脂聯(lián)素對(duì)肉雞脂肪代謝調(diào)控及其分子機(jī)制研究
發(fā)布時(shí)間：2024-06-23 12:24
本研究通過活體藥物處理、構(gòu)建超表達(dá)及干擾載體并處理雞原代脂肪細(xì)胞、球狀脂聯(lián)素處理細(xì)胞等技術(shù)手段,研究脂聯(lián)素對(duì)肉雞活體脂肪沉積、肌肉品質(zhì)和雞脂肪細(xì)胞中脂代謝的影響及其調(diào)控機(jī)制。試驗(yàn)獲得以下結(jié)果： 1.為了研究肉雞脂聯(lián)素表達(dá)變化對(duì)活體脂肪沉積及肌肉品質(zhì)的影響,試驗(yàn)采用羅格列酮及地塞米松處理肉雞,連續(xù)處理三周,檢測(cè)血清中脂聯(lián)素水平,脂聯(lián)素及其受體基因的表達(dá)規(guī)律,同時(shí)研究肉雞體脂沉積,檢測(cè)脂肪組織中脂代謝關(guān)鍵基因的表達(dá)。結(jié)果表明：(1)羅格列酮顯著上調(diào)肉雞血清中脂聯(lián)素水平,地塞米松顯著抑制血清中脂聯(lián)索水平,并呈時(shí)間依賴性；(2)羅格列酮顯著上調(diào)腹脂、皮脂、胸肌、腿肌和肝臟中脂聯(lián)素及其受體AdipoR1基因的表達(dá)；(3)羅格列酮顯著降低血清中TG和LDL-C水平,上調(diào)HDL-C水平,地塞米松顯著上調(diào)血清中TG和LDL-C水平,下調(diào)HDL-C水平；(4)羅格列酮顯著抑制腹脂和頸部皮脂以及胸肌和腿肌中的脂質(zhì)沉積,而地塞米松顯著增加肉雞腹脂、腹部皮脂、頸部皮脂和腿部皮脂以及胸肌和腿肌中脂質(zhì)沉積；(5)羅格列酮顯著下調(diào)胸肌和腿肌中總FA、SFA和MUFA的含量,地塞米松則顯著促進(jìn)肌肉中脂肪酸的沉積；(6...
【文章頁(yè)數(shù)】：96 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
第一部分 文獻(xiàn)綜述
第一章 文獻(xiàn)綜述
1.1 脂聯(lián)素概述
1.1.1 脂肪組織的內(nèi)分泌功能
1.1.2 脂聯(lián)素的發(fā)現(xiàn)
1.1.3 脂聯(lián)素的分子結(jié)構(gòu)
1.1.4 脂聯(lián)素受體
1.1.5 脂聯(lián)素基因表達(dá)及調(diào)控
1.1.6 脂聯(lián)素受體基因的表達(dá)及調(diào)控
1.1.7 脂聯(lián)素對(duì)能量代謝和脂代謝的影響
1.2 脂肪細(xì)胞分化研究進(jìn)展
1.2.1 前體脂肪細(xì)胞分化模型
1.2.2 脂肪細(xì)胞分化中分子事件
1.2.3 脂聯(lián)素對(duì)于脂肪細(xì)胞分化的影響
1.3 線粒體研究綜述
1.3.1 線粒體概括
1.3.2 線粒體與脂類代謝
1.3.3 脂聯(lián)素與線粒體發(fā)育和功能
第二部分 試驗(yàn)研究
第二章 脂聯(lián)素對(duì)肉雞體脂沉積的影響
2.1 試驗(yàn)材料
2.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與飼養(yǎng)管理
2.1.2 試驗(yàn)分組與處理
2.1.3 基礎(chǔ)日糧及營(yíng)養(yǎng)水平
2.2 試劑和主要儀器設(shè)備
2.2.1 主要試劑
2.2.2 主要儀器設(shè)備
2.3 樣品采集和測(cè)定
2.3.1 屠宰和采樣
2.3.2 生產(chǎn)性能測(cè)定
2.3.3 脂肪含量
2.3.4 血清中脂聯(lián)素及血脂含量測(cè)定
2.3.5 Real-time PCR
2.3.5.1 RNA抽提
2.3.5.2 反轉(zhuǎn)錄
2.3.5.3 引物及退火溫度
2.3.5.4 Real-time PCR反應(yīng)體系
2.3.6 Western Blot
2.3.6.1 組織總蛋白的提取及含量測(cè)定
2.3.6.2 BCA法蛋白定量
2.3.6.3 蛋白質(zhì)電泳
2.3.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
2.4 結(jié)果
2.4.1 羅格列酮和地塞米松對(duì)肉雞生產(chǎn)性能的影響
2.4.2 羅格列酮和地塞米松對(duì)肉雞體內(nèi)脂聯(lián)素及其受體表達(dá)的影響
2.4.3 羅格列酮和地塞米松對(duì)肉雞血脂水平以及體脂沉積的影響
2.4.4 羅格列酮和地塞米松對(duì)肉雞組織中脂代謝相關(guān)基因表達(dá)的影響
2.5. 討論
2.6 小結(jié)
第三章 脂聯(lián)素對(duì)肉雞肌肉中脂肪沉積及肉品質(zhì)的影響
3.1 試驗(yàn)材料
3.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與飼養(yǎng)管理
3.1.2 試驗(yàn)處理與分組
3.1.3 基礎(chǔ)日糧及營(yíng)養(yǎng)水平
3.2 試劑和主要儀器設(shè)備
3.2.1 主要試劑
3.2.2 主要儀器
3.3 樣品采集和測(cè)定
3.3.1 屠宰和采樣
3.3.2 IMF含量測(cè)定
3.3.3 血清中脂聯(lián)素含量測(cè)定
3.3.4 肌肉品質(zhì)測(cè)定
3.3.4.1 肌肉pH值
3.3.4.2 肉色測(cè)定
3.3.4.3 系水力
3.3.4.4 剪切力
3.3.4.5 丙二醛(Malondialdehyde,MDA)
3.3.5 肌肉脂肪酸(fatty acid,FA)組成
3.3.6 Real-time PCR
3.3.7 Western Blot
3.3.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
3.4 結(jié)果
3.4.1 血清脂聯(lián)素水平、肌肉中脂聯(lián)素及其受體基因的表達(dá)
3.4.2 肉品質(zhì)分析
3.4.3 脂肪酸組成分析
3.4.4 羅格列酮和地塞米松對(duì)肌肉中脂代謝相關(guān)因子表達(dá)的影響
3.5 討論
3.6 小結(jié)
第四章 全長(zhǎng)脂聯(lián)素對(duì)雞脂肪細(xì)胞中脂沉積的調(diào)控機(jī)制
4.1 試驗(yàn)材料
4.1.1 樣品、菌株、質(zhì)粒
4.1.2 主要試劑
4.1.3 常用試劑配制
4.2 試驗(yàn)方法
4.2.1 small-interfering RNA(siRNA)設(shè)計(jì)
4.2.2 雞前體原代脂肪細(xì)胞的分離與培養(yǎng)
4.2.3 pcDNA3.1-ADPN及pGPU6/GFP/Neo重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
4.2.4 細(xì)胞處理
4.2.5 轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒細(xì)胞ADPN mRNA和蛋白的檢測(cè)
4.2.6 脂肪細(xì)胞油紅0染色
4.2.7 培養(yǎng)基中游離脂肪酸(Free fatty acid,FFA)和甘油釋放
4.2.7.1 培養(yǎng)基中FFA測(cè)定
4.2.7.2 培養(yǎng)基中甘油測(cè)定
4.2.8 Real-time PCR檢測(cè)脂代謝標(biāo)志基因表達(dá)
4.2.9 Western blot檢測(cè)脂代謝標(biāo)志蛋白及信通路標(biāo)志蛋白磷酸化水平
4.2.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及分析
4.3 試驗(yàn)結(jié)果與分析
4.3.1 脂聯(lián)素超表達(dá)載體和干擾載體的轉(zhuǎn)染效率檢測(cè)
4.3.2 超表達(dá)及干擾ADPN基因?qū)﹄u原代脂肪細(xì)胞中脂代謝的影響
4.3.3 超表達(dá)及干擾ADPN基因?qū)﹄u脂肪細(xì)胞中脂代謝關(guān)鍵基因表達(dá)的影響
4.3.4 超表達(dá)ADPN基因激活p38 MAPK/ATF-2信號(hào)通路
4.3.5 超表達(dá)ADPN抑制TOR/p70 S6Kinase信號(hào)通路
4.4 討論
4.5 小結(jié)
第五章 重組球狀脂聯(lián)素通過p38 MAPK和TOR信號(hào)通路抑制雞原代脂肪細(xì)胞脂質(zhì)蓄積
5.1 材料
5.1.1 材料
5.1.2 主要試劑
5.1.3 主要儀器
5.2 試驗(yàn)方法
5.2.1 雞前體脂肪細(xì)胞的分離培養(yǎng)
5.2.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
5.2.3 油紅O染色提取測(cè)胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積
5.2.4 培養(yǎng)基中FFA的釋放
5.2.5 實(shí)時(shí)定量檢測(cè)脂代謝基因表達(dá)
5.2.6 Western蛋白印跡檢測(cè)脂代謝相關(guān)蛋白以及通路磷酸化水平
5.2.7 數(shù)據(jù)分析
5.3 結(jié)果與分析
5.3.1 外源添加重組脂聯(lián)素對(duì)雞原代脂肪細(xì)胞內(nèi)源脂聯(lián)素及其受體表達(dá)的影響
5.3.2 外源添加重組脂聯(lián)素對(duì)雞原代脂肪細(xì)胞脂質(zhì)沉積的影響
5.3.3 球狀脂聯(lián)素在雞脂肪細(xì)胞中激活p38 MAPK/ATF-2信號(hào)通路
5.3.4 球狀脂聯(lián)素在雞脂肪細(xì)胞中抑制TOR/p70 S6Kinase信號(hào)通路
5.3.5 球狀脂聯(lián)素與p38 MAPK通路對(duì)脂肪細(xì)胞分化的影響
5.3.6 球狀脂聯(lián)素與TOR通路對(duì)脂肪細(xì)胞分化的影響
5.4 討論
5.5 小結(jié)
第六章 脂聯(lián)素對(duì)雞脂肪細(xì)胞分化及線粒體發(fā)育和功能調(diào)控機(jī)制
6.1. 材料與方法
6.1.1 試驗(yàn)材料
6.1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物、腺病毒、質(zhì)粒
6.1.1.2 主要試驗(yàn)試劑
6.1.1.3 主要試驗(yàn)儀器
6.1.2 試驗(yàn)方法
6.1.2.1 主要溶液配制
6.1.2.2 肉雞原代脂肪細(xì)胞培養(yǎng)
6.1.2.3 細(xì)胞處理
6.1.2.4 細(xì)胞形態(tài)觀察、油紅O染色及Bodipy染色
6.1.2.5 透射電鏡觀察線粒體數(shù)目
6.1.2.6 JC-1染色檢測(cè)線粒體膜通透性
6.1.2.7 JC-1染色流式細(xì)胞術(shù)
6.1.2.8 Cyt-c免疫熒光分析
6.1.2.9 細(xì)胞總RNA提取及Realtime-PCR檢測(cè)脂代謝及線粒體標(biāo)志基因表達(dá)
6.1.2.10 細(xì)胞總蛋白收取及Westernblot檢測(cè)脂代謝、線粒體中標(biāo)志蛋白和通路蛋白磷酸化水平
6.1.2.11 葡萄糖攝取率及培養(yǎng)基中游離脂肪酸含量檢測(cè)
6.1.3 數(shù)據(jù)處理及分析
6.2 試驗(yàn)結(jié)果
6.2.1 超表達(dá)及干擾效率檢測(cè)
6.2.2 脂聯(lián)素對(duì)脂肪細(xì)胞中脂代謝的影響
6.2.3 脂聯(lián)素對(duì)雞原代脂肪細(xì)胞脂代謝基因表達(dá)的影響
6.2.4 脂聯(lián)素對(duì)雞原代脂肪細(xì)胞葡萄糖攝取及脂解影響
6.2.5 脂聯(lián)素對(duì)雞原代脂肪細(xì)胞線粒體發(fā)育的影響
6.2.6 脂聯(lián)素對(duì)雞原代脂肪細(xì)胞中Cyt-C表達(dá)影響
6.2.7 脂聯(lián)素對(duì)線粒體中糖脂代謝相關(guān)標(biāo)志基因及蛋白表達(dá)的影響
6.2.8 脂聯(lián)素對(duì)雞脂肪細(xì)胞線粒體通透性的影響
6.2.9 脂聯(lián)素對(duì)雞原代脂肪細(xì)胞中相關(guān)信號(hào)通路的影響
6.3 討論
6.4 小結(jié)
結(jié)論與進(jìn)一步研究計(jì)劃
參考文獻(xiàn)
縮略詞
致謝
作者簡(jiǎn)介
本文編號(hào)：3995464
【文章頁(yè)數(shù)】：96 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
第一部分 文獻(xiàn)綜述
第一章 文獻(xiàn)綜述
1.1 脂聯(lián)素概述
1.1.1 脂肪組織的內(nèi)分泌功能
1.1.2 脂聯(lián)素的發(fā)現(xiàn)
1.1.3 脂聯(lián)素的分子結(jié)構(gòu)
1.1.4 脂聯(lián)素受體
1.1.5 脂聯(lián)素基因表達(dá)及調(diào)控
1.1.6 脂聯(lián)素受體基因的表達(dá)及調(diào)控
1.1.7 脂聯(lián)素對(duì)能量代謝和脂代謝的影響
1.2 脂肪細(xì)胞分化研究進(jìn)展
1.2.1 前體脂肪細(xì)胞分化模型
1.2.2 脂肪細(xì)胞分化中分子事件
1.2.3 脂聯(lián)素對(duì)于脂肪細(xì)胞分化的影響
1.3 線粒體研究綜述
1.3.1 線粒體概括
1.3.2 線粒體與脂類代謝
1.3.3 脂聯(lián)素與線粒體發(fā)育和功能
第二部分 試驗(yàn)研究
第二章 脂聯(lián)素對(duì)肉雞體脂沉積的影響
2.1 試驗(yàn)材料
2.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與飼養(yǎng)管理
2.1.2 試驗(yàn)分組與處理
2.1.3 基礎(chǔ)日糧及營(yíng)養(yǎng)水平
2.2 試劑和主要儀器設(shè)備
2.2.1 主要試劑
2.2.2 主要儀器設(shè)備
2.3 樣品采集和測(cè)定
2.3.1 屠宰和采樣
2.3.2 生產(chǎn)性能測(cè)定
2.3.3 脂肪含量
2.3.4 血清中脂聯(lián)素及血脂含量測(cè)定
2.3.5 Real-time PCR
2.3.5.1 RNA抽提
2.3.5.2 反轉(zhuǎn)錄
2.3.5.3 引物及退火溫度
2.3.5.4 Real-time PCR反應(yīng)體系
2.3.6 Western Blot
2.3.6.1 組織總蛋白的提取及含量測(cè)定
2.3.6.2 BCA法蛋白定量
2.3.6.3 蛋白質(zhì)電泳
2.3.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
2.4 結(jié)果
2.4.1 羅格列酮和地塞米松對(duì)肉雞生產(chǎn)性能的影響
2.4.2 羅格列酮和地塞米松對(duì)肉雞體內(nèi)脂聯(lián)素及其受體表達(dá)的影響
2.4.3 羅格列酮和地塞米松對(duì)肉雞血脂水平以及體脂沉積的影響
2.4.4 羅格列酮和地塞米松對(duì)肉雞組織中脂代謝相關(guān)基因表達(dá)的影響
2.5. 討論
2.6 小結(jié)
第三章 脂聯(lián)素對(duì)肉雞肌肉中脂肪沉積及肉品質(zhì)的影響
3.1 試驗(yàn)材料
3.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與飼養(yǎng)管理
3.1.2 試驗(yàn)處理與分組
3.1.3 基礎(chǔ)日糧及營(yíng)養(yǎng)水平
3.2 試劑和主要儀器設(shè)備
3.2.1 主要試劑
3.2.2 主要儀器
3.3 樣品采集和測(cè)定
3.3.1 屠宰和采樣
3.3.2 IMF含量測(cè)定
3.3.3 血清中脂聯(lián)素含量測(cè)定
3.3.4 肌肉品質(zhì)測(cè)定
3.3.4.1 肌肉pH值
3.3.4.2 肉色測(cè)定
3.3.4.3 系水力
3.3.4.4 剪切力
3.3.4.5 丙二醛(Malondialdehyde,MDA)
3.3.5 肌肉脂肪酸(fatty acid,FA)組成
3.3.6 Real-time PCR
3.3.7 Western Blot
3.3.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
3.4 結(jié)果
3.4.1 血清脂聯(lián)素水平、肌肉中脂聯(lián)素及其受體基因的表達(dá)
3.4.2 肉品質(zhì)分析
3.4.3 脂肪酸組成分析
3.4.4 羅格列酮和地塞米松對(duì)肌肉中脂代謝相關(guān)因子表達(dá)的影響
3.5 討論
3.6 小結(jié)
第四章 全長(zhǎng)脂聯(lián)素對(duì)雞脂肪細(xì)胞中脂沉積的調(diào)控機(jī)制
4.1 試驗(yàn)材料
4.1.1 樣品、菌株、質(zhì)粒
4.1.2 主要試劑
4.1.3 常用試劑配制
4.2 試驗(yàn)方法
4.2.1 small-interfering RNA(siRNA)設(shè)計(jì)
4.2.2 雞前體原代脂肪細(xì)胞的分離與培養(yǎng)
4.2.3 pcDNA3.1-ADPN及pGPU6/GFP/Neo重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
4.2.4 細(xì)胞處理
4.2.5 轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒細(xì)胞ADPN mRNA和蛋白的檢測(cè)
4.2.6 脂肪細(xì)胞油紅0染色
4.2.7 培養(yǎng)基中游離脂肪酸(Free fatty acid,FFA)和甘油釋放
4.2.7.1 培養(yǎng)基中FFA測(cè)定
4.2.7.2 培養(yǎng)基中甘油測(cè)定
4.2.8 Real-time PCR檢測(cè)脂代謝標(biāo)志基因表達(dá)
4.2.9 Western blot檢測(cè)脂代謝標(biāo)志蛋白及信通路標(biāo)志蛋白磷酸化水平
4.2.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及分析
4.3 試驗(yàn)結(jié)果與分析
4.3.1 脂聯(lián)素超表達(dá)載體和干擾載體的轉(zhuǎn)染效率檢測(cè)
4.3.2 超表達(dá)及干擾ADPN基因?qū)﹄u原代脂肪細(xì)胞中脂代謝的影響
4.3.3 超表達(dá)及干擾ADPN基因?qū)﹄u脂肪細(xì)胞中脂代謝關(guān)鍵基因表達(dá)的影響
4.3.4 超表達(dá)ADPN基因激活p38 MAPK/ATF-2信號(hào)通路
4.3.5 超表達(dá)ADPN抑制TOR/p70 S6Kinase信號(hào)通路
4.4 討論
4.5 小結(jié)
第五章 重組球狀脂聯(lián)素通過p38 MAPK和TOR信號(hào)通路抑制雞原代脂肪細(xì)胞脂質(zhì)蓄積
5.1 材料
5.1.1 材料
5.1.2 主要試劑
5.1.3 主要儀器
5.2 試驗(yàn)方法
5.2.1 雞前體脂肪細(xì)胞的分離培養(yǎng)
5.2.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
5.2.3 油紅O染色提取測(cè)胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積
5.2.4 培養(yǎng)基中FFA的釋放
5.2.5 實(shí)時(shí)定量檢測(cè)脂代謝基因表達(dá)
5.2.6 Western蛋白印跡檢測(cè)脂代謝相關(guān)蛋白以及通路磷酸化水平
5.2.7 數(shù)據(jù)分析
5.3 結(jié)果與分析
5.3.1 外源添加重組脂聯(lián)素對(duì)雞原代脂肪細(xì)胞內(nèi)源脂聯(lián)素及其受體表達(dá)的影響
5.3.2 外源添加重組脂聯(lián)素對(duì)雞原代脂肪細(xì)胞脂質(zhì)沉積的影響
5.3.3 球狀脂聯(lián)素在雞脂肪細(xì)胞中激活p38 MAPK/ATF-2信號(hào)通路
5.3.4 球狀脂聯(lián)素在雞脂肪細(xì)胞中抑制TOR/p70 S6Kinase信號(hào)通路
5.3.5 球狀脂聯(lián)素與p38 MAPK通路對(duì)脂肪細(xì)胞分化的影響
5.3.6 球狀脂聯(lián)素與TOR通路對(duì)脂肪細(xì)胞分化的影響
5.4 討論
5.5 小結(jié)
第六章 脂聯(lián)素對(duì)雞脂肪細(xì)胞分化及線粒體發(fā)育和功能調(diào)控機(jī)制
6.1. 材料與方法
6.1.1 試驗(yàn)材料
6.1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物、腺病毒、質(zhì)粒
6.1.1.2 主要試驗(yàn)試劑
6.1.1.3 主要試驗(yàn)儀器
6.1.2 試驗(yàn)方法
6.1.2.1 主要溶液配制
6.1.2.2 肉雞原代脂肪細(xì)胞培養(yǎng)
6.1.2.3 細(xì)胞處理
6.1.2.4 細(xì)胞形態(tài)觀察、油紅O染色及Bodipy染色
6.1.2.5 透射電鏡觀察線粒體數(shù)目
6.1.2.6 JC-1染色檢測(cè)線粒體膜通透性
6.1.2.7 JC-1染色流式細(xì)胞術(shù)
6.1.2.8 Cyt-c免疫熒光分析
6.1.2.9 細(xì)胞總RNA提取及Realtime-PCR檢測(cè)脂代謝及線粒體標(biāo)志基因表達(dá)
6.1.2.10 細(xì)胞總蛋白收取及Westernblot檢測(cè)脂代謝、線粒體中標(biāo)志蛋白和通路蛋白磷酸化水平
6.1.2.11 葡萄糖攝取率及培養(yǎng)基中游離脂肪酸含量檢測(cè)
6.1.3 數(shù)據(jù)處理及分析
6.2 試驗(yàn)結(jié)果
6.2.1 超表達(dá)及干擾效率檢測(cè)
6.2.2 脂聯(lián)素對(duì)脂肪細(xì)胞中脂代謝的影響
6.2.3 脂聯(lián)素對(duì)雞原代脂肪細(xì)胞脂代謝基因表達(dá)的影響
6.2.4 脂聯(lián)素對(duì)雞原代脂肪細(xì)胞葡萄糖攝取及脂解影響
6.2.5 脂聯(lián)素對(duì)雞原代脂肪細(xì)胞線粒體發(fā)育的影響
6.2.6 脂聯(lián)素對(duì)雞原代脂肪細(xì)胞中Cyt-C表達(dá)影響
6.2.7 脂聯(lián)素對(duì)線粒體中糖脂代謝相關(guān)標(biāo)志基因及蛋白表達(dá)的影響
6.2.8 脂聯(lián)素對(duì)雞脂肪細(xì)胞線粒體通透性的影響
6.2.9 脂聯(lián)素對(duì)雞原代脂肪細(xì)胞中相關(guān)信號(hào)通路的影響
6.3 討論
6.4 小結(jié)
結(jié)論與進(jìn)一步研究計(jì)劃
參考文獻(xiàn)
縮略詞
致謝
作者簡(jiǎn)介
本文編號(hào)：3995464
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