發(fā)布時(shí)間：2018-01-06 04:43

  本文關(guān)鍵詞：番荔素納米靶向制劑及抗腫瘤增效研究　出處：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 番荔素 納米混懸劑 環(huán)糊精 自組裝穩(wěn)定劑 葉酸 腫瘤靶向

【摘要】：番荔素(ACGs,Annonaceous acetogenins)是從番荔枝種子中提取的一類長(zhǎng)鏈脂肪酸內(nèi)酯化合物。其強(qiáng)效的抗腫瘤活性、獨(dú)特的藥理學(xué)機(jī)理以及能逆轉(zhuǎn)多藥耐藥等特性使其一度成為研究熱點(diǎn)。然而其水中溶解度差、成分復(fù)雜、毒副作用大和治療窗口窄等問題限制了番荔素的進(jìn)一步應(yīng)用。納米混懸劑可有效解決藥物因不溶于水而難于給藥的問題,靜脈注射后還可因EPR效應(yīng)而具有對(duì)腫瘤的被動(dòng)靶向性,通過對(duì)其表面進(jìn)行配體修飾還能實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤的主動(dòng)靶向,因此有望突破番荔素抗腫瘤應(yīng)用的瓶頸。第一部分利用羥丙基-β-環(huán)糊精(HP-β-CD)以及大豆卵磷脂(SPC)作為超分子自組裝穩(wěn)定劑制備了番荔素納米混懸劑(ACGs-NSps)并對(duì)其進(jìn)行體內(nèi)外研究。采用攪拌-溶劑沉淀法成功制備了 ACGs-NSps,粒徑和PDI值分別為144.4 nm和0.08,Zeta電位為-22.9 mV。ACGs-NSps體外釋放符合一級(jí)釋放方程,在PBS中可緩釋72h(累積釋放率為86.38%)。并且在人工胃腸液和血漿中均穩(wěn)定,且在低于2mg/mL的濃度下幾乎不溶血,同時(shí)滿足了 口服和靜脈注射的給藥條件。篩選出最優(yōu)的凍干保護(hù)劑是0.5%(w/v)的乳糖。MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,ACGs-NSps對(duì)腫瘤細(xì)胞有選擇殺傷作用,且較溶液劑對(duì)HeLa和HepG2有更強(qiáng)的細(xì)胞毒作用,溶液劑的IC50分別為混懸劑的13.39和1.31倍。對(duì)H22荷瘤小鼠抗腫瘤藥效研究表明,灌胃給藥時(shí),十分之一給藥劑量下的ACGs-NSps與油溶液灌胃組的抑瘤率相似(P0.05);靜脈給藥時(shí),ACGs-NSps較油溶液組有更加明顯的抑瘤效果(70.31%vs 49.74%,P0.05)。第二部分將小分子葉酸結(jié)合在β-環(huán)糊精的表面,成功合成出了目標(biāo)產(chǎn)物葉酸-乙二胺-β-環(huán)糊精偶聯(lián)物(FA-β-CD),并與SPC聯(lián)合作為自組裝穩(wěn)定劑制備了葉酸修飾的主動(dòng)靶向番荔素納米混懸劑(FA-ACGs-NSps)。所制得的FA-ACGs-NSps的平均粒徑和PDI值分別為199.5 nm和0.07,外貌為光滑的球形。FA-ACGs-NSps在PBS(0.1mol/L,pH=7.4)中呈兩相釋放,146小時(shí)累積釋放93.05%。釋放行為符合Higuchi方程。細(xì)胞攝取結(jié)果顯示4T1細(xì)胞(葉酸受體陽性)對(duì)FA-ACGs/Cy5.5-NSps 的攝取效率顯著高于 ACGs/Cy5.5-NSps(P0.01)。MTT 的細(xì)胞毒結(jié)果顯示:FA-ACGs-NSps對(duì)4T1的細(xì)胞毒性顯著大于ACGs-NSps(P0.05),然而對(duì)A549細(xì)胞(葉酸受體表達(dá)陰性)二者之間卻沒有這種差異。小動(dòng)物活體成像組織分布結(jié)果顯示番荔素納米混懸劑表面偶聯(lián)葉酸后能夠顯著提高藥物在腫瘤組織中的分布(P0.05)和腫瘤的靶向效率(P0.001)。4T1荷瘤小鼠的藥效學(xué)以及毒性評(píng)價(jià)顯示:在同樣0.4mg/kg的劑量下FA-ACGs-NSps相比于ACGs-NSps顯著地增加了抗腫瘤療效(68.76%vs 41.82%,P0.05),且脾指數(shù)和血清生化指標(biāo)均無明顯異常。第三部分利用葉酸-聚乙二醇2000-磷脂(FA-PEG-DSPE)為穩(wěn)定劑制備了葉酸主動(dòng)靶向長(zhǎng)循環(huán)番荔素納米混懸劑(FA-PEG-ACGs)。最終確定的處方為ACGs/FA-PEG-DSPE/SPC 質(zhì)量比 2:1:1,制備成功的 FA-PEG-ACGs 粒徑為 119.7nm,PDI 值為 0.20,Zeta 電位值為-23.0 mV。并且在 0.9%NaCl、5%Glu、PBS 還有血漿中均比較穩(wěn)定。對(duì)HeLa荷瘤小鼠的藥效學(xué)結(jié)果表明FA-PEG-ACGs的抑瘤效果十分顯著,給藥七次后停藥12天內(nèi)的抑瘤率均保持在70%以上且實(shí)驗(yàn)全程無小鼠死亡。小鼠急性毒性試驗(yàn)表明FA-PEG-ACGs小鼠靜脈注射的LD50為1.742mg/kg,并且小鼠的中毒癥狀和死亡率與劑量成正相關(guān)。以上結(jié)果說明,基于環(huán)糊精和SPC為自組裝穩(wěn)定劑制備的納米混懸劑可以解決番荔素難溶于水、難于給藥的問題。且通過葉酸和PEG的修飾能進(jìn)一步提高番荔素納米混懸劑的腫瘤靶向性,減少肝、脾等非靶器官對(duì)納米粒的攝取,最終達(dá)到增效減毒的目的,為番荔素的進(jìn)一步研究和未來的臨床應(yīng)用奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。
[Abstract]:The results showed that ACGs - NSps can effectively solve the problem of anti - tumor activity by using hydroxypropyl - 尾 - cyclodextrin ( HP - 尾 - CD ) and soybean lecithin ( SPC ) as supermolecular self - assembly stabilizer . The results showed that FA - ACGs - NSps significantly increased the cytotoxicity of FA - ACGs / Cy5.5 - NSps compared with ACGs / Cy5.5 - NSps ( P0.05 ) .

【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R283.6;R285

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