發(fā)布時間：2020-11-01 05:13

　　 苯(Benzene)是一種常見環(huán)境污染物和人類致癌物,尤以引發(fā)再生障礙性貧血和白血病令人關注。既往研究表明苯的慢性(包括致癌)毒效應是通過其活性代謝物來起作用的,即CYP2E1酶催化的反應產(chǎn)物。然而,迄今尚無報道苯在人CYP2E1酶活化條件下誘發(fā)基因突變作用;此外,本課題組近年報道苯及其代謝產(chǎn)物對重組表達人CYP2E1和人磺基轉(zhuǎn)移酶(sulfotransferase,SULT)1A1的V79細胞誘發(fā)微核形成,并且證明CYP2E1對苯、苯酚、氫醌、兒茶酚及三羥基苯均具有活化作用,而人SULT1A1則具有代謝減毒作用。本研究進一步探討苯、上述羥化物及其終毒物1,4-苯醌誘發(fā)V79-hCYP2E1-hSULT1A1細胞Hprt基因突變的作用,并對活性氧(ROS)作為其一種影響基因致突變效應作用機制的可能性進行了研究。目的1.以誘發(fā)基因突變作為觀察終點,觀察細胞內(nèi)人CYP2E1酶對苯及其羥化代謝物苯酚、氫醌、兒茶酚、三羥基苯代謝活化作用。2.對苯、其一系列羥化代謝物或1,4-苯醌作用于細胞產(chǎn)生的ROS進行檢測,以探討氧化應激與代謝活化的關系及是否參與受試物的毒性作用。方法細胞毒性采用CCK-8試驗來觀察,暴露/恢復時程為72 h/0 h或24 h/48 h;Hprt致突變試驗采用上述處理方案,按標準實驗程序進行;以DCFH-DA為熒光染料用流式細胞術檢測細胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量。細胞毒性和ROS數(shù)據(jù)(均數(shù)±標準差,分別含6與4個重復樣)用方差分析進行統(tǒng)計學推斷;基因突變數(shù)據(jù)按計數(shù)資料(合并2個重復數(shù)據(jù))采用確切概率法處理。結果1.CCK-8試驗結果提示6種受試物對V79-hCYP2E1-hSULT1A1和V79-Mz細胞均呈現(xiàn)一定的細胞毒性,同一化合物不同細胞之間無明顯差異,細胞毒性強度呈現(xiàn)苯三羥基苯苯酚兒茶酚苯醌氫醌的次序;除苯以外其它化合物都表現(xiàn)出濃度依賴性細胞毒作用。2.苯在72 h/0 h試驗條件下對兩個細胞系均不呈現(xiàn)致突變作用;但在24 h/48 h實驗條件下,苯誘發(fā)V79-hCYP2E1-hSULT1A1細胞基因突變,而對V79-Mz細胞結果陰性。其它5種受試物對V79-hCYP2E1-hSULT1A1細胞均可在72h暴露條件下誘發(fā)基因突變,并呈濃度相關性;致突變作用強度為苯苯酚三羥基苯兒茶酚氫醌苯醌。對于V79-Mz細胞,苯、苯酚、三羥基苯和兒茶酚均無致突變作用,而苯醌的作用比氫醌強。3.經(jīng)過ROS活性氧檢測后發(fā)現(xiàn),在實驗濃度范圍內(nèi)三羥基苯誘導細胞內(nèi)ROS水平增高,且對V79-hCYP2E1-hSULT1A1細胞的作用微強于V79-Mz細胞。其它化合物對兩種受試細胞都未明顯改變ROS水平。結論本研究首次觀察到苯對哺乳動物細胞誘發(fā)基因突變作用,而人CYP2E1酶是其必需的代謝活化酶;同時,實驗結果支持人CYP2E1對各個羥化代謝物的進一步活化作用,也印證了 1,4-苯醌是苯的終致突變物。ROS并非上述化合物致突變作用的主要介導者。
【學位單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R114
【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 前言
第二章 材料與方法
    2.1 實驗材料
    2.2 主要試劑配制
    2.3 試驗儀器設備
    2.4 實驗方法
    2.5 統(tǒng)計學分析
第三章 結果
    3.1 苯及其羥化代謝物對V79-Mz和V79-hCYP2E1-hSULT1A1的細胞毒性和致突變作用
    3.2 苯及其羥化代謝物對V79-Mz和V79-hCYP2E1-hSULT1A1細胞內(nèi)ROS水平的影響
第四章 討論
全文小結
參考文獻
中英文縮略詞對照表
攻讀學位期間發(fā)表的論文
致謝

【參考文獻】

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本文編號：2865067