發(fā)布時(shí)間：2020-11-15 08:51

　　 目的:探討miR-373-3p表達(dá)變化對(duì)人子宮內(nèi)膜癌HEC-1A細(xì)胞增殖和遷移生物學(xué)特性的影響,并對(duì)是否調(diào)控LAST2的表達(dá)做進(jìn)一步研究,闡明miR-373-3p促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌增殖及遷移的可能分子機(jī)制,為子宮內(nèi)膜癌潛方法:構(gòu)建miR-373-3p mimics和inhibitor慢病毒載體,分別感染至子宮內(nèi)膜癌HEC-1A細(xì)胞中,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)感染后的HEC-1A細(xì)胞中miR-373-3p的表達(dá)變化,采用CCK-8法檢測(cè)miR-373-3p對(duì)細(xì)胞增殖能力的影響,采用劃痕觀察miR-373-3p對(duì)細(xì)胞間接遷移能力的影響,采用Transwell小室實(shí)驗(yàn)分析miR-373-3p對(duì)細(xì)胞直接遷移能力的影響。通過(guò)進(jìn)一步的生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)miR-373-3p的潛在靶基因,并運(yùn)用Western Blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)上調(diào)或下調(diào)miR-373-3p的子宮內(nèi)膜癌HEC-1A細(xì)胞中LAST2的表達(dá),初步驗(yàn)證miR-373-3p的作用靶點(diǎn)。結(jié)果:測(cè)序結(jié)果證實(shí)成功構(gòu)建人miR-373-3p mimics和inhibitor慢病毒載體。miR-373-3p mimics和inhibitor分別成功上調(diào)和下調(diào)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株HEC-1A中miR-373-3p的表達(dá),CCK-8結(jié)果顯示上調(diào)miR-373-3p的表達(dá)能夠明顯促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌HEC-1A細(xì)胞的增殖能力,而沉默miR-373-3p的表達(dá)明顯抑制HEC-1A細(xì)胞增殖能力;劃痕和Transwell小室結(jié)果表明過(guò)表達(dá)miR-373-3p明顯促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌HEC-1A細(xì)胞遷移能力,而低表達(dá)miR-373-3p則降低了HEC-1A細(xì)胞的遷移能力。根據(jù)生物信息學(xué)軟件靶基因預(yù)測(cè)提示LATS2是miR-373-3p靶基因之一,Western Blot實(shí)驗(yàn)表明過(guò)表達(dá)miR-373-3p明顯抑制了子宮內(nèi)膜癌HEC-1A細(xì)胞中LATS2蛋白表達(dá),而低表達(dá)miR-373-3p明顯增高HEC-1A細(xì)胞LATS2蛋白表達(dá)。結(jié)論:miR-373-3p在子宮內(nèi)膜癌HEC-1A細(xì)胞中可能發(fā)揮癌基因作用,過(guò)表達(dá)miR-373-3p能夠促進(jìn)HEC-1A細(xì)胞的增殖和遷移能力,而低表達(dá)miR-373-3p則抑制HEC-1A細(xì)胞的增殖和遷移能力。miR-373-3p可能通過(guò)調(diào)控LATS2表達(dá)影響子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展,是一個(gè)治療子宮內(nèi)膜癌的潛在靶點(diǎn)。
【學(xué)位單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類(lèi)】：R737.33
【部分圖文】：

miR-373-3p 對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞 HEC-1A 增殖和遷移的影響 2018 屆碩士學(xué)位論文結(jié)果一．質(zhì)粒的測(cè)序鑒定結(jié)果（1）重組的 GV369-pre-miRNA-373-3p mimics 質(zhì)粒送 DNA 測(cè)序，測(cè)序結(jié)果見(jiàn)圖一，結(jié)果顯示：質(zhì)粒測(cè)序結(jié)果正確，以下為部分測(cè)序結(jié)果,該序列為GV369-pre-miRNA-373-3p mimics 序列，表明 GV369-pre-miRNA-373-3mimics 慢病毒表達(dá)載體構(gòu)建成功。

圖 2 GV280－ pre -miRNA-373-3p inhibitor 測(cè)序圖譜Figure 2 Sequence of GV280－ pre -miRNA -373-3p inhibitor plasmid二．慢病毒滴度的測(cè)定慢病毒三質(zhì)粒系統(tǒng)共轉(zhuǎn)染 293T 細(xì)胞，轉(zhuǎn)染 48h 后在熒光顯微鏡下察 293T 細(xì) 胞 可 見(jiàn) GFP 綠 色 熒 光 蛋 白 表 達(dá) 。 慢 病 GV369-pre-miRNA-373-3p mimics 的病毒滴度約為 4×108TU/ml，對(duì)應(yīng)空慢病毒的病毒滴度約為 1 ×109TU/ml（圖 3）。慢病毒 GV280- pre -miRN-373-3p inhibitor 的病毒滴度約為 6×108TU/ml，對(duì)應(yīng)空載慢病毒的病毒度約為 4 ×108TU/ml（圖 4）。

圖 2 GV280－ pre -miRNA-373-3p inhibitor 測(cè)序圖譜Figure 2 Sequence of GV280－ pre -miRNA -373-3p inhibitor plasmid毒滴度的測(cè)定毒三質(zhì)粒系統(tǒng)共轉(zhuǎn)染 293T 細(xì)胞，轉(zhuǎn)染 48h 后在熒光顯T 細(xì) 胞 可 見(jiàn) GFP 綠 色 熒 光 蛋 白 表 達(dá) 。 pre-miRNA-373-3p mimics 的病毒滴度約為 4×108TU/ml，病毒滴度約為 1 ×109TU/ml（圖 3）。慢病毒 GV280- prinhibitor 的病毒滴度約為 6×108TU/ml，對(duì)應(yīng)空載慢病毒4 ×108TU/ml（圖 4）。
【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 楊艷;楊文成;王雅莉;張國(guó)梅;王凱;田曉娜;李紅娟;;表皮生長(zhǎng)因子受體對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞遷移、侵襲能力的影響[J];中國(guó)婦幼保健;2015年36期

2 丁寧;畢文祥;孔峰;張培海;;Ⅰ型與Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞抗氧化能力的比較[J];山東大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2009年05期

3 雷玲;李力;常淑芳;;全反式維甲酸對(duì)人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞MMP-9表達(dá)影響的研究[J];重慶醫(yī)學(xué);2006年02期

4 徐春陽(yáng),粱志清,熊光武;二氧化碳人工氣腹對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞體外生長(zhǎng)的影響[J];中華婦產(chǎn)科雜志;2003年12期

5 洪雨,鐘慈聲,杜心谷;正常子宮內(nèi)膜腺上皮和子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)[J];上海醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1988年01期

6 賀莉芳;萬(wàn)啟惠;劉暉;張曦;;家蠅幼蟲(chóng)抗菌蛋白對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞生長(zhǎng)影響[J];中國(guó)公共衛(wèi)生;2008年05期

7 王巧蓮;梁元姣;吳元赭;郝群;卓士超;;來(lái)曲唑?qū)θ俗訉m內(nèi)膜癌細(xì)胞作用的研究[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào);2007年06期

8 張巖,廖秦平,于麗,陳春玲,趙健;反義寡核苷酸對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞雌激素受體亞型α特異性調(diào)控的研究[J];北京大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2005年02期

9 李曉玲;鄧亞麗;鄒明英;謝明;;bFGF調(diào)控CD34對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響[J];湘南學(xué)院學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2011年01期

10 陸琳;楊曉萍;郭飛燕;熊夢(mèng)舟;孟偉;沈媛;鄭軍生;;靜寂孕激素受體對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞化療及激素敏感性的影響[J];廣東醫(yī)學(xué);2013年18期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 景璇璇;雌激素受體α陽(yáng)性巨噬細(xì)胞對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞侵襲遷移的影響及機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2019年

2 李豐玲;MiR-200c靶向BMI-1基因抑制子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2018年

3 潘新;LINC01016靶向抑制miR-302a-3p、miR-3130-3p調(diào)控NFYA/SATB1影響子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞生物學(xué)行為的分子機(jī)制研究[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2018年

4 王朕華;KCa3.1通道對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增生影響的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2006年

5 艾志宏;Survivin對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及其相關(guān)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路[D];復(fù)旦大學(xué);2006年

6 葛新;G蛋白偶聯(lián)雌激素受體介導(dǎo)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞雌激素的非轉(zhuǎn)錄效應(yīng)的研究[D];鄭州大學(xué);2013年

7 代聰偉;IGF-1和IGF-2及其受體對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響及機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2017年

8 滕飛;腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞影響子宮內(nèi)膜癌發(fā)展的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2014年

9 張英麗;中電導(dǎo)鈣激活鉀離子通道對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及調(diào)控機(jī)制[D];復(fù)旦大學(xué);2009年

10 劉洋;姜類(lèi)萜類(lèi)化合物激活P53信號(hào)通路誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜細(xì)胞凋亡研究[D];山東大學(xué);2013年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 王毛毛;脂聯(lián)素抑制子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞生長(zhǎng)及其信號(hào)通路激活的作用機(jī)制研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2018年

2 李美儀;miR-373-3p對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞HEC-1A增殖和遷移的影響[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2018年

3 趙晨陽(yáng);IGFBP-rP1對(duì)胰島素活化子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞PI3K/Akt信號(hào)通路的影響[D];鄭州大學(xué);2018年

4 丁寧;過(guò)氧化氫和谷胱甘肽對(duì)Ⅰ型與Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響[D];山東大學(xué);2009年

5 盧雪景;2，3', 4, 5'-四甲氧基二苯乙烯對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2012年

6 孫世宇;子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞雌孕激素受體甲基化對(duì)其表達(dá)及細(xì)胞生長(zhǎng)作用的影響[D];遼寧醫(yī)學(xué)院;2012年

7 王麗君;瘦素對(duì)人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞雌激素原位合成的影響[D];遼寧醫(yī)學(xué)院;2011年

8 楊玉路;催乳素促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌發(fā)展的體外及體內(nèi)模型的建立與鑒定[D];中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué);2011年

9 張萍萍;環(huán)巴胺抑制子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞生長(zhǎng)及機(jī)制探討[D];河北北方學(xué)院;2017年

10 梁少鳳;雌激素誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞產(chǎn)生的VEGF、bFGF對(duì)其生物學(xué)行為的影響及作用機(jī)制的研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2013年

本文編號(hào)：2884575