發(fā)布時間：2020-11-08 07:34

　　 目的:急性腎損傷是目前已被公認的一種常見的臨床綜合征。Nrf2是在氧化應(yīng)激水平上維持細胞的重要的調(diào)節(jié)因子,正常細胞通過其介導(dǎo)的抗氧化反應(yīng)體系抵抗外源性和內(nèi)源性氧化應(yīng)激,從而提高細胞的抗氧化功能。普遍認為,氧化應(yīng)激導(dǎo)致了AKI的發(fā)生,目前已經(jīng)有研究證明Nrf2在腎臟損傷中具有保護作用。所以本實驗研究的目的是探討Nrf2在葉酸誘導(dǎo)的急性腎損傷中的作用機制。從Nrf2的氧化應(yīng)激,炎癥水平,凋亡,鐵死亡和葉酸代謝等通路入手,嘗試為AKI研究提供新線索。研究方法:本研究以Nrf2全身敲除(Nrf2~(-/-))小鼠和C57BL/6(Nrf2~(+/+))小鼠為研究對象,實驗組靜脈注射100mg/kg劑量的葉酸,對照組注射相同劑量的NaHCO_3,誘導(dǎo)小鼠發(fā)生急性腎損傷。48小時后收取小鼠腎組織,一部分做石蠟切片,病理染色PAS、HE、TUNEL,另一部分提取蛋白以及RNA行分子生物學(xué)檢查,包括:焦亡蛋白caspase1行Western blot檢測,相關(guān)基因Nqo1,Gclc,Gclm,IL6,Tnfα,caspase1,pycard和Txnip-1/2行RT-qPCR檢測,以期明確急性腎損傷組織中Nrf2的作用情況。結(jié)果:注射葉酸48小時后,1、Nrf2~(+/+)小鼠和Nrf2~(-/-)小鼠中的腎臟體積均增大,血清尿素氮和肌酐水平都較對照組明顯升高,且Nrf2~(-/-)小鼠水平更高具有統(tǒng)計學(xué)差異。2、石蠟切片HE和PAS染色顯示,Nrf2~(+/+)小鼠和Nrf2~(-/-)小鼠腎臟病理出現(xiàn)急性腎損傷,且Nrf2~(-/-)小鼠更重。PAS染色定量分析,得出Nrf2~(-/-)小鼠的病理損傷更重。3、葉酸組,抗氧化應(yīng)激基因Nqo1,Gclc,Gclm的m RNA的表達下調(diào),且Nrf2~(-/-)組基因下調(diào)水平更顯著。提示Nrf2的缺失抑制抗氧化應(yīng)激反應(yīng)。4、Nrf2~(-/-)小鼠中IL-6和TNF-α的mRNA水平升高的程度具有統(tǒng)計學(xué)差異。5、TUNEL染色顯示,Nrf2~(-/-)小鼠的凋亡程度明顯多于Nrf2~(+/+)小鼠。6、葉酸組中Nrf2~(-/-)小鼠的GPX4的mRNA水平較Nrf2~(+/+)小鼠明顯下調(diào),ACSL4的mRNA水平較Nrf2~(+/+)小鼠有上調(diào)趨勢。7、葉酸組的Mthfd mRNA的表達水平明顯升高,但Nrf2~(+/+)與Nrf2~(-/-)組無差異。結(jié)論:1、Nrf2對葉酸誘導(dǎo)的急性腎損傷具有保護作用。2、Nrf2在葉酸誘導(dǎo)的急性腎損傷中的作用機制可能是:Nrf2抑制炎性因子,Nrf2抑制氧化應(yīng)激,Nrf2抑制凋亡,Nrf2抑制鐵死亡。
【學(xué)位單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R692
【部分圖文】：

中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文2-/-小鼠對 100mg/kg 的葉酸誘導(dǎo)的急性腎損傷更敏感酐和尿素氮是診斷急性腎損傷的關(guān)鍵指標，將葉酸粉末溶解為均勻的溶液，靜脈注射于Nrf2+/+小鼠和Nrf2-/-小鼠。48小時和尿素氮，主要比較Nrf2+/+小鼠實驗組與對照組及兩個實驗果可以看出在注射葉酸48小時后，Nrf2+/+小鼠和Nrf2-/-小鼠中合急性腎損傷的腎臟的大體表現(xiàn)（圖1A）。注射葉酸2天后不還是血清肌酐水平都較未注射葉酸組明顯升高，并且Nrf2-/-小血清肌酐水平更高，且具有統(tǒng)計學(xué)差異（圖1 B和圖1 C）。

中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文3.3 病理染色結(jié)果顯示 Nrf2-/-小鼠急性腎損傷時病理損傷更重石蠟切片 HE 和 PAS 染色顯示，注射葉酸 2 天后，Nrf2+/+小鼠和 Nrf2-/-小鼠腎臟病理出現(xiàn)急性腎損傷，具體表現(xiàn)為上皮細胞扁平化或空泡樣變性，腎小管刷狀緣消失，腎小管管腔擴張，腎間質(zhì)炎性細胞浸潤等，且 Nrf2-/-小鼠的病理損傷更重（圖2A）。為進一步確定各組急性腎損傷的程度，我們在 PAS 染色片中進行損傷定量分析，方法為在 200X 鏡下，取 20 個視野。一個視野中未出現(xiàn)損傷評分為 0,0-25%的損傷程度評分為 1，25%-50%的損傷程度評分為 2，50%-75%的損傷程度評分為3,>75%的損傷程度評分為 4，得出 Nrf2-/-小鼠的病理損傷更重，且具有統(tǒng)計學(xué)差異。

中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文3.4 注射葉酸后，Nrf2+/+小鼠和 Nrf2-/-小鼠氧化應(yīng)激相關(guān)指氧化應(yīng)激參與了急性腎損傷的發(fā)生發(fā)展，Nrf2 作為核轉(zhuǎn)錄因子氧化應(yīng)激基因的表達，我們檢測了抗氧化應(yīng)激的基因 Nqo1,Gclc,Gclm平發(fā)現(xiàn)，葉酸注射后，不管是 Nrf2+/+組還是 Nrf2-/-組，抗氧化應(yīng)激基因且 Nrf2-/-組基因下調(diào)水平更顯著，具有統(tǒng)計學(xué)意義（圖 3）。提示注射的缺失抑制抗氧化應(yīng)激反應(yīng)。
【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 Martin L Pall;Stephen Levine;;Nrf2是調(diào)控解毒、抗氧化、抗炎等細胞保護機制的重要轉(zhuǎn)錄因子——它的活性可被保健食物及其他因素增強(英文)[J];生理學(xué)報;2015年01期

本文編號：2874476