發(fā)布時(shí)間：2020-11-18 10:44

【摘要】：急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)是一種急性彌漫性肺部炎癥,導(dǎo)致嚴(yán)重的低氧血癥并需要機(jī)械通氣治療。ARDS不僅是呼吸危重癥,而且可引起多器官功能障礙綜合征,因此ARDS也被認(rèn)為是一個(gè)全身性疾病,發(fā)病率和死亡率均高。ARDS死亡率與其嚴(yán)重程度正相關(guān),病情越重,幸存患者接受機(jī)械通氣的時(shí)間也越長(zhǎng)。雖然保護(hù)性機(jī)械通氣策略降低了 ARDS患者的死亡率,然而,ARDS病因復(fù)雜、疾病進(jìn)展迅猛、患者的個(gè)體差異等因素使得機(jī)械通氣對(duì)ARDS治療成功的提升空間有限。此外,機(jī)械通氣在挽救 ARDS患者生命的同時(shí),容易誘導(dǎo)機(jī)械通氣肺損傷(VILI),引起炎癥介質(zhì)過(guò)度釋放,進(jìn)一步加重ARDS患者存在的肺損傷,并通過(guò)促進(jìn)炎癥反應(yīng)加速ARDS患者死亡。肺泡上皮細(xì)胞在VILI中扮演重要角色,一方面它作為肺泡組成細(xì)胞參與肺泡損傷和修復(fù),另一方面,它也與中性粒細(xì)胞激活密切關(guān)聯(lián),是傳導(dǎo)損傷導(dǎo)致炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵細(xì)胞。蛋白質(zhì)異戊二烯化能夠?qū)�C末端含有CAAX的基序進(jìn)行修飾,被修飾的蛋白隨后定位到細(xì)胞膜上發(fā)生活化,調(diào)節(jié)器官損傷和炎癥。FPP和GGPP是細(xì)胞甲羥戊酸途徑中的重要中間產(chǎn)物,GGPPS1是催化FPP合成GGPP過(guò)程中的關(guān)鍵酶,并與肺發(fā)育密切相關(guān),但GGPPSI在ARDS和VILI時(shí)如何表達(dá)及作用機(jī)制并不清楚。因此,我們從ARDS和機(jī)械通氣均密切相關(guān)的肺泡 Ⅱ型上皮細(xì)胞的蛋白質(zhì)異戊二烯化著手,首先通過(guò)檢測(cè)ARDS合并機(jī)械通氣的患者和非ARDS的對(duì)照組肺泡灌洗液(BALF)中GGPPS1的表達(dá)來(lái)驗(yàn)證其是否與ARDS相關(guān);接著,利用大潮氣量誘導(dǎo)VILI模型,通過(guò)電鏡、HE、IHC、ELISA、Western blotting、q-PCR、流式細(xì)胞儀等方法詳細(xì)觀察肺組織損傷、炎癥和GGPPS1的表達(dá),驗(yàn)證GGPPS1與損傷和炎癥的關(guān)系;最后,我們利用特異性敲除肺泡Ⅱ型上皮GGPPS1基因小鼠,通過(guò)肺組織mRNA測(cè)序,尋找并驗(yàn)證GGPPS1調(diào)控VILI損傷和炎癥的作用機(jī)制。研究發(fā)現(xiàn):ARDS機(jī)械通氣患者BALF中GGPPS1濃度較對(duì)照組顯著上升,VILI模型肺組織GGPPS1亦表達(dá)上調(diào);機(jī)械通氣損傷肺泡上皮結(jié)構(gòu),電鏡可見(jiàn)肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞腫脹變形,損害嚴(yán)重;而敲除GGPPS1后,改善肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞損傷及肺損傷程度,降低肺組織滲漏、BALF中蛋白含量;減少中性粒細(xì)胞浸潤(rùn),增加中性粒細(xì)胞凋亡比例,改善急性肺損傷評(píng)分;抑制IL-6,IL-1β,IL-18,TNF-α,CXCL2等炎癥相關(guān)因子表達(dá);進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),GGPPS1是通過(guò)影響TLRs受體途徑調(diào)控炎癥,敲除GGPPS1后,TLR2、TLR4下調(diào),TLR5上調(diào),抑制TLRs下游炎癥通路蛋白MyD88-TRAF6-TAK1-API的表達(dá),此外,促進(jìn)凋亡相關(guān)的FADD,Caspase8,Fas表達(dá)、抑制Bcl-2的表達(dá)。綜上所述,研究證實(shí)了 GGPPS1參與了 ARDS和VILI的炎癥、損傷過(guò)程。敲除GGPPS1,可通過(guò)TLRs樣受體及其下游的MyD88-TRAF6-TAK1-AP1途徑抑制炎癥,此外,也可通過(guò)FADD-Caspase8途徑促進(jìn)中性粒細(xì)胞凋亡。
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R563.8
【圖文】：

圖１－１甲羥戊酸途徑

Ｉ?ｇｇｔ？＾ｈ?＾?Ｒａｂ?ｓｍａ＂?（３?ｐｒｏｔｅｉｎｓ??圖１－１甲羥戊酸途徑。甲羥戊酸是ＦＰＰ和ＧＧＰＰ的前體，ＦＰＰ和ＧＧＰＰ是異戊烯化酶的底??物。此外，異戊烯化使ＦＰＰ可以通過(guò)一系列步驟產(chǎn)生膽固醇、血紅素和多萜醇。ＧＧＰＰ可??以合成輔酶。針對(duì)相應(yīng)酶的特異性抑制劑用灰色字體表示。圖片來(lái)源［５７］??Ｆｉｇ．ｌ－ｌＴｈｅ?ｍｅｖａｌｏｎａｔｅ?ｐａｔｈｗａｙ．?Ｍｅｖａｌｏｎａｔｅ?ｉｓ?ｔｈｅ?ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ?ｏｆ?ＦＰＰ?ａｎｄ?ＧＧＰＰ，?ｗｈｉｃｈ?ａｒｅ?ｔｈｅ??ｓｕｂｓｔｒａｔｅ?ｆｏｒ?ｐｒｅｎｙｌａｔｉｏｎ?ｅｎｚｙｍｅｓ．?Ｉｎ?ａｄｄｉｔｉｏｎ?ｔｏ?ｐｒｅｎｙｌａｔｉｏｎ，?ＦＰＰ?ｃａｎ?ｐｒｏｄｕｃｅ?ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ，?Ｈｅｍｅ??Ａ?ａｎｄ?ｄｏｌｉｃｈｏｌ?ｖｉａ?ａ?ｓｅｒｉｅｓ?ｏｆ?ｓｔｅｐｓ．?ＧＧＰＰ?ｃａｎ?ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅ?ｕｂｉｑｕｉｎｏｎｅ．?Ｔｈｅ?ｓｐｅｃｉｆｉｃ?ｉ

第二章實(shí)驗(yàn)結(jié)果設(shè)兩孔，沒(méi)孔加入相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品５０汕其余每個(gè)檢測(cè)孔直接加待測(cè)?（詳見(jiàn)廠家說(shuō)明書）。??．１．３．３統(tǒng)計(jì)方法：所有計(jì)量數(shù)值用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（Ｍｅａｎ±ＳＤ）表間數(shù)值選用獨(dú)立樣本Ｔ檢驗(yàn)，三組及四組組間比較使用單因素。數(shù)據(jù)處理使用ＳＰＳＳ?１９．０統(tǒng)計(jì)軟件，部分?jǐn)?shù)據(jù)處理及制圖采用??ｒａｐｈｐａｄＰｒｉｓｍ．５軟件Ｐ＜０．０５為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。??．?４實(shí)驗(yàn)結(jié)果??２．１．４．１?ＧＧＰＰＳ１在ＡＲＤＳ患者肺泡灌洗液中表達(dá)增力卩（Ｆｉｇ．２－１）??與對(duì)照組相比較，ＡＲＤＳ組患者的肺泡灌洗液中ＧＧＰＰＳ１濃度上升約?３．７６?倍（９０．７８?±３７．２３?ＶＳ?２４．１２?±８．８６?Ｐ＜０．００１；?９５％?ＣＩ：?３有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。??
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2888632