發(fā)布時間：2020-11-14 18:31

　　 【目的】通過氯化鋁誘導人神經母細胞瘤細胞（SH-SY5Y）死亡，加入凋亡和程序性壞死的特異性抑制劑及MAPK信號通路的抑制劑，初步探討鋁致神經細胞死亡與MAPK信號通路的關系。 【方法】1.4mmol/L的AlCl36H2O染毒SH-SY5Y細胞模擬鋁致神經細胞死亡模型,用凋亡的特異性抑制劑zVAD-fmk（濃度為20μmol/L）抑制凋亡發(fā)生，用程序性壞死的特異性抑制劑necrostatin-1（Nec-1，濃度為60μmol/L）抑制程序性壞死發(fā)生，檢測不同組間細胞活力的變化，用流式細胞術檢測凋亡率壞死率的差異，用蛋白印跡法檢測MAPK信號通路蛋白及其磷酸化水平的改變。2.4mmol/L的AlCl36H2O染毒SH-SY5Y細胞模擬鋁致神經細胞死亡模型，用MAPK信號通路的特異性抑制劑（SB203580、SP600125、U0126濃度分別為10μmol/L，15μmol/L，10μmol/L）抑制相關分子的磷酸化，CCK8法檢測細胞活力的變化，流式細胞術檢測凋亡率和壞死率的差異，蛋白印跡法檢測MAPK信號通路蛋白及其磷酸化水平的改變。 【結果】1. CCK-8法檢測細胞活力結果顯示與空白對照組、溶劑對照組、zVAD-fmk對照組和Nec-1對照組相比較，染鋁組、凋亡抑制組和程序性壞死抑制組的細胞活力下降（P0.01），與染鋁組相比較，程序性壞死抑制組和凋亡抑制組的細胞活力上升（P0.05）。流式細胞術檢測細胞凋亡率與壞死率結果顯示，與空白對照組、溶劑對照組、zVAD-fmk對照組和Nec-1對照組相比較，染鋁組、凋亡抑制組和程序性壞死抑制組的凋亡率和壞死率上升（P0.01）；與染鋁組相比較，凋亡抑制組和程序性壞死抑制組的凋亡率和壞死率下降（P0.01）。蛋白免疫印跡結果顯示，與空白對照組、溶劑對照組、zVAD-fmk對照組和Nec-1對照組相比較，染鋁組、凋亡抑制組和程序性壞死抑制組p38磷酸化水平升高，ERK1/2磷酸化水平下降（P0.05）；與染鋁組相比較，程序性壞死抑制組的p38磷酸化水平下降（P0.01），ERK1/2磷酸化水平上升（P0.05），凋亡抑制組的ERK1/2磷酸化水平上升（P0.05）。 2.（1）細胞活力結果顯示：1）與空白對照組，溶劑對照組，SB203580對照組相比較，染鋁組和SB203580組的細胞活力下降（P0.01），與染鋁組相比較，SB203580組的細胞活力上升（P0.01）。2）與空白對照組，溶劑對照組和SP600125對照組相比較，染鋁組，SP600125組的細胞活力下降（P0.01）。3）與空白對照組，溶劑對照組和U0126對照組相比較，染鋁組和U0126組差異有統(tǒng)計學意義（P0.01）；與染鋁組相比較，U0126組的細胞活力明顯下降（P0.01）。 （2）流式細胞術檢測細胞凋亡率與壞死率結果顯示：1）與空白對照組，溶劑對照組和SB203580對照組相比較，染鋁組和SB203580組凋亡率和壞死率上升，差別有統(tǒng)計學意義（P0.01）；與染鋁組相比較，SB203580組的凋亡和壞死率明顯下降（P0.01）。2）與對照組相比較，染鋁組和SP600125組凋亡和壞死率上升（P0.01）；與染鋁組相比較，SP600125組的凋亡和壞死率下降（P0.05）。3）與空白對照組和溶劑對照組相比較，U0126對照組，染鋁組和U0126組凋亡和壞死率上升（P0.05）；與染鋁組相比較， U0126組凋亡率和壞死率差別有統(tǒng)計學意義（P0.01），凋亡率和壞死率分別上升了1.91倍和0.9倍，凋亡率上升更明顯。 （3）1)各組的p38蛋白印跡結果顯示，與空白對照組，溶劑對照組相比較，SB203580對照組的磷酸化水平明顯下降（P0.01），染鋁組和SB203580組的p38磷酸化水平升高（P0.01）；與染鋁組相比較，SB203580組的p38信號通路磷酸化水平下降（P0.05）。2)各組的JNK蛋白印跡結果顯示在空白對照組和溶劑對照組可見磷酸化的JNK，SP600125對照組、染鋁組、SP600125組均未見有磷酸化,差別無統(tǒng)計學意義（P0.05）。3)各組的ERK蛋白印跡結果顯示與空白對照組、溶劑對照組相比較，U0126對照組、染鋁組、U0126組的ERK磷酸化水平下降（P0.01）；與染鋁組相比較，U0126組的ERK信號通路磷酸化水平差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）。 【結論】1.鋁誘導SH-SY5Y細胞發(fā)生凋亡和程序性壞死，以程序性壞死為主。2.在鋁誘導SH-SY5Y細胞死亡過程中，MAPK信號通路中p38信號通路激活促使細胞發(fā)生程序性壞死，p38信號通路是否參與凋亡還有待進一步研究；ERK信號通路失活參與了鋁致SH-SY5Y細胞凋亡和程序性壞死，但ERK信號通路在凋亡過程中的作用更明顯。本實驗中未觀察到JNK信號通路參與鋁致SH-SY5Y細胞死亡
【學位單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2014
【中圖分類】：R114
【文章目錄】：
英文縮略詞表
中文摘要
Abstract
前言
    參考文獻
第一節(jié) 鋁致 SH-SY5Y 細胞死亡過程中 MAPK 信號通路的作用
    1 材料與方法
    2 結果
    3 討論
    參考文獻
第二章 抑制 MAPK 信號通路后鋁致 SH-SY5Y 細胞死亡情況的變化
    1 材料與方法
    2 結果
    3 討論
    參考文獻
總結
綜述：程序性壞死及其機制研究進展
    參考文獻
致謝
個人簡歷

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 許蓬娟;;鈣信號和阿爾茨海默病的關系[J];天津醫(yī)藥;2011年10期

2 黃仲曦,姚開泰;用文獻輪廓挖掘鼻咽癌微陣列表達數據[J];第一軍醫(yī)大學學報;2004年07期

3 張滌華,李幼姬,王儉勤,梁柳琴,黃凌虹,周道遠,葉任高,余學清;MAPK~(ERK1/2)信號通路在狼瘡腎炎外周血單個核細胞表達白細胞介素-6mRNA中的作用[J];中華風濕病學雜志;2005年06期

4 陳舞燕,賀林;精神分裂癥的分子遺傳學研究進展[J];中國醫(yī)學科學院學報;2005年03期

5 賀忠梅,劉慧榮;β腎上腺素能受體激動劑與心肌細胞凋亡[J];心血管病學進展;2005年S1期

6 蘇明;萬鈞;黃志強;周寧新;吳德斌;范上達;;肝星狀細胞的激活和Rho-ROCK信號通路在纖維化大鼠小肝移植中的作用[J];中華實驗外科雜志;2005年12期

7 潘智;張令強;蔣繼志;賀福初;;mTOR的研究進展[J];細胞生物學雜志;2006年03期

8 楊曉瑜;黃維義;魏宗德;;誘導HO-1基因表達的信號通路[J];國際病理科學與臨床雜志;2006年03期

9 潘勤;謝渭芬;張忠兵;張新;韓澤廣;;肝纖維化逆轉中MAPK/ERK信號轉導通路的活化及其特征[J];中國現代醫(yī)學雜志;2006年15期

10 董玲;孫劍勇;杜施霖;王吉耀;;基因芯片研究甘草酸對大鼠肝星狀細胞轉化生長因子-β信號通路的影響[J];中華消化雜志;2006年09期

相關博士學位論文 前10條

1 周遠飛;SIRT1調控Wnt信號通路影響間充質干細胞成脂定向的機制[D];華中農業(yè)大學;2014年

2 鄭曉文;肺癌干細胞的富集、鑒定及調節(jié)Hedgehog信號通路對肺癌干細胞功能的影響[D];廣西醫(yī)科大學;2014年

3 劉濤;靶向抑制NOTCH信號通路誘導胃癌細胞凋亡的網絡調控研究[D];蘭州大學;2014年

4 楊念恩;不同方式運動對生長期小鼠骨合成代謝和Wnt信號通路的影響[D];華東師范大學;2014年

5 李春艷;β-連環(huán)素/T細胞因子4信號通路在非小細胞肺癌的研究[D];中國醫(yī)科大學;2004年

6 陳明;0.5Gy X線通過多重信號通路促進成骨細胞增殖與分化[D];蘇州大學;2014年

7 黃淑紅;Sonic Hedgehog信號通路異常激活在肺癌、肝癌中作用的研究[D];山東大學;2007年

8 王立榮;信號通路相關文獻挖掘與分析方法研究[D];中國科學技術大學;2007年

9 袁媛;K562細胞中Wnt5a介導不同受體途徑激活經典或非經典Wnt信號通路及其機制的研究[D];第三軍醫(yī)大學;2011年

10 姚佳維;PMID激活Nrf2/ARE信號通路的機制及其抗氧化作用研究[D];天津大學;2012年

相關碩士學位論文 前10條

1 邢延奕;Wnt信號通路相關基因功能初步研究[D];山東大學;2014年

2 王文杰;Pygo2通過Wnt信號通路抑制脂肪分化的分子機制[D];廈門大學;2014年

3 李新鑫;KCTD1抑制經典Wnt信號通路的機制研究[D];湖南師范大學;2014年

4 高雅;磷脂酶D通過Wnt信號通路促進人結腸癌細胞增殖和侵襲[D];廈門大學;2014年

5 賈曉芳;MAPK信號通路在鋁致SH-SY5Y細胞死亡過程中的作用[D];山西醫(yī)科大學;2014年

6 徐靜;豬S100A12基因轉錄調控及信號通路研究[D];華中農業(yè)大學;2014年

7 劉佳賓;家蠶主要免疫信號通路對不同病原微生物的感染應答[D];蘇州大學;2014年

8 周華;IFN-DC分化相關信號通路初探[D];蘇州大學;2014年

9 張興;α腎上腺素能受體激動對TLR4信號通路影響的研究[D];大連醫(yī)科大學;2011年

10 陸海生;JNK信號通路介導HBx對RXRα的磷酸化并促進HCC進程的分子機制[D];廈門大學;2014年

本文編號：2883816