發(fā)布時(shí)間：2020-03-22 17:06

【摘要】：背景:短鏈脂肪酸(Short-chain fatty acids,SCFAs)是指碳鏈中碳原子數(shù)目小于6個(gè)的有機(jī)脂肪酸,由腸道菌群代謝產(chǎn)生,主要包含7種,分別是乙酸、丙酸、異丁酸、丁酸、異戊酸、戊酸、己酸。生物體內(nèi)的SCFAs主要為乙酸、丙酸和丁酸,約占SCFAs總量的90%～95%。研究表明,SCFAs具有調(diào)節(jié)腸道菌群平衡,改善腸道功能,以及抗腫瘤、抗炎和調(diào)控基因表達(dá)等作用。檢測(cè)體內(nèi)SCFAs變化可揭示藥物作用機(jī)制及輔助臨床疾病的診斷、治療。因SCFAs具有易揮發(fā)性,極性大且在生物樣本中含量低等特點(diǎn),當(dāng)前的SCFAs分析方法存在前處理復(fù)雜、檢測(cè)穩(wěn)定性差等缺點(diǎn)。因此,建立更準(zhǔn)確高效的SCFAs分析方法尤為重要。目的:為適用不同樣本中SCFAs含量趨勢(shì)分析,建立不同生物樣品中SCFAs的定性半定量分析方法,并應(yīng)用于探究滇黃精多糖與滇黃精水提物對(duì)脂代謝紊亂與非酒精性脂肪肝大鼠SCFAs的調(diào)節(jié)機(jī)制。方法:生物樣品中SCFAs定性分析:取SPF級(jí)雄性SD大鼠糞便、肝門靜脈血、組織(肝臟、胰腺、心臟、脾臟、腎臟、肺),用甲醇沉淀蛋白后調(diào)節(jié)p H提取糞便中SCFAs,用陰離子交換樹脂(PAX)為填料的固相萃取小柱富集肝門靜脈血和組織中SCFAs。樣品經(jīng)氣相色譜/質(zhì)譜(GC/MS)檢測(cè),利用計(jì)算機(jī)檢索標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜庫(kù)進(jìn)行識(shí)別得到化合物信息,再通過(guò)與混合對(duì)照品進(jìn)行比對(duì)指認(rèn)鑒定樣品中SCFAs的組成。生物樣品中SCFAs半定量分析方法建立:取SPF級(jí)雄性SD大鼠糞便、肝門靜脈血、肝臟,用甲醇沉淀蛋白后調(diào)節(jié)p H凈化糞便樣品,用PAX為填料的固相萃取小柱高通量?jī)艋�肝門靜脈血和組織樣品(1次可同時(shí)凈化96個(gè)樣品)后,采用GC/MS進(jìn)行分析。考察方法的線性與范圍、精密度、重復(fù)性及穩(wěn)定性。。生物樣品中SCFAs半定量分析及應(yīng)用:將所建半定量分析方法用于測(cè)定脂代謝紊亂大鼠與非酒精性脂肪肝大鼠樣本(糞便、肝門靜脈血、肝臟)中SCFAs。并用Pearson相關(guān)性分析分析SCFAs含量與腸道菌群、脂質(zhì)參數(shù)的關(guān)聯(lián)性,探究滇黃精多糖對(duì)脂代謝紊亂大鼠SCFAs的調(diào)節(jié)作用及滇黃精水提物對(duì)非酒精性脂肪肝大鼠SCFAs的調(diào)節(jié)作用。結(jié)果:從糞便及肝門靜脈血中鑒定出7種SCFAs,分別為乙酸、丙酸、異丁酸、丁酸、異戊酸、戊酸、己酸;從肝臟、脾臟、腎臟、肺中鑒定出5種SCFAs,分別為乙酸、丙酸、異丁酸、丁酸、戊酸;在部分胰腺樣本及心臟樣本中鑒定出6種SCFAs,分別為乙酸、丙酸、異丁酸、丁酸、戊酸、己酸。所建半定量分析方法經(jīng)方法學(xué)考察,不同生物樣品(糞便、肝門靜脈血、組織)中SCFAs在0.005～0.1 mol/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r0.999),儀器精密度RSD2.23%,樣品穩(wěn)定性RSD5.07%,方法重復(fù)性RSD3.05%,均符合生物樣品定量分析要求。給予滇黃精多糖,脂代謝紊亂大鼠糞便、肝門靜脈血、肝臟中丁酸含量增加;相關(guān)性分析表明,糞便Butyrivibrio的豐度變化與丙酸顯著負(fù)相關(guān)性,Peptococcus、Allobaculum、Blautia的豐度變化與乙酸呈顯著負(fù)相關(guān)性,其中Allobaculum、Blautia還與丙酸顯著負(fù)相關(guān)性。Clostridium的豐度變化與異丁酸、丁酸呈顯著正相關(guān)性。同時(shí),Roseburia的豐度變化與丁酸呈正相關(guān)性。Bacteroides的豐度變化與戊酸呈顯著正相關(guān)性。肝門靜脈血中LDL-C含量與乙酸、丙酸、異丁酸、丁酸、戊酸含量顯著正相關(guān)。肝臟中TG含量與丁酸含量顯著正相關(guān)。推測(cè)該途徑為滇黃精改善脂代謝紊亂的新通路。給予滇黃精水提物,非酒精性脂肪肝大鼠肝門靜脈血、肝臟中丁酸含量升高。相關(guān)性分析表明,TC及ALT與丁酸呈負(fù)相關(guān),丁酸可能通過(guò)AMPK乙酰Co A羧化酶途徑增加肝臟脂質(zhì)氧化,增加糖原儲(chǔ)存和降低肝臟脂肪酸合成酶活性干預(yù)非酒精性脂肪肝。結(jié)論:糞便、肝門靜脈血、組織(肝、心、脾、肺、腎)中均含有SCFAs,且不同樣本中SCFAs種類有差異;所建的基于高通量固相萃取-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用的半定量分析法可用于生物樣品(糞便、肝門靜脈血、肝臟、脾)中SCFAs快速、高效分析;分析結(jié)果表明,滇黃精多糖與滇黃精水提物可顯著調(diào)節(jié)脂代謝紊亂與非酒精性脂肪肝大鼠中的SCFAs,這些調(diào)節(jié)方式是藥物發(fā)揮藥效的重要機(jī)制。
【圖文】：

圖 1-1 糞便樣品總離子流圖1， 乙酸；2，丙酸；3，異丁酸；4，丁酸；5，，異戊酸；6，戊酸；7，己酸表 1-1 糞便樣品中 7 種 SCFAs 的 GC/MS 信息及結(jié)構(gòu)指認(rèn)序號(hào) 名稱 保留時(shí)間（min） 質(zhì)荷比（m/z） 定性離子1 乙酸 3.15 60.05 43,45,602 丙酸 3.80 74.08 29,45,57,743 異丁酸 4.05 88.11 41,43,73,884 丁酸 4.60 88.11 41,55,60,735 異戊酸 5.02 102.12 41,43,60,876 戊酸 5.73 102.13 41,55,60,737 己酸 6.92 116.16 41,60,73,87

圖 1-2 肝門靜脈血樣品總離子流圖1， 乙酸；2，丙酸；3，異丁酸；4，丁酸；5，異戊酸；6，戊酸；7，己酸表 1-2 肝門靜脈血樣品 7 種 SCFAs 的 GC/MS 信息及結(jié)構(gòu)指認(rèn)序號(hào) 名稱 保留時(shí)間（min） 質(zhì)荷比（m/z） 定性離子1 乙酸 3.11 60.05 43,45,602 丙酸 3.75 74.08 29,45,57,743 異丁酸 3.99 88.11 41,43,73,884 丁酸 4.55 88.11 41,55,60,735 異戊酸 4.96 102.12 41,43,60,876 戊酸 5.68 102.13 41,55,60,737 己酸 6.87 116.16 41,60,73,87
【學(xué)位授予單位】：云南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R285.5

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 董玉京;В.И.СКОРОХИД;;短鏈脂肪酸的代謝及其應(yīng)用前景[J];國(guó)外畜牧學(xué)(飼料);1991年04期

2 王洪存;孫樹英;王秀玉;李啟清;;氣相色譜法測(cè)定人尿短鏈脂肪酸[J];泰山醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1987年03期

3 林政榕;吳展頻;牟峻;李金炎;陳國(guó)(?);;厭氧菌代謝產(chǎn)物中短鏈脂肪酸的氣相色譜測(cè)定[J];福建醫(yī)藥雜志;1988年01期

4 王洪存;孫樹英;王秀玉;;短鏈脂肪酸(SCFA)與代謝異常的關(guān)系[J];泰山醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1988年04期

5 孫樹英,王洪存,王秀玉,李啟清;尿短鏈脂肪酸的氣相色譜測(cè)定法[J];中國(guó)病理生理雜志;1989年04期

6 陳孝煥;短鏈脂肪酸刺激人回腸運(yùn)動(dòng)[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(消化系疾病分冊(cè));1989年04期

7 邵玉健;沈紅;徐金娣;康東周;李松林;;糞便中短鏈脂肪酸測(cè)定方法研究進(jìn)展[J];藥物分析雜志;2019年06期

8 陳和地;任怡琳;耿燕;許正宏;;基于超高效液相色譜法快速測(cè)定短鏈脂肪酸方法的建立[J];生物加工過(guò)程;2019年04期

9 王子花;申瑞玲;李文全;;短鏈脂肪酸的產(chǎn)生及作用[J];畜牧獸醫(yī)科技信息;2007年02期

10 孫曉紅,Heiner AM,Elzinga H,Vonk RJ;用氣相色譜-同位素比值質(zhì)譜法測(cè)定體外腸道細(xì)菌發(fā)酵產(chǎn)生的短鏈脂肪酸[J];貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2002年02期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 徐丹鳳;孫建琴;;短鏈脂肪酸對(duì)結(jié)腸功能的影響[A];營(yíng)養(yǎng)健康新觀察（第三十九期）：腸道微生態(tài)與健康[C];2007年

2 劉露;張雁;鄧媛元;唐小俊;魏振承;;腸道益生菌利用山藥低聚糖體外發(fā)酵產(chǎn)短鏈脂肪酸的研究[A];中國(guó)食品科學(xué)技術(shù)學(xué)會(huì)第十五屆年會(huì)論文摘要集[C];2018年

3 ;短鏈脂肪酸(酪酸)與腸道健康[A];河南省預(yù)防醫(yī)學(xué)會(huì)微生態(tài)學(xué)專業(yè)委員會(huì)學(xué)術(shù)會(huì)議、河南省微生物學(xué)會(huì)微生態(tài)學(xué)專業(yè)委員會(huì)成立大會(huì)論文匯編[C];2011年

4 齊蘭;楊星;孟幽蘭;徐生瑞;陳長(zhǎng)坡;樊靜;;Au/ZnO三維多孔微球固相微萃取涂層頂空分析人體足部氣味中的短鏈脂肪酸[A];河南省化學(xué)會(huì)2018年學(xué)術(shù)年會(huì)摘要集[C];2018年

5 閆晨;劉天宇;王斯南;盧習(xí)角;金多晨;王邦茂;李正翔;曹海龍;;HPLC法測(cè)定小鼠糞便中短鏈脂肪酸的含量[A];2016年中國(guó)藥學(xué)大會(huì)暨第十六屆中國(guó)藥師周論文集[C];2016年

6 任燕;;短鏈脂肪酸在SD大鼠肥胖模型中作用探討[A];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)腎臟疾病專業(yè)委員會(huì)2018年學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要匯編[C];2018年

7 李凌之;馬良;付平;;腸道菌群來(lái)源的短鏈脂肪酸與腎臟關(guān)系的系統(tǒng)綜述[A];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)腎臟疾病專業(yè)委員會(huì)2018年學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要匯編[C];2018年

8 劉小華;李舒梅;;短鏈脂肪酸功效及其機(jī)制的研究進(jìn)展[A];達(dá)能營(yíng)養(yǎng)中心第十三屆學(xué)術(shù)研討會(huì)“膳食脂肪與健康”論文集[C];2010年

9 范秋麗;馬現(xiàn)永;;短鏈脂肪酸對(duì)畜禽生理功能和生長(zhǎng)性能影響研究進(jìn)展[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)分會(huì)第十屆全國(guó)代表大會(huì)暨十二屆學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2016年

10 范秋麗;馬現(xiàn)永;;短鏈脂肪酸對(duì)畜禽腸道生理功能及生長(zhǎng)性能的影響[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)分會(huì)第十二次動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2016年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前5條

1 張沖;捍衛(wèi)生物安全[N];科技日?qǐng)?bào);2005年

2 復(fù)旦大學(xué)附屬華東醫(yī)院營(yíng)養(yǎng)科 徐丹鳳 孫建琴;短鏈脂肪酸對(duì)結(jié)腸功能有重要影響[N];中國(guó)食品報(bào);2009年

3 記者 高泓娟;科學(xué)家發(fā)現(xiàn)國(guó)人腸道9個(gè)屬的細(xì)菌可生成短鏈脂肪酸有益健康[N];中國(guó)食品報(bào);2015年

4 ;短鏈脂肪酸對(duì)人結(jié)腸癌Caco－2細(xì)胞增殖分化的影響與臨床意義[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2003年

5 陳曉強(qiáng);菊粉的生理功能及安全性[N];中國(guó)食品報(bào);2009年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 鄧邦利;鈣信號(hào)和短鏈脂肪酸調(diào)節(jié)糖代謝機(jī)制研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2018年

2 葉博;短鏈脂肪酸促進(jìn)人和小鼠gastroids中產(chǎn)ghrelin細(xì)胞分化和小鼠胃排空的生理機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

3 楊春雪;嗜熱菌強(qiáng)化剩余污泥水解及短鏈脂肪酸積累規(guī)律研究[D];哈爾濱工業(yè)大學(xué);2015年

4 Umar Farooq;小米膳食纖維作為主要碳源對(duì)益生菌生長(zhǎng)和發(fā)酵過(guò)程中短鏈脂肪酸產(chǎn)量的影響研究[D];江南大學(xué);2013年

5 韋瑤;可溶性膳食纖維聯(lián)合糞菌移植對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎的治療作用及其機(jī)制研究[D];南京大學(xué);2016年

6 陶金華;菊非藥用部位多糖類物質(zhì)干預(yù)炎癥性腸病的效應(yīng)機(jī)制研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2017年

7 薛正晟;以健康人和大熊貓為模型的哺乳動(dòng)物腸道菌群多樣性分布與核心功能種屬的研究[D];上海交通大學(xué);2015年

8 張煥新;抗性淀粉酶法制備及其特性與應(yīng)用的研究[D];江南大學(xué);2012年

9 鄭曉皎;腸道菌—宿主代謝物組的分析平臺(tái)的建立及應(yīng)用[D];上海交通大學(xué);2013年

10 張浩;腸易激綜合征和炎癥性腸病患者腸道優(yōu)勢(shì)菌群特征及其與疾病發(fā)生相關(guān)性研究[D];南京大學(xué);2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 蒙丹麗;慢性重型乙型病毒性肝炎患者腸道短鏈脂肪酸的變化研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2018年

2 羅鳴;大鼠急性胰腺炎外周血短鏈脂肪酸含量、Th17/Treg比例變化趨勢(shì)及意義的實(shí)驗(yàn)研究[D];西南醫(yī)科大學(xué);2019年

3 曾鱗粞;基于固相萃取-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用的生物樣品中短鏈脂肪酸分析方法建立及應(yīng)用[D];云南中醫(yī)藥大學(xué);2019年

4 丁瑩;飼糧和飲水添加中短鏈脂肪酸對(duì)肉雞的生產(chǎn)性能和腸道健康的影響[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

5 寧辛;乳桿菌T3L改善肥胖小鼠骨量流失作用及腸道免疫機(jī)制研究[D];哈爾濱工業(yè)大學(xué);2018年

6 繆潔;化療對(duì)急性淋巴細(xì)胞白血病患兒腸道菌群代謝物影響的初步研究[D];蘇州大學(xué);2018年

7 趙夢(mèng);Cu_2O/Bi_2WO_6催化劑制備及其光催化降解短鏈脂肪酸制取氫氣和烷烴的機(jī)理研究[D];鄭州輕工業(yè)學(xué)院;2018年

8 謝杭諭;腸道菌群及其代謝產(chǎn)物短鏈脂肪酸和腸黏膜損傷標(biāo)記物在HIV感染組和健康組的對(duì)比研究[D];西南醫(yī)科大學(xué);2017年

9 吳水蕓;高脂肥胖對(duì)腸道微生態(tài)、短鏈脂肪酸的影響[D];江蘇大學(xué);2016年

10 趙仁山;兒童生物樣本中揮發(fā)性生化物質(zhì)的檢測(cè)及其應(yīng)用[D];東南大學(xué);2017年

本文編號(hào)：2595353