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人脫落乳牙牙髓干細(xì)胞來源外泌體調(diào)節(jié)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性及其在骨缺損修復(fù)中的研究

發(fā)布時間:2020-12-02 10:52
  目的:外泌體是細(xì)胞分泌的納米級細(xì)胞外囊泡,是細(xì)胞間遺傳物質(zhì)傳遞的新載體,其在腫瘤標(biāo)志物、癌癥治療、以及組織再生等多種病理和生理過程中起到了關(guān)鍵作用。脫落乳牙牙髓干細(xì)胞(Stem cells from human exfoliated deciduous teeth,SHED)是一種具有高增殖、多潛能分化能力且容易獲得的干細(xì)胞,其來源的細(xì)胞外囊泡如外泌體研究較少。因此,本研究利用人脫落乳牙牙髓干細(xì)胞來源的外泌體(SHED-Exos)探究其在牙周炎小鼠體內(nèi)的成骨效果和調(diào)節(jié)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)的體外成骨分化能力,為脫落乳牙牙髓干細(xì)胞來源的外泌體促進(jìn)骨再生提供研究參考。方法:1.外泌體收集:SHED培養(yǎng)至第4-7代,收集細(xì)胞培養(yǎng)液,采用30%蔗糖墊超速離心法提取SHED-Exos,使用透射電子顯微鏡(Transmission electron microscope,TEM)觀察SHED-Exos的形態(tài)特征,利用蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)對表面標(biāo)記物CD63進(jìn)行鑒定;2.BMSCs培養(yǎng)及生物學(xué)特性檢測(... 

【文章來源】:山西醫(yī)科大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】:79 頁

【學(xué)位級別】:碩士

【部分圖文】:

人脫落乳牙牙髓干細(xì)胞來源外泌體調(diào)節(jié)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性及其在骨缺損修復(fù)中的研究


顯微鏡觀察SHED形態(tài)特征(物鏡20×,標(biāo)尺:50μm)

形態(tài)圖,電子顯微鏡,標(biāo)尺,形態(tài)


山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文72結(jié)果2.1SHED形態(tài)學(xué)特征培養(yǎng)SHEDP4-P7,發(fā)現(xiàn)細(xì)胞在培養(yǎng)皿底部貼壁生長,增長速度穩(wěn)定,并保持大小均勻的梭形或紡錘狀形態(tài)(圖1)。圖1顯微鏡觀察SHED形態(tài)特征(物鏡20×,標(biāo)尺:50μm)2.2SHED-ExosTEM結(jié)果TEM檢測顯示提取的SHED-Exos是直徑范圍小于100nm的球性膜包裹結(jié)構(gòu)(圖2),符合外泌體直徑范圍為30-150nm囊泡的形態(tài)特征[8]。圖2透射電子顯微鏡觀察SHED-Exos形態(tài)(標(biāo)尺:100nm)

蛋白,醫(yī)科大,高爾基,細(xì)胞


山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文82.3SHED-ExosWesternblot結(jié)果CD63屬于四次跨膜蛋白成員,產(chǎn)生于細(xì)胞中,定位于膜結(jié)構(gòu)附近,參與外泌體囊泡的形成和分泌過程[9]。GM130是高爾基體基質(zhì)蛋白,參與細(xì)胞周期、細(xì)胞極化和細(xì)胞定向遷移等過程[10]。Westernblot結(jié)果顯示SHED-ExosCD63表達(dá)呈陽性,而GM130和Gapdh表達(dá)均呈陰性(圖3)。圖3Westernblot檢測SHED、SHED-Exos和SHED-CM中GM130、CD63蛋白表達(dá)水平

【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]樹突狀細(xì)胞外泌體誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化[J]. 王姿,丁麗,鄭曉麗,王恒湘,閆洪敏.  中國實驗血液學(xué)雜志. 2014(03)



本文編號:2895191

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