TRB3表達通過MAPK/ERK依賴信號通路對TGF-β刺激后小鼠Ⅱ型肺泡上皮細胞EMT影響
發(fā)布時間：2020-12-07 09:52
目的:通過觀察Tribbles同源蛋白3（TRB3）過表達及表達下調(diào)與絲裂素活化蛋白激酶/細胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（MAPK/ERK）信號通路在腺病毒轉(zhuǎn)染小鼠Ⅱ型肺泡上皮細胞MLE-12上皮細胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化（EMT）的關系,探討TRB3及MAPK/ERK在肺纖維化中的相互作用。方法:1.實驗分組:空白對照組（C組）,綠色熒光蛋白（GFP）示蹤基因Ad-GFP感染組（G組）,Ad-TRB3感染組（TRB3組）,Ad-TRB3-sh RNA感染組（TRB3-sh RNA組）,單純TGF-β1刺激組（T組）,TGF-β1+Ad-GFP組（T+GFP組）,TGF-β1+Ad-TRB3感染組（T+TRB3組）,TGF-β1+Ad-TRB3-sh RNA感染組（T+TRB3-sh RNA組）;2.Ad-GFP,Ad-TRB3,Ad-TRB3-sh RNA載體的構(gòu)建,鑒定及擴增;3.以不同感染復數(shù)感染對數(shù)生長期的MLE-12,通過熒光顯微鏡和流式細胞技術了解最佳感染效率;4.CCK8法測定各組細胞DNA的合成;5.FACS法檢測各組細胞凋亡情況;6.q PCR法檢測TRB3,膠原蛋白Ⅰ（CollaⅠ）,...
【文章來源】：青島大學山東省
【文章頁數(shù)】：74 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
干擾siRNA刺激后，TRB3蛋白的表達下降，以siRNA1最明顯B3
3.1.2 TGF-β1 適宜刺激濃度為 10ng/mLE-Cadherin蛋白含量在不同TGF-β 1 濃度結(jié)果分析：1ng/mL（t=32.909，P＜0.01）、5ng/mL（t=1.559，P＞0.05）、10ng/mL（t=-8.444，P＜0.05）、15ng/mL（t=2.078，P＞0.05），Vimentin 蛋白含量在不同TGF-β 1 濃度結(jié)果分析：1ng/mL（t=1.894，P＞0.05）、5ng/mL（t=3.343，P＞0.05）、10ng/mL（t=15.588，P＜0.01）、15ng/mL（t=2.392，P＞0.05）。由此可見在TGF-β 1 刺激濃度為 10ng/mL時E-Cadherin表達最低P＜0.05，Vimentin表達最高P＜0.01，結(jié)果具有統(tǒng)計學意義。表 3.2 不同TGF-β 1 濃度刺激MLE-12 細胞中E-Cadherin、 Vimentin含量（n=3， x ±S）TGF-β 1濃度白含量cell 1ng/mL 5ng/mL 10ng/mL 15ng/mLE-Cadherin 1 1.57±0.03**1.09±0.10 0.61±0.08*1.24±0.Vimentin 1 1.35±0.32 1.83±0.43 2.98±0.22**1.29±0.
組TRB3 10.94±0.031.97±0.31*0.47±0.05**1.66±0.07**1.62±0.13*2.87±0.33*#&0.38±0.06**##Vimentin 11.00±0.011.59±0.03**0.74±0.03**1.31±0.02**1.39±0.09*1.94±0.08**##&0.81±0.02**##E-Cadherin 10.95±0.100.40±0.05**2.10±0.05**0.53±0.11*0.57±0.13*0.26±0.05**#&0.89±0.01**##Fibronectin 10.95±0.051.58±0.17*0.33±0.04**1.42±0.80**1.63±0.11*3.32±0.11**##&&0.46±0.04**##a-SAM 10.88±0.131.59±0.07**0.47±0.09**1.25±0.09*1.26±0.03**1.75±0.14*#&0.64±0.11**##ERK1/2 11.00±0.121.31±0.10*0.50±0.04**1.14±0.05*1.11±0.03*2.04±0.36*#&&0.61±0.03**##p-ERK1/2 11.00±0.011.34±0.07*0.53±0.03**1.14±0.04*1.11±0.04*2.04±0.11**##&&0.45±0.06**##p38MAPK 11.03±0.091.47±0.11*0.57±0.04**1.16±0.04*1.14±0.03*1.52±0.02**##&0.60±0.08*##p-p38MAPK 10.88±0.091.46±0.05**0.52±0.03**1.23±0.08*1.25±0.04**2.21±0.04**##&&0.61±0.05**##
【參考文獻】：
期刊論文
[1]上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關信號通路在肺纖維化發(fā)生發(fā)展中的作用[J]. 韓姣,曾凡軍,陳世雄. 山東醫(yī)藥. 2015(17)
[2]不同濃度TGF-β1對肺泡II型細胞系MLE-12表型及功能的影響[J]. 劉芳君,宋思思,鄧春,郭春寶,符州,劉恩梅,劉莎,譚利,龔財惠. 中國細胞生物學學報. 2014(04)
[3]SB203580對肝纖維化大鼠肝臟Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白表達的影響[J]. 楊新疆,齊翠花,鄭勇,曹玉文,李睿,宋麗秀,趙強,陳衛(wèi)剛. 世界華人消化雜志. 2014(03)
[4]特發(fā)性肺纖維化的治療進展[J]. 田莉瑩,于文成. 青島大學醫(yī)學院學報. 2013(03)
[5]肝纖維化大鼠肝臟中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激相關分子CHOP和TRB3的表達變化[J]. 杜錫潮,韓冰,謝汝佳,鄒河,楊勤. 中國病理生理雜志. 2013(05)
[6]JNK信號通路通過介導細胞凋亡對肺纖維化的調(diào)控作用[J]. 曹鳳菊,劉學軍,鐘劍克. 中國藥物與臨床. 2012(03)
[7]TRB3在腎纖維化中的表達及其與上皮-間葉轉(zhuǎn)化的關系[J]. 劉進穩(wěn),辛冰牧,慕容,花芳. 中國藥理學通報. 2012(03)
[8]肺癌組織中E-cadherin和Vimentin的表達及其與上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的相關性[J]. 田茗源,王林輝,張雄,羅紅池,李昱. 中國生物制品學雜志. 2011(09)
[9]CCl4誘導的大鼠肝纖維化模型肝纖維化逆轉(zhuǎn)與MAPK信號通路的研究[J]. 李政通,李俊,黃成,李浩,章圣鵬,黃艷,陶輝. 中國藥理學通報. 2011(06)
[10]Notch/Jagged信號通路在肝纖維化大鼠模型中的動態(tài)表達及意義[J]. 葉超,陳永平,金曉芝,程瑗,戴志娟,林鐲. 中華傳染病雜志. 2011 (02)
博士論文
[1]Ⅰ型膠原蛋白和TGF-β1在食管鱗癌中生物學意義的研究[D]. 宋永明.山東大學 2014
[2]MAPK信號通道在TGF-β1誘導的肺泡上皮細胞轉(zhuǎn)分化中的作用及沙利度胺的影響[D]. 陳海華.武漢大學 2013
[3]TRB3在腫瘤進展中的作用及其機制探討[D]. 慕容.北京協(xié)和醫(yī)學院 2012
[4]上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)變（EMT）在百草枯中毒大鼠肺纖維化中的作用及機制探討[D]. 易建華.浙江大學 2012
碩士論文
[1]TGF-β1/Smad3與JNK信號通路介導的細胞凋亡在小鼠肺纖維化中的作用及相互關系的研究[D]. 白瓊.山西醫(yī)科大學 2014
[2]核基因Tribble3調(diào)控MAPK信號通路在糖尿病腎病中的作用及機制[D]. 張錦航.山東大學 2014
本文編號：2903050
【文章來源】：青島大學山東省
【文章頁數(shù)】：74 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
干擾siRNA刺激后，TRB3蛋白的表達下降，以siRNA1最明顯B3
3.1.2 TGF-β1 適宜刺激濃度為 10ng/mLE-Cadherin蛋白含量在不同TGF-β 1 濃度結(jié)果分析：1ng/mL（t=32.909，P＜0.01）、5ng/mL（t=1.559，P＞0.05）、10ng/mL（t=-8.444，P＜0.05）、15ng/mL（t=2.078，P＞0.05），Vimentin 蛋白含量在不同TGF-β 1 濃度結(jié)果分析：1ng/mL（t=1.894，P＞0.05）、5ng/mL（t=3.343，P＞0.05）、10ng/mL（t=15.588，P＜0.01）、15ng/mL（t=2.392，P＞0.05）。由此可見在TGF-β 1 刺激濃度為 10ng/mL時E-Cadherin表達最低P＜0.05，Vimentin表達最高P＜0.01，結(jié)果具有統(tǒng)計學意義。表 3.2 不同TGF-β 1 濃度刺激MLE-12 細胞中E-Cadherin、 Vimentin含量（n=3， x ±S）TGF-β 1濃度白含量cell 1ng/mL 5ng/mL 10ng/mL 15ng/mLE-Cadherin 1 1.57±0.03**1.09±0.10 0.61±0.08*1.24±0.Vimentin 1 1.35±0.32 1.83±0.43 2.98±0.22**1.29±0.
組TRB3 10.94±0.031.97±0.31*0.47±0.05**1.66±0.07**1.62±0.13*2.87±0.33*#&0.38±0.06**##Vimentin 11.00±0.011.59±0.03**0.74±0.03**1.31±0.02**1.39±0.09*1.94±0.08**##&0.81±0.02**##E-Cadherin 10.95±0.100.40±0.05**2.10±0.05**0.53±0.11*0.57±0.13*0.26±0.05**#&0.89±0.01**##Fibronectin 10.95±0.051.58±0.17*0.33±0.04**1.42±0.80**1.63±0.11*3.32±0.11**##&&0.46±0.04**##a-SAM 10.88±0.131.59±0.07**0.47±0.09**1.25±0.09*1.26±0.03**1.75±0.14*#&0.64±0.11**##ERK1/2 11.00±0.121.31±0.10*0.50±0.04**1.14±0.05*1.11±0.03*2.04±0.36*#&&0.61±0.03**##p-ERK1/2 11.00±0.011.34±0.07*0.53±0.03**1.14±0.04*1.11±0.04*2.04±0.11**##&&0.45±0.06**##p38MAPK 11.03±0.091.47±0.11*0.57±0.04**1.16±0.04*1.14±0.03*1.52±0.02**##&0.60±0.08*##p-p38MAPK 10.88±0.091.46±0.05**0.52±0.03**1.23±0.08*1.25±0.04**2.21±0.04**##&&0.61±0.05**##
【參考文獻】：
期刊論文
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[10]Notch/Jagged信號通路在肝纖維化大鼠模型中的動態(tài)表達及意義[J]. 葉超,陳永平,金曉芝,程瑗,戴志娟,林鐲. 中華傳染病雜志. 2011 (02)
博士論文
[1]Ⅰ型膠原蛋白和TGF-β1在食管鱗癌中生物學意義的研究[D]. 宋永明.山東大學 2014
[2]MAPK信號通道在TGF-β1誘導的肺泡上皮細胞轉(zhuǎn)分化中的作用及沙利度胺的影響[D]. 陳海華.武漢大學 2013
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[4]上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)變（EMT）在百草枯中毒大鼠肺纖維化中的作用及機制探討[D]. 易建華.浙江大學 2012
碩士論文
[1]TGF-β1/Smad3與JNK信號通路介導的細胞凋亡在小鼠肺纖維化中的作用及相互關系的研究[D]. 白瓊.山西醫(yī)科大學 2014
[2]核基因Tribble3調(diào)控MAPK信號通路在糖尿病腎病中的作用及機制[D]. 張錦航.山東大學 2014
本文編號：2903050
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