發(fā)布時間：2020-11-19 20:13

　　 目的1.構建過敏性支氣管哮喘大鼠模型。2.在哮喘大鼠第一次哮喘發(fā)作前給予藥物干預，探討葛根素對大鼠實驗性哮喘有無預防作用。3.在哮喘大鼠第一次哮喘發(fā)作后給予藥物干預，探討葛根素對大鼠實驗性哮喘有無治療作用。 方法1.將20只SPF級雄性Wistar大鼠隨機分為正常對照組和哮喘模型組。哮喘模型組采用OVA（ovalbumin,卵清蛋白）+氫氧化鋁凝膠致敏3次后，OVA激發(fā)1次建模，正常對照組以NS（normal saline，生理鹽水）為替代品致敏和激發(fā)。建模后通過觀察大鼠行為學改變，檢測BALF（broncho-alveolar lavage fluid，支氣管肺泡灌洗液）中炎性細胞構成，肺組織病理學，細胞因子水平，血流變，動脈血氣，凝血四項等對模型建立成功與否進行評價。2.將50只SPF級雄性Wistar大鼠隨機分為5個實驗組，分別為正常對照組，哮喘對照組，哮喘PUE（puerarin,葛根素）預防組，哮喘PUE+DEX預防組，哮喘DEX（dexamethasone，地塞米松）預防組。除正常對照組外，其余各組大鼠分別于第0、7、14天腹腔注射OVA+氫氧化鋁凝膠混合物1ml致敏；第21天將大鼠用乙醚麻醉后氣道內滴入1%的OVA200μl進行激發(fā)。正常對照組：以NS為替代品進行致敏和激發(fā)。自第15天至第20天，各組大鼠分別接受以下干預：①正常對照組：1ml NS灌胃+1ml NS腹腔注射；②哮喘對照組：1ml NS灌胃+1ml NS腹腔注射；③哮喘PUE預防組：100mg/kg葛根素灌胃+1ml NS腹腔注射；④哮喘PUE+DEX預防組：100mg/kg葛根素灌胃+0.5mg/kg地塞米松腹腔注射；⑤哮喘DEX預防組：1ml NS灌胃+0.5mg/kg地塞米松腹腔注射。第22天處死大鼠，檢測各組大鼠炎癥指標（BALF中炎癥細胞計數(shù)、肺組織病理學、炎癥因子等）及凝血指標（凝血四項及外源性、內源性凝血因子活性等）的改變，評價葛根素對大鼠實驗性哮喘有無預防作用及其療效。3.將50只SPF級雄性Wistar大鼠隨機分為5個實驗組，分別為正常對照組，哮喘對照組，哮喘PUE治療組，哮喘PUE+DEX治療組，哮喘DEX治療組。除正常對照組外，其余各組大鼠分別于第0、7、14天腹腔注射OVA+氫氧化鋁凝膠混合物1ml致敏；第21天將大鼠用乙醚麻醉后氣道內滴入1%的OVA200μl進行激發(fā)；第28天將大鼠用乙醚麻醉后氣道內滴入0.5%的OVA200μl激發(fā)。正常對照組：以NS為替代品進行致敏和激發(fā)。自第22天至第27天，各組大鼠分別接受以下干預：①正常對照組：1ml NS灌胃+1ml NS腹腔注射；②哮喘對照組：1ml NS灌胃+1ml NS腹腔注射；③哮喘PUE治療組：100mg/kg葛根素灌胃+1ml NS腹腔注射；④哮喘PUE+DEX治療組：100mg/kg葛根素灌胃+0.5mg/kg地塞米松腹腔注射；⑤哮喘DEX治療組：1ml NS灌胃+0.5mg/kg地塞米松腹腔注射。第29天處死大鼠，檢測各組大鼠炎癥指標（BALF中炎癥細胞計數(shù)、肺組織病理學、炎癥因子等）及凝血指標（凝血四項及外源性、內源性凝血因子活性等）的改變，評價葛根素對大鼠實驗性哮喘有無治療作用及其療效。 結果1.大鼠哮喘模型觀察：與正常大鼠相比，哮喘大鼠BALF中總細胞計數(shù)及嗜酸細胞百分比(P0.01，P0.01)顯著增高，肺組織病理切片，炎癥因子(TNF-α(P0.01)、IFN-γ(P0.01))，血氣分析(PaO2(P0.05)、SaO2(P0.05))等均有顯著的改變。2.葛根素對大鼠過敏性哮喘預防作用觀察：在炎癥指標方面，葛根素能夠有效的減輕哮喘大鼠氣道炎癥（BALF中總細胞計數(shù)及嗜酸細胞百分比(P0.01，P0.01)，肺組織病理學改變顯著減輕，血清IL-10水平升高，肺組織IL-10mRNA基因表達上調），但效果不及地塞米松；在凝血指標方面，葛根素能夠有效的糾正哮喘大鼠凝血平衡紊亂（PT(P0.01), TT(P0.05), FIB(P0.01)；FII(P0.01), FV(P0.05), FVII(P0.05), FX(P0.05), FVIII(P0.01), FIX(P0.05),FXII(P0.05)），顯著下調FVII mRNA基因表達水平(P0.01),且效果優(yōu)于地塞米松。3.葛根素對大鼠過敏性哮喘治療作用觀察：在炎癥指標方面，葛根素能夠有效的減輕哮喘大鼠氣道炎癥（BALF中總細胞計數(shù)及嗜酸細胞百分比(P0.01，P0.01)，肺組織病理學改變顯著減輕，血清IL-10水平升高，肺組織IL-10mRNA基因表達顯著上調(P0.01)），但效果不及地塞米松；在凝血指標方面，葛根素能夠有效的糾正哮喘大鼠凝血平衡紊亂（PT(P0.01), TT(P0.05), FIB(P0.05)；FII(P0.05), FVII(P0.05), FX(P0.05), FVIII(P0.01), FXII(P0.01)），顯著下調FVII mRNA基因表達水平(P0.01),且效果優(yōu)于地塞米松。 結論1.本實驗成功的建立了過敏性哮喘大鼠模型；2.葛根素能夠有效地預防大鼠過敏性哮喘；3.葛根素能夠有效地治療大鼠過敏性哮喘。
【學位單位】：中國人民解放軍軍醫(yī)進修學院
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2013
【中圖分類】：R562.25
【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
研究背景
    參考文獻
第一部分 過敏性哮喘大鼠模型的建立
    一. 前言
    二. 實驗材料
    三. 實驗方法
    四. 實驗結果
    五. 討論
    參考文獻
第二部分 過敏性哮喘大鼠模型的優(yōu)化
    一. 前言
    二. 實驗材料
    三. 實驗方法
    四. 實驗結果
    五. 討論
    參考文獻
第三部分 葛根素對大鼠過敏性哮喘的預防作用研究
    一. 前言
    二. 實驗材料
    三. 實驗方法
    四. 實驗結果
    五. 討論
    參考文獻
第四部分 葛根素對大鼠過敏性哮喘的治療作用研究
    一. 前言
    二. 實驗材料
    三. 實驗方法
    四. 實驗結果
    五. 討論
    參考文獻
綜述：過敏性哮喘動物模型的研究現(xiàn)狀
    參考文獻
綜述：哮喘與凝血
    參考文獻
附錄：英文縮略詞表
攻讀碩士期間發(fā)表論文
致謝

【參考文獻】

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本文編號：2890386