發(fā)布時間：2020-12-02 10:52

　　目的:外泌體是細胞分泌的納米級細胞外囊泡,是細胞間遺傳物質傳遞的新載體,其在腫瘤標志物、癌癥治療、以及組織再生等多種病理和生理過程中起到了關鍵作用。脫落乳牙牙髓干細胞（Stem cells from human exfoliated deciduous teeth,SHED）是一種具有高增殖、多潛能分化能力且容易獲得的干細胞,其來源的細胞外囊泡如外泌體研究較少。因此,本研究利用人脫落乳牙牙髓干細胞來源的外泌體（SHED-Exos）探究其在牙周炎小鼠體內的成骨效果和調節(jié)骨髓間充質干細胞（Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）的體外成骨分化能力,為脫落乳牙牙髓干細胞來源的外泌體促進骨再生提供研究參考。方法:1.外泌體收集:SHED培養(yǎng)至第4-7代,收集細胞培養(yǎng)液,采用30%蔗糖墊超速離心法提取SHED-Exos,使用透射電子顯微鏡（Transmission electron microscope,TEM）觀察SHED-Exos的形態(tài)特征,利用蛋白質印跡法（Western blot）對表面標記物CD63進行鑒定;2.BMSCs培養(yǎng)及生物學特性檢測（... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學山西省

【文章頁數】：79 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

顯微鏡觀察SHED形態(tài)特征（物鏡20×，標尺：50μm）

山西醫(yī)科大學碩士學位論文72結果2.1SHED形態(tài)學特征培養(yǎng)SHEDP4-P7，發(fā)現細胞在培養(yǎng)皿底部貼壁生長，增長速度穩(wěn)定，并保持大小均勻的梭形或紡錘狀形態(tài)（圖1）。圖1顯微鏡觀察SHED形態(tài)特征（物鏡20×，標尺：50μm）2.2SHED-ExosTEM結果TEM檢測顯示提取的SHED-Exos是直徑范圍小于100nm的球性膜包裹結構（圖2），符合外泌體直徑范圍為30-150nm囊泡的形態(tài)特征[8]。圖2透射電子顯微鏡觀察SHED-Exos形態(tài)（標尺：100nm）

山西醫(yī)科大學碩士學位論文82.3SHED-ExosWesternblot結果CD63屬于四次跨膜蛋白成員，產生于細胞中，定位于膜結構附近，參與外泌體囊泡的形成和分泌過程[9]。GM130是高爾基體基質蛋白，參與細胞周期、細胞極化和細胞定向遷移等過程[10]。Westernblot結果顯示SHED-ExosCD63表達呈陽性，而GM130和Gapdh表達均呈陰性（圖3）。圖3Westernblot檢測SHED、SHED-Exos和SHED-CM中GM130、CD63蛋白表達水平

【參考文獻】：
期刊論文
[1]樹突狀細胞外泌體誘導間充質干細胞向成骨細胞分化[J]. 王姿,丁麗,鄭曉麗,王恒湘,閆洪敏.  中國實驗血液學雜志. 2014(03)



本文編號：2895191