發(fā)布時間：2024-07-06 09:27

　　由絲狀支原體山羊亞種(Mycoplasma. Mycoides subsp. capri. Mmc)引起的山羊傳染性胸膜肺炎(contagious caprine pleuropneumonia, CCPP)是山羊特有的一種接觸性傳染病。絲狀支原體山羊亞種屬于絲狀支原體簇,絲狀支原體簇共有六個成員,PG3標(biāo)準(zhǔn)株是在1951年由Chu和Berieidege兩人分離得到。山羊傳染性胸膜肺炎的主要臨床癥狀有纖維素性肺炎、高熱和胸膜炎等。在我國很多地區(qū)發(fā)病率較高,給很多地區(qū)的山羊飼養(yǎng)業(yè)造成了較大的經(jīng)濟損失和潛在威脅。乳酸脫氫酶(LDH)又稱為NAD+氧化酶,是生物體內(nèi)氧化還原反應(yīng)過程中重要的催化劑之一,也是糖代謝酵解途徑的關(guān)鍵酶之一。LDH廣泛存在于動物組織和各種微生物細(xì)胞內(nèi),在高等動物體內(nèi)只存在一種乳酸脫氫酶L-乳酸脫氫酶,在細(xì)菌中兩種乳酸脫氫酶都存在。關(guān)于絲狀支原體山羊亞種乳酸脫氫酶的研究尚未見報道。本實驗對絲狀支原體山羊亞種乳酸脫氫酶進行克隆表達(dá),空間結(jié)構(gòu)預(yù)測,并對其免疫學(xué)特性進行了初步研究,為尋找該病原的靶位點以及進一步研制亞單位疫苗或診斷抗原等后續(xù)研究提供理論基礎(chǔ)。 1.LDH蛋白的...

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
第1章 文獻綜述
    1.1 支原體概述
    1.2 支原體的致病機制
    1.3 支原體功能蛋白
    1.4 山羊傳染性胸膜肺炎
        1.4.1 山羊傳染性胸膜肺炎病原
        1.4.2 流行病學(xué)
        1.4.3 山羊傳染性胸膜肺炎的診斷與防治
    1.5 乳酸脫氫酶概述
    1.6 乳酸脫氫酶酶學(xué)性質(zhì)
第2章 引言
    2.1 研究背景與意義
    2.2 技術(shù)路線
第3章 LDH基因的克隆與表達(dá)
    3.1 實驗材料
        3.1.1 菌株及質(zhì)粒
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要儀器設(shè)備
        3.1.4 試劑配制
    3.2 實驗方法
        3.2.1 山羊支原體的復(fù)壯
        3.2.2 山羊支原體絲狀亞種標(biāo)準(zhǔn)株P(guān)G3基因組DNA的制備
        3.2.3 引物設(shè)計合成
        3.2.4 第一個點突變
        3.2.5 第二、三個點的突變
        3.2.6 pGEX-6P-2-LDH在E.coli XL-1中的表達(dá)
        3.2.7 重組蛋白LDH的酶切純化
        3.2.8 LDH的大規(guī)模制備與純化
    3.3 實驗結(jié)果
        3.3.1 LDH的PCR結(jié)果
        3.3.2 重組質(zhì)粒pGEX-6P-2-LDH酶切鑒定
        3.3.3 序列測定
        3.3.4 LDH蛋白的純化與表達(dá)
    3.4 討論
第4章 生物信息學(xué)分析
    4.1 材料來源
    4.2 方法
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 LDH的理化性質(zhì)
        4.3.2 LDH信號肽預(yù)測
        4.3.3 LDH跨膜區(qū)預(yù)測
        4.3.4 LDH二級結(jié)構(gòu)預(yù)測
        4.3.5 蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)
    4.4 討論
第5章 免疫學(xué)特性
    5.1 實驗材料
        5.1.1 主要試劑
        5.1.2 主要儀器設(shè)備
        5.1.3 主要溶液及試劑配制
    5.2 實驗方法
        5.2.1 重組蛋白LDH兔抗血清的制備
        5.2.2 免疫印跡試驗(Western blotting)
    5.3 實驗結(jié)果
        5.3.1 LDH蛋白的免疫效果檢測
    5.4 討論
第6章 . 論文總結(jié)
    6.1 絲狀支原體山羊亞種乳酸脫氫酶的克隆表達(dá)及純化
    6.2 絲狀支原體山羊亞種乳酸脫氫酶的免疫原性
    6.3 絲狀支原體山羊亞種乳酸脫氫酶生物信息學(xué)分析
參考文獻
附表
致謝



本文編號：4002392