tǒng)　出處：《上海海洋大學》2015年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：構建帶有生長抑制素的p ET-32a-2SS28-SS14和p ET-32a-3SS28原核表達質粒并檢測其在大腸桿菌中的表達,并用所表達的目的蛋白制成生長抑制素亞單位疫苗,將該疫苗免疫小鼠,研究其對小鼠生長的影響,探討生長抑制素亞單位疫苗免疫小鼠后對促進生長效果的性別差異性,并研究生長抑制素不同亞型串聯(lián)后對促進小鼠生長的不同效果。為研究獲得經(jīng)濟高效的生長抑制素亞單位疫苗,以提高經(jīng)濟動物的生產(chǎn)效率。1.p ET-32a-2SS28-SS14和p ET-32a-3SS28原核表達質粒的構建選用生長抑制素的兩種亞型SS-14和SS-28,將其混合串聯(lián)到p ET-32a表達系統(tǒng)中,得到p ET-32a-2SS28-SS14和p ET-32a-3SS28兩種重組質粒。并通過PCR擴增和測序鑒定表明,目的基因在p ET-32a質粒中的插入位點,序列以及方向完全正確。2.2SS28-SS14和3SS28目的蛋白的表達與純化將p ET-32a-2SS28-SS14和p ET-32a-3SS28兩種重組質粒轉化到E.coli BL21 De3中,通過IPTG誘導大腸桿菌介導表達出目的蛋白,并通過western blot分析鑒定,所表達蛋白為目的蛋白。將菌體超聲破碎后離心對目的蛋白進行可溶性分析以后,將上清進行蛋白純化,獲得純化的目的蛋白。3.生長抑制素亞單位疫苗的制備以及動物免疫將誘導純化的目的蛋白與佐劑混合乳化制成生長抑制素亞單位疫苗,免疫小鼠,選用4周齡離乳昆明鼠60只,雌雄各半。將雌雄各隨機分3組,每組10只,對每只做好編號標記。按如下分組進行免疫:2SS28-SS14♀:免疫2SS28-SS14蛋白的雌鼠;2SS28-SS14♂:免疫2SS28-SS14蛋白的雄鼠;328AA♀:免疫3SS28蛋白的雌鼠;328AA♂:免疫3SS28蛋白的雄鼠;空白♀:注射生理鹽水白油乳化溶液的雌鼠;空白♂:注射生理鹽水白油乳化溶液的雄鼠。對4周齡的小鼠初始體重的測定記錄,并對其進行首次免疫。實驗組每只小鼠免疫100ug蛋白量的相應劑量疫苗,對照組注射等劑量的生理鹽水白油乳化溶液對照。1周后再進行一次加強免疫,實驗組每只小鼠免疫50ug蛋白量的相應劑量疫苗,對照組注射等劑量的生理鹽水白油乳化溶液對照。從4周齡開始到7周齡,每周對小鼠體重做一次稱重記錄。采用SPSS進行統(tǒng)計學分析。免疫兩種疫苗的雌鼠的實驗組與空白對照組平均增重相比,差異均不顯著(P0.05)。免疫3SS28疫苗的雄鼠實驗組與空白對照組平均增重相比,免疫后第1、第2周體重增加不顯著(p0.05),第3周平均增重顯著高于空白對照組(P0.05)。免疫2SS28-SS14疫苗的雄鼠實驗組與空白對照組平均增重相比,免疫后第1、第2周平均增重顯著高于空白對照組(p0.05),第3周差異極為顯著(P0.01)。說明生長抑制素不同亞型的亞單位疫苗對昆明鼠生長影響性別差異性較大;從雄鼠的增重效果來看,SS-14亞型的免疫增重效果優(yōu)于SS-28亞型,說明生長抑制素不同亞型的免疫原性有所差異,導致免疫效果的不同。綜上所述,本研究通過基因克隆技術成功重組構建p ET-32a-2SS28-SS14和p ET-32a-3SS28原核表達質粒并檢測其在大腸桿菌中表達。并將表達的目的蛋白純化后制備成生長抑制素亞單位疫苗免疫小鼠,發(fā)現(xiàn)免疫3SS28疫苗的雄鼠實驗組與空白對照組平均增重相比差異顯著(P0.05)。免疫2SS28-SS14疫苗的雄鼠實驗組與空白對照組平均增重相比差異極為顯著(P0.01)。而兩種疫苗對雌鼠均無明顯差異性。因此本次研究為獲得經(jīng)濟高效的生長抑制素亞單位疫苗和后續(xù)將生長抑制素亞單位疫苗應用到動物生產(chǎn)提供了理論基礎和方向。
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【學位授予單位】：上海海洋大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S852.4

【參考文獻】

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本文編號：1595080