發(fā)布時(shí)間：2018-01-09 08:00

  本文關(guān)鍵詞：針刺調(diào)節(jié)抑郁大鼠海馬AMPA受體及突觸相關(guān)蛋白表達(dá)的研究　出處：《廣州中醫(yī)藥大學(xué)》2017年博士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的:突觸后神經(jīng)元的興奮性神經(jīng)遞質(zhì)受體AMPA受體是抑郁障礙病理生理的重要結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)和抑郁治療的重要靶點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)針刺改善慢性不可預(yù)見(jiàn)性溫和刺激(Chronic unpredictable mild stress,CUMS)聯(lián)合孤養(yǎng)致抑郁模型大鼠行為學(xué)和針刺調(diào)節(jié)抑郁大鼠海馬突觸相關(guān)蛋白及AMPA受體亞基表達(dá),來(lái)探討針刺在"谷氨酸-AMPA受體"突觸傳遞及相關(guān)突觸蛋白表達(dá)中的抗抑郁機(jī)制。實(shí)驗(yàn)一針刺對(duì)CUMS聯(lián)合孤養(yǎng)抑郁模型大鼠行為學(xué)的影響方法:選用體重180-220g的成年雄牲SD大鼠30只,隨機(jī)的分為5組:空白組(n=6),42天造模組,21天造模組,21天造模+針刺組,42天造模+針刺組。其中空白組6只大鼠一起飼養(yǎng)在同一籠子中,其余各組大鼠均采用孤養(yǎng)模型,即單籠飼養(yǎng)。空白組大鼠接受42天普通飼料喂養(yǎng);21天造模組大鼠,接受42天普通飼料喂養(yǎng)的同時(shí)在第1天到第21天連續(xù)21天進(jìn)行慢性不可預(yù)見(jiàn)性溫和刺激(CUMS)造模;42天造模組大鼠,在接受42天普通飼料喂養(yǎng)的同時(shí)進(jìn)行連續(xù)42天慢性不可預(yù)見(jiàn)性溫和刺激(CUMS)造模;21天造模+針刺組大鼠,接受42天普通飼料喂養(yǎng)的同時(shí)在第1天到第21天連續(xù)21天進(jìn)行慢性不可預(yù)見(jiàn)性溫和刺激(CUMS)造模,在第22天接受四關(guān)穴針刺治療,隔日一次,連續(xù)治療21天;42天造模+針刺組大鼠,在接受42天普通飼料喂養(yǎng)的同時(shí)進(jìn)行連續(xù)42天慢性不可預(yù)見(jiàn)性溫和刺激(CUMS)造模,在第22天接受四關(guān)穴針刺治療,隔日一次,連續(xù)治療21天。在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前(Day0),第21天(Day21),第42天(Day42)對(duì)各組大鼠進(jìn)行糖水偏好實(shí)驗(yàn)(Sucrose Preference Test,SPT)測(cè)量。在實(shí)驗(yàn)第一天(Day1),第22天(Day22)和第42天(Day42)對(duì)各組大鼠進(jìn)行曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)(Open Filed Test,OFT)測(cè)量。在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前(Day0),實(shí)驗(yàn)第20天(Day20)和實(shí)驗(yàn)第40天(Day40)對(duì)各組大鼠進(jìn)行高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)(The Elevated Plus Maze Test,EMT)測(cè)量。即實(shí)驗(yàn)第二天(Day2),實(shí)驗(yàn)第21天(Day21)和實(shí)驗(yàn)第42天(Day42)對(duì)各組大鼠進(jìn)行避暗實(shí)驗(yàn)(Passive Avoidance Test,PAT)測(cè)量。統(tǒng)計(jì)方法:采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,實(shí)驗(yàn)計(jì)量資料若服從正太分布,結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s),各組間差異及比較采用單因素方差分析(One-ANOVA)最小顯著差法(LSD),以p0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。組間比較采用方差分析,不服從正態(tài)分布或方差不齊,采用非參數(shù)秩和檢驗(yàn);多個(gè)不同時(shí)間比較采用重復(fù)測(cè)量方差分析,不滿足協(xié)方差矩陣或球形檢驗(yàn)采用矯正檢驗(yàn)方法及兩兩比較,或者采用多遠(yuǎn)方差分析,檢驗(yàn)水平α =0.05。結(jié)果:1.糖水偏好實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前(Day0),各組大鼠糖水偏好值并沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,F_(4,25)= 0.089,p ＞ 0.05。在第 21 天(Day21),4 組 CUMS 造模組大鼠,即42天造模組、21天造模組、21天造模+針刺組、42天造模+針刺組,均與空白組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,F(425)= 10.246,p0.01。在第42天,各組間的糖水偏好值均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,F_(4,25)= 24.578,p0.01。經(jīng)過(guò)42天CUMS造模后,42天造模組的糖水好值均明顯低于空白組(P0.01),21天造模組(P0.01)和42天造模加針刺組(P0.01)。從實(shí)驗(yàn)第22天開(kāi)始,盡管21天造模組的糖水偏好值在第42天(Day42)較第21天(Day21)有所升高,其偏好值仍然低于空白組(P0.01)。Group D在接受21天針刺治療后,偏好值明顯有所升高,且與空白組(P0.01)沒(méi)有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,并且21天造模+針刺組的值高于42天造模組(P0.01),21天造模組(P0.01)和42天造模+針刺組(P0.01)。2.曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)主要觀察大鼠在場(chǎng)箱里的水平運(yùn)動(dòng)總路程(Crossings)和爬壁站立次數(shù)(Rearings),結(jié)果顯示:在第一次實(shí)驗(yàn)中(Day1),5組大鼠場(chǎng)箱內(nèi)水平運(yùn)動(dòng)總路程和爬壁站立次數(shù)沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,F_(4,25)= 0.025,p0.05;F_(4,25)= 0.026,p0.05。實(shí)驗(yàn)第22天(Day22),4組CUMS造模組大鼠,即42天造模組、21天造模組、21天造模+針刺組、42天造模+針刺組均與空白組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,p0.01。在試驗(yàn)第42天(Day42),5組大鼠場(chǎng)箱內(nèi)水平運(yùn)動(dòng)總路程和爬壁站立次數(shù)有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,P(4,25)= 5.35,p0.01;P(4,25)= 5.34,p0.01。21 天造模+針刺組大鼠水平運(yùn)動(dòng)總路程和爬壁站立次數(shù)與空白組相近,21天造模+針刺組和空白組均明顯高于42天造模組和21天造模組(p0.01;p0.01);42天造模+針刺組明顯高于42天造模組(p0.01)。3.高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)主要觀察分析各組大鼠在開(kāi)臂及閉臂中活動(dòng)時(shí)間比值,結(jié)果顯示:在第一次實(shí)驗(yàn)中(Day0)各組大鼠實(shí)驗(yàn)結(jié)果并沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,F_(4,25)= 0.085,P ＞ 0.05。經(jīng)過(guò) 20 天 CUMS 造模后,F_(4,25)= 10.246,p0.01,4 組 CUMS 造模組大鼠,即42天造模組、21天造模組、21天造模+針刺組、42天造模+針刺組,均與空白組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01)。在第三重測(cè)量中(Day40),5組大鼠比值具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,F(4.25)= 6.179,p0.01。從組間比較來(lái)看,空白組的比值均高于其他組,F_(4,25)=34.946,p0.01�？瞻捉M和21天造模+針刺組,43天造模組和21天造模組以及21天造模+針刺組和42天造模+針刺組之間并沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,P0.05。21天造模+針刺組高于42天造模組(P0.05)和21天造模組(P0.05)。4.避暗實(shí)驗(yàn)主要觀察分析大鼠的潛伏期,結(jié)果顯示:在第一次避暗實(shí)驗(yàn)中(Day2),各組大鼠的潛伏期并沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,(F_(4,25)= 0.186,p0.01)。在第二次試驗(yàn)中(F_(4,25)= 45.675,p0.01),各組大鼠的潛伏期并具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,空白組潛伏期明顯短于其他4 CUMS造模組。在試驗(yàn)第42天(Day42),各組大鼠潛伏期具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,F_(4,25)= 45.675,p0.01。從組間比較看,空白組明顯低于其他各組(P0.05);21天造模+針刺組低于42天造模組(P0.01),21天造模組(P0.01)和42天造模+針刺組(P0.01)。5.本研究證實(shí):(1)21和42天兩種CUMS造模方式的大鼠都會(huì)出現(xiàn)明顯抑郁樣行為,且42天CUMS模型大鼠抑郁樣行為更嚴(yán)重;(2)大鼠在經(jīng)過(guò)21天CUMS刺激出現(xiàn)抑郁樣行為,繼續(xù)給予21天CUMS刺激抑郁樣癥狀會(huì)加重,但是加重的趨勢(shì)緩慢;(3)大鼠在經(jīng)過(guò)21天CUMS刺激出現(xiàn)抑郁樣行為后,不再繼續(xù)給予CUMS刺激,其抑郁樣行為雖然有所恢復(fù)仍然可以維持3周;(4)針刺可以良好的改善CUMS抑郁模型大鼠的抑郁樣行為,針刺具有抗抑郁療效;(5)針刺可改善不同輕重程度CUMS抑郁模型大鼠的抑郁樣行為,且抑郁程度越輕療效越明顯。實(shí)驗(yàn)二針刺對(duì)CUMS聯(lián)合孤養(yǎng)抑郁模型大鼠海馬突觸相關(guān)蛋白及AMPA受體亞基表達(dá)的影響方法:選用體重180-220g的成年雄性SD大鼠30只,隨機(jī)分5組:空白組;CUMS模型組;CUMS+針刺組;CUMS+假針刺組;CUMS+針刺+側(cè)腦室注射AMPA受體阻斷劑預(yù)處理組,每組6只�？瞻捉M6只大鼠一起飼養(yǎng)在同一籠子中,其余各組大鼠均采用孤養(yǎng)模型,即單籠飼養(yǎng)�？瞻捉M:大鼠接受42天普通飼料喂養(yǎng);CUMS模型組:大鼠接受連續(xù)42天普通飼料喂養(yǎng)的同時(shí)進(jìn)行連續(xù)42天慢性不可預(yù)見(jiàn)性溫和刺激(CUMS)造模;CUMS+針刺組:大鼠接受連續(xù)42天普通飼料喂養(yǎng)的同時(shí)進(jìn)行連續(xù)42天慢性不可預(yù)見(jiàn)性溫和刺激CUMS)造模,第22天接受四關(guān)穴針刺治療,隔日一次,連續(xù)治療21天。CUMS+假針刺組:大鼠接受連續(xù)42天普通飼料喂養(yǎng)的同時(shí)進(jìn)行連續(xù)42天慢性不可預(yù)見(jiàn)性溫和刺激(CUMS)造模,第22天接受四關(guān)穴假針刺治療,假針刺組取穴針刺時(shí)間均同針刺組,但針刺時(shí)不刺入皮下,隔日一次,連續(xù)治療21天。CUMS+針刺+側(cè)腦室注射AMPA受體阻斷劑預(yù)處理組:大鼠接受連續(xù)42天普通飼料喂養(yǎng)的同時(shí)進(jìn)行連續(xù)42天慢性不可預(yù)見(jiàn)性溫和刺激(CUMS)造模,第22天接受四關(guān)穴針刺治療,在每次針刺治療前給予大鼠側(cè)腦室注AMPA受體阻斷劑NBQX,30min后再給予針刺,隔日一次,連續(xù)治療21天。采用Western Blot及免疫熒光雙標(biāo)技術(shù)觀察針刺對(duì)CUMS聯(lián)合孤養(yǎng)抑郁模型大鼠海馬突觸相關(guān)蛋白CaMKⅡ、Stargazin、PSD-95、PICK1、p-GLUR1、P-GLUR2、GLUR1、GLUR2 及 AMPA 受體亞基 GluR1、GluR2 的表達(dá)情況。結(jié)果:通過(guò)Western Blot的實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析可見(jiàn):與空白組比較,CUMS模型組和CUMS+針刺+AMPA阻斷劑預(yù)處理組大鼠海馬Stargazin蛋白含量均明顯降低,分別比較均有顯著性差異(P=0.000,P=0.000);與空白組比較,CUMS+針刺組大鼠海馬Stargazin含量沒(méi)有顯著性差異(P=0.498);與空白組比較,CUMS+假針刺組大鼠海馬Stargazin蛋白含量增加,且有顯著性差異(P=0.01);CUMS模型組與CUMS模型+針刺+AMPA受體阻斷劑預(yù)處理組,CUMS+假針刺組與CUMS模型+針刺+AMPA受體阻斷劑預(yù)處理組兩兩比較無(wú)顯著性差異。(P=0.061,P=0.227)。與空白組比較,CUMS模型組、CUMS+假針刺組和CUMS+針刺+AMPA阻斷劑預(yù)處理組大鼠海馬p-GLUR1蛋白含量均明顯降低,分別比較均有顯著性差異(P=0.000,P=0.000,P=0.000,);與空白組比較,CUMS+針刺組大鼠海馬 p-GLUR1含量沒(méi)有顯著性差異(P=0.056);與CUMS模型組比較,CUMS+針刺組和CUMS+假針刺組大鼠海馬p-GLUR1蛋白含量增加,且有顯著性差異(P=0.00,P=0.01);CUMS模型組與CUMS模型+針刺+AMPA受體阻斷劑預(yù)處理組兩兩比較無(wú)顯著性差異(P=0.235);CUMS+假針刺組與CUMS模型+針刺+AMPA受體阻斷劑預(yù)處理組兩兩比較有顯著性差異(P=0.025)。與空白組比較,CUMS模型組、CUMS+假針刺組和CUMS+針刺+AMPA阻斷劑預(yù)處理組大鼠海馬P-GLUR2蛋白含量均明顯降低,分別比較均有顯著性差異(P=0.000,P=0.000,P=0.000,);與空白組比較,CUMS+針刺組大鼠海馬 P-GLUR2含量沒(méi)有顯著性差異(P=0.077);與CUMS模型組比較,CUMS+針刺組和CUMS+假針刺組大鼠海馬P-GLUR2蛋白含量增加,且有顯著性差異(P=0.00,P=0.000);CUMS模型組與CUMS模型+針刺+AMPA受體阻斷劑預(yù)處理組兩兩比較無(wú)顯著性差異(P=0.091);CUMS+假針刺組與CUMS模型+針刺+AMPA受體阻斷劑預(yù)處理組兩兩比較有顯著性差異(P=0.012)。與空白組比較,CUMS模型組、CUMS+假針刺組和CUMS+針刺+AMPA阻斷劑預(yù)處理組大鼠海馬p-CamkⅡI蛋白含量均明顯降低,分別比較均有顯著性差異(P=0.000,P=0.000,P=0.000,);與空白組比較,CUMS+針刺組大鼠海馬p-CamkⅡ含量沒(méi)有顯著性差異(P=0.332);與CUMS模型組比較,CUMS+針刺組和CUMS+假針刺組大鼠海馬p-CamkⅡ蛋白含量增加,且有顯著性差異(P=0.000,P=0.200);CUMS模型組與CUMS模型+針刺+AMPA受體阻斷劑預(yù)處理組兩兩比較無(wú)顯著性差異(P=0.210);CUMS+假針刺組與CUMS模型+針刺+AMPA受體阻斷劑預(yù)處理組兩兩比較無(wú)顯著性差異(P=0.242)。與空白組比較,CUMS模型組、CUMS+針刺組、CUMS+假針刺組和CUMS+針刺+AMPA阻斷劑預(yù)處理組大鼠海馬Pick1蛋白含量均明顯降低,分別比較均有顯著性差異(P=0.000,P=0.027,P=0.000,P=0.000);與 CUMS 模型組比較,CUMS+針刺組和CUMS+假針刺組大鼠海馬Pick1蛋白含量增加,且有顯著性差異(P=0.000,P=0.000);CUMS模型組與CUMS模型+針刺+AMPA受體阻斷劑預(yù)處理組兩兩比較無(wú)顯著性差異(P=0.064);CUMS+假針刺組與CUMS模型+針刺+AMPA受體阻斷劑預(yù)處理組兩兩比較,大鼠海馬Pick1蛋白含量均明顯增加,并且有顯著性差異(P=0.2)。CUMS+假針刺組與CUMS模型+針刺組兩兩比較,大鼠海馬Pick1蛋白含量均明顯降低,并且有顯著性差異(P=0.002)。與空白組比較,CUMS模型組、CUMS+針刺組、CUMS+假針刺組和CUMS+針刺+AMPA阻斷劑預(yù)處理組大鼠海馬PSD95蛋白含量均明顯降低,分別比較均有顯著性差異(P=0.000,P=0.008,P=0.000,P=0.000);與 CUMS 模型組比較,CUMS+針刺組和CUMS+假針刺組大鼠海馬PSD95蛋白含量增加,且有顯著性差異(P=0.000,P=0.000);CUMS模型組與CUMS模型+針刺+AMPA受體阻斷劑預(yù)處理組兩兩比較無(wú)顯著性差異(P=0.368);CUMS+假針刺組與CUMS模型+針刺組兩兩比較無(wú)顯著性差異(P=0.062);CUMS+假針刺組與CUMS模型+針刺+AMPA受體阻斷劑預(yù)處理組兩兩比較,大鼠海馬PSD95蛋白含量均明顯增加,并且有顯著性差異(P=0.001)。與空白組比較,CUMS模型組、CUMS+針刺組、CUMS+假針刺組和CUMS+針刺+AMPA阻斷劑預(yù)處理組大鼠海馬GLUR1蛋白含量均明顯降低,分別比較均有顯著性差異(P=0.000,P=0.001,P=0.000,P=0.000);與 CUMS 模型組比較,CUMS+針刺組和CUMS+假針刺組大鼠海馬GLUR1蛋白含量增加,且有顯著性差異(P=0.000,P=0.02);CUMS模型組與CUMS模型+針刺+AMPA受體阻斷劑預(yù)處理組兩兩比較無(wú)顯著性差異(P=0.118);CUMS+假針刺組與CUMS模型+針刺組兩兩比較大鼠海馬GLUR1蛋白含量降低,但并無(wú)顯著性差異(P=0.063);CUMS+假針刺組與CUMS模型+針刺+AMPA受體阻斷劑預(yù)處理組兩兩比較,大鼠海馬 GLUR1蛋白含量明顯增加,但是并無(wú)顯著性差異(P=0.084);CUMS+針刺組與CUMS模型+針刺+AMPA受體阻斷劑預(yù)處理組兩兩比較,大鼠海馬GLUR1蛋白含量明顯增加,并且有顯著差異(P=0.001)與空白組比較,CUMS模型組和CUMS+針刺+AMPA阻斷劑預(yù)處理組大鼠海馬GLUR2蛋白含量均明顯降低,分別比較均有顯著性差異(P=0.000,P=0.000);與空白組比較,CUMS+針刺組和CUMS+假針刺組大鼠海馬GLUR2蛋白含量降低,分別比較無(wú)顯著性差異(P=0.671,P=0.087);與CUMS模型組比較,CUMS+針刺組和CUMS+假針刺組大鼠海馬GLUR2蛋白含量均增加,且有顯著性差異(P=0.000,P=0.02);與CUMS模型組比較,CUMS模型+針刺+AMPA受體阻斷劑預(yù)處理組大鼠海馬GLUR2蛋白含量均增加,但是兩兩比較無(wú)顯著性差異(P=0.382);CUMS+假針刺組與CUMS模型+針刺組兩兩比較,CUMS+假針刺組大鼠海馬GLUR1蛋白含量降低,但并無(wú)顯著性差異(P=0.189);CUMS+針刺組與CUMS模型+針刺+AMPA受體阻斷劑預(yù)處理組兩兩比較,大鼠海馬GLUR2蛋白含量明顯增加,并且有顯著差異(P=0.001);CUMS+假針刺組與CUMS模型+針刺+AMPA受體阻斷劑預(yù)處理組兩兩比較,大鼠海馬GLUR2蛋白含量降低,有顯著性差異(P=0.016)。從免疫熒光雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見(jiàn):GluR1受體亞基在空白組和CUMS+針刺組中高表達(dá),而GluR2受體亞基在CUMS+針刺組及假針刺組高表達(dá),GluR1受體亞基和GluR2受體亞基在CUMS模型組和CUMS模型+針刺+阻斷劑預(yù)處理組中均未見(jiàn)高表達(dá)。結(jié)論本研究通過(guò)上述兩個(gè)實(shí)驗(yàn)佐證證明:(1)針刺能很好的調(diào)節(jié)慢性不可預(yù)見(jiàn)性溫和刺激聯(lián)合孤養(yǎng)模型抑郁癥大鼠行為學(xué)改變。(2)針刺能增強(qiáng)慢性不可預(yù)見(jiàn)性溫和刺激聯(lián)合孤養(yǎng)模型大鼠海馬突觸相關(guān)蛋白GLUR1、p-GLUR1、GLUR2、p-GLUR2、Stargazin、p-Camk Ⅱ、Pick1、PSD95的表達(dá)。(3)針刺能增強(qiáng)慢性不可預(yù)見(jiàn)性溫和刺激聯(lián)合孤養(yǎng)模型大鼠海馬AMPA受體亞基GluR1和GluR2的表達(dá)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R245

【參考文獻(xiàn)】

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9 彭紅軍;李凌江;賀忠;;抑郁癥患者前扣帶回代謝特征與下丘腦-垂體-腎上腺軸活性水平的氫質(zhì)子波譜研究[J];中國(guó)心理衛(wèi)生雜志;2013年08期

10 高麗美;任玉蘭;郭太品;李德華;唐勇;梁繁榮;;太沖穴及常見(jiàn)配伍運(yùn)用規(guī)律的文獻(xiàn)研究[J];時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥;2013年06期

相關(guān)會(huì)議論文 前1條

1 馬琴;周德安;王麟鵬;張捷;;中醫(yī)對(duì)抑郁癥的古代和現(xiàn)代研究進(jìn)展[A];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)第七屆精神疾病學(xué)術(shù)討論會(huì)論文匯編[C];2002年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前4條

1 肖瑤;針刺對(duì)抑郁大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞谷氨酸功能影響的研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2014年

2 紀(jì)倩;不同電針對(duì)慢性應(yīng)激抑郁大鼠海馬神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子及谷氨酸代謝相關(guān)蛋白的影響[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2013年

3 尹冬青;抑郁癥中醫(yī)證候分型診斷量表及證候特征研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2013年

4 蔣麗;針刺四關(guān)穴治療肝郁型抑郁癥的臨床及cAMP-PKA信號(hào)通路研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2012年

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本文編號(hào)：1400580