發(fā)布時間：2018-01-11 06:28

  本文關(guān)鍵詞：Sterile-20激酶MINK1調(diào)控血小板功能并參與止血和血栓形成的機制研究　出處：《浙江大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 血小板 MINK1 致密顆粒 ADP 絲裂原活化蛋白激酶

【摘要】：血小板在生理止血和血栓形成中扮演了重要角色,血小板的功能不足會導(dǎo)致出血,而血小板過度活化則會引起血栓性疾病。因此對血小板活化分子機理的深入研究,能夠闡明出血或血栓性疾病的發(fā)病機制,并為該類疾病尋求新的治療靶點和策略。在血小板活化過程中,絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)作為重要的信號通路節(jié)點分子,參與調(diào)控血小板粘附、釋放、聚集等各項功能,以促進血栓的形成。經(jīng)典的MAPK通路是包含三個激酶的級聯(lián)信號反應(yīng),MAP3K磷酸化激活MAP2K,MAP2K再磷酸化激活MAPK。然而,在血小板信號網(wǎng)絡(luò)中對MAPK通路具體的細致調(diào)控還不清楚。以往研究表明,Sterile-20激酶在信號通路中能夠扮演MAP4K的角色來調(diào)控MAPK通路的活化。Sterile-20激酶超家族根據(jù)結(jié)構(gòu)可分為兩大家族:p21活化激酶(PAK)家族和生發(fā)中心激酶(GCK)家族。MINK1屬于GCK Ⅳ亞家族,在2000年被首次報道,在多種細胞活動過程中發(fā)揮重要作用,并能夠作為MAP4K參與調(diào)控Ras致癌基因誘導(dǎo)的卵巢上皮細胞生長抑制以及T細胞發(fā)育過程中的陰性選擇。MINK1在止血與血栓領(lǐng)域的作用在此之前未見報道,鑒于MAPK通路在血小板活化以及血栓形成中的作用,我們提出假設(shè):MINK1能夠通過調(diào)控MAPK來介導(dǎo)血小板活化,并參與止血和血栓形成過程。本研究利用轉(zhuǎn)基因小鼠模型,首次研究了MINK1在血小板功能,止血以及血栓形成中的作用。結(jié)果可以概括為以下幾點:(1)在小鼠出血實驗中,MINK1敲除小鼠尾部出血時間明顯延長,說明MINK1的缺失使得小鼠止血功能受損。(2)在三氯化鐵誘導(dǎo)的腸系膜動脈血栓模型中,MINK1敲除小鼠的動脈堵塞時間顯著延長,兩倍于野生型小鼠。我們通過體外全血微灌流實驗?zāi)�擬血栓形成,發(fā)現(xiàn)動脈流速條件下,MINK1缺失血小板在膠原表面形成的血栓面積明顯減小,證明MINK1對血栓形成的正向促進作用依賴于其在血小板中發(fā)揮的作用。(3)在對血小板各項功能進行檢測后發(fā)現(xiàn),MINK1的缺失不影響血小板在膠原表面的粘附,然而當用低濃度膠原和凝血酶刺激血小板發(fā)生聚集時,MINK1的缺失使得血小板的聚集水平顯著降低,并且伴隨有致密顆粒的釋放障礙,但是血小板α顆粒的釋放以及血栓烷A2的合成并不受MINK1缺失的影響。另外,MINK1缺失血小板在纖維蛋白原表面的鋪展面積較野生型血小板明顯減小,但是其血塊回縮功能則表現(xiàn)正常。(4)當繼發(fā)釋放的ADP被apyrase水解后,野生型血小板與MINK1缺失血小板在聚集和鋪展功能上的差異基本消失,并且,外源性補充ADP能夠使MINK1缺失血小板的聚集和鋪展功能恢復(fù)到正常水平。因此,MINK1的缺失導(dǎo)致的ADP分泌減少是血小板聚集和鋪展功能發(fā)生障礙的原因。(5)在分子機制研究方面,我們發(fā)現(xiàn)MINK1的缺失不影響整合素αⅡbβ3的由內(nèi)向外和由外向內(nèi)信號本身,而在低濃度膠原和凝血酶所誘導(dǎo)的聚集反應(yīng)中,MINK1的缺失使得ERK,p38和Akt的磷酸化水平顯著降低,且MINK1對上述分子的調(diào)控不依賴于繼發(fā)釋放的ADP以及整合素αⅡbβ3介導(dǎo)的由外向內(nèi)信號。進一步研究發(fā)現(xiàn),MINK1也能夠調(diào)控ERK和p38上游的MAP2K分子——MEK1/2和MKK3/6的活化。在用ERK抑制劑U0126或p38抑制劑SB203580孵育血小板后發(fā)現(xiàn),它們能夠消除野生型血小板與MINK1缺失血小板在應(yīng)對低濃度膠原和凝血酶刺激時聚集和致密顆粒釋放上的差異,說明MINK1缺失導(dǎo)致的ERK和p38磷酸化水平的降低,是致密顆粒釋放減少以及聚集受損的原因。綜上所述,MINK1是參與血小板活化以及止血和血栓形成的新信號分子,其能夠通過介導(dǎo)MAPK通路以及Akt的活化,來特異調(diào)控致密顆粒的釋放。
[Abstract]:Platelet formation plays an important role in hemostasis and thrombosis, platelet function deficiency can lead to bleeding, and excessive platelet activation can cause thrombotic diseases. Therefore further study the molecular mechanism of the activation of platelets, to elucidate the pathogenesis of hemorrhagic or thrombotic disease, and the disease for therapeutic targets and new strategies in the process of platelet activation, mitogen activated protein kinase (MAPK) signaling node as important molecules involved in platelet adhesion, regulation, release, aggregation and other functions, to promote the formation of thrombus. MAPK pathway is the classic cascade reaction consists of three protein kinase MAP3K phosphorylation, MAP2K phosphorylation and activation of MAP2K. The activation of MAPK. however, detailed regulation in platelet signaling network on MAPK pathway specific is not clear. Previous studies showed that Sterile-20 kinase in the signaling pathway can Enough to play the role of MAP4K to regulate MAPK pathway activation of.Sterile-20 kinase superfamily according to the structure can be divided into two families: p21 activated kinase (PAK) family and germinal center kinase (GCK) family.MINK1 belongs to the GCK subfamily IV, was first reported in 2000, in a variety of cytokines play an important role in the process of moving. It can be used as MAP4K is involved in the regulation of Ras gene induced by ovarian epithelial cells and negative growth inhibition of T cell development in the process of selecting.MINK1 reported before hemostasis and thrombosis role in this field, in view of the activation of MAPK pathway and the role in the formation of a thrombus in the blood plate, we hypothesized that MINK1 can regulate MAPK mediated guide and participate in the formation process of platelet activation, hemostasis and thrombosis. This study used transgenic mouse model for the first time on the MINK1 in platelet function and hemostasis and thrombosis in the Use. The results can be summarized as follows: (1) hemorrhage in mice experiment, MINK1 knockout mouse tail bleeding time was prolonged, MINK1 explained that the lack of hemostatic function in mice injured. (2) in the mesenteric artery thrombosis model induced by FeCl3, MINK1 knockout mice blocked arteries significantly longer. Two times in wild-type mice by in vitro blood perfusion. We found experimental thrombosis, arterial flow conditions, the lack of MINK1 platelet formation on the surface of collagen thrombus area significantly reduced, prove the positive effect of MINK1 on thrombus formation depends on the play in the role of platelet. (3) found in the detection of the platelet function, MINK1 deletion does not affect platelet adhesion on the surface of collagen, however, when using low concentration of collagen and thrombin stimulated platelet aggregation, MINK1 that the lack of blood In the aggregation level decreased significantly, and with the release disorder of dense particles, but the release of platelet alpha granule and synthesis of thromboxane A2 was not affected by the deletion of MINK1. In addition, deletion of MINK1 decreased significantly in the spreading area of platelet fibrinogen surface than the wild-type platelets, but the clot retraction function is normal. (4) when the secondary release of ADP was apyrase after hydrolysis, differences in aggregation and spreading on the function of the wild-type platelets and MINK1 deletion platelet disappeared, and exogenous ADP can make MINK1 lack of platelet aggregation and spreading function recovered to the normal level. Therefore, the reason is to reduce platelet aggregation and spreading the functional disorder of MINK1 due to the lack of secretion of ADP. (5) in the study of the molecular mechanism, we found that loss of MINK1 does not affect integrin alpha B beta 3 II from inside to outside and the In the signal itself, and the aggregation induced by collagen and thrombin in low concentration of MINK1, that the lack of ERK, p38 and Akt phosphorylation level were significantly decreased, and the molecular regulation of MINK1 does not depend on the secondary release of ADP and integrin alpha B beta 3 II mediated by inward signal further. The study found that MINK1 can activate the MAP2K molecular regulation of ERK and p38 upstream of MEK1/2 and MKK3/6. Found in ERK inhibitor U0126 or p38 inhibitor SB203580 after incubation of platelets, they can eliminate the wild-type platelets and MINK1 deletion in response to low concentrations of platelet collagen and thrombin stimulated aggregation and dense granule release the difference MINK1, due to the lack of ERK and the decrease of p38 phosphorylation, is dense granule release is reduced and the cause of aggregation damaged. In summary, MINK1 is involved in platelet activation and bleeding and The new signalling molecules of thrombosis can regulate the release of dense particles specifically by mediating the MAPK pathway and the activation of Akt.

【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R54

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王祖武;;癌與血栓形成(33例癌癥尸體解剖分析)[J];浙江醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;1981年04期

2 林寶爵,夏學(xué)鳴;血栓形成的發(fā)病情況[J];江蘇醫(yī)藥;1983年05期

3 阮長耿;血栓形成的機理[J];江蘇醫(yī)藥;1983年05期

4 王學(xué)文;血栓形成的防治[J];江蘇醫(yī)藥;1983年05期

5 沈志祥,張瑞芳;惡性腫瘤和血栓形成的研究概況[J];腫瘤;1991年06期

6 靳蘭玉,張和順,趙進祿,張愛麗;陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿并發(fā)血栓形成(1例報告及文獻復(fù)習(xí))[J];臨床薈萃;1998年14期

7 魏開敏;老年人血栓形成的危險因素[J];家庭醫(yī)學(xué);1998年02期

8 劉建剛,錢民全,彭榮蕤,趙篤鳳,錢大興;溫度對血栓形成的影響[J];醫(yī)用生物力學(xué);2000年02期

9 李英;;抗磷脂抗體綜合征血栓形成的機制[J];山東醫(yī)藥;2001年05期

10 馬建林;老年血栓形成前狀態(tài)及其防治的研究進展[J];心臟雜志;2002年02期

相關(guān)會議論文 前10條

1 張麗;;血小板減少伴廣泛血栓形成1例[A];2012年浙江省血液病學(xué)年會論文集[C];2012年

2 錢民全;彭榮蕤;趙篤鳳;錢大興;吳望一;溫功碧;翁維良;劉劍剛;王怡;;血栓形成研究的進展及對21世紀的展望[A];“力學(xué)2000”學(xué)術(shù)大會論文集[C];2000年

3 ;肺癌與血栓形成[A];天津市抗癌協(xié)會肺癌專業(yè)委員會2011年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2011年

4 米玉紅;;靜脈血栓栓塞性疾病識別與處理[A];中華醫(yī)學(xué)會急診醫(yī)學(xué)分會第十三次全國急診醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會大會論文集[C];2010年

5 錢民全;趙篤鳳;彭榮蕤;錢大興;蕭藍;;血栓形成中的激發(fā)機理和血液成分的作用探討[A];全國第九屆生物力學(xué)和流變學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2001年

6 黃艷洪;陳文閣;;血栓形成的危險因素[A];2010年中國中西醫(yī)結(jié)合周圍血管疾病學(xué)術(shù)交流會論文集[C];2010年

7 馮繼鋒;;腫瘤患者血栓形成的預(yù)防和處理[A];第六屆中國癌癥康復(fù)與姑息醫(yī)學(xué)大會大會論文集和專題講座[C];2010年

8 馬軍;李家增;;惡性腫瘤與血栓形成[A];第三屆中國腫瘤內(nèi)科大會教育集暨論文集[C];2009年

9 陳紀林;楊躍進;喬樹賓;黃靜涵;姚民;秦學(xué)文;徐波;劉海波;吳永建;袁晉青;陳玨;戴軍;尤士杰;李建軍;高潤霖;;藥物洗脫支架置入后的血栓形成的原因分析[A];中華醫(yī)學(xué)會心血管病學(xué)分會第八次全國心血管病學(xué)術(shù)會議匯編[C];2006年

10 王立新;;急性腸系膜上靜脈血栓形成的臨床觀察及護理[A];河南省第八次手術(shù)室護理學(xué)術(shù)交流會暨高級研修班資料匯編[C];2006年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 董玉清;如何減少血栓形成[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報;2007年

2 中國微循環(huán)學(xué)會副會長 趙克森 教授;血小板與血栓形成[N];科技日報;2000年

3 呂峰;吃柚子減少血栓形成[N];健康時報;2005年

4 方留民;肥胖、糖尿病可誘發(fā)血栓形成[N];中國醫(yī)藥報;2002年

5 王雪飛;藥物支架植入后血栓形成原因探明[N];健康報;2006年

6 皖君;中國人血栓形成與眾不同[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2002年

7 ;抗栓治療藥物開發(fā)新思路——從阻斷血栓形成的起始進行探尋[N];中國醫(yī)藥報;2006年

8 秦皇島市第一醫(yī)院心外科 劉亞軍;天熱易發(fā)生血栓病[N];河北科技報;2009年

9 衣曉峰　孫理;重視惡性腫瘤患者血栓形成的防治[N];中國醫(yī)藥報;2011年

10 金華;洋蔥和魚能預(yù)防血栓[N];衛(wèi)生與生活報;2008年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前9條

1 岳明;Sterile-20激酶MINK1調(diào)控血小板功能并參與止血和血栓形成的機制研究[D];浙江大學(xué);2017年

2 史紅霞;飲酒與血栓形成關(guān)系的實驗研究[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2004年

3 魏陵博;飲酒與血栓形成的臨床與實驗研究[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2004年

4 段朝霞;凝血、纖維蛋白溶解和基質(zhì)金屬蛋白酶系統(tǒng)與腫瘤轉(zhuǎn)移及其血栓形成的相關(guān)研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2008年

5 李興國;Racl、NF-κB、IL-1β在DVT形成中表達變化的研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2012年

6 彭敏;熱毒與血栓形成關(guān)系的實驗及臨床研究[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2008年

7 胡繼紅;血中檢測增強凝血因子及抑制纖溶酶原活化關(guān)鍵基因定量診斷DVT相關(guān)研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2013年

8 李世軍;雄激素與其受體在動脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性和血栓形成中的作用與機制研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學(xué)院;2008年

9 張紅霞;川芎嗪與丹參酚酸B聯(lián)合干預(yù)剪應(yīng)力誘導(dǎo)血栓形成的研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2006年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 李剛;中心靜脈導(dǎo)管相關(guān)性血栓形成的臨床研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

2 何海菊;96例骨髓增殖性腫瘤的臨床分析[D];東南大學(xué);2015年

3 張晗;利伐沙班對兔頸靜脈血栓模型血栓形成的影響及其抗凝相關(guān)實驗室檢測[D];蘇州大學(xué);2016年

4 劉毅;中性粒細胞蛋白酶3在陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥血栓形成中的作用研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2016年

5 楊琛騰;深靜脈血栓形成時間推斷研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2016年

6 梁繼芳;饑餓與脫水狀態(tài)下血栓形成危險因素的初步評估[D];山西醫(yī)科大學(xué);2011年

7 高玲;特發(fā)性血小板減少性紫癜合并血栓形成的7例臨床分析[D];吉林大學(xué);2005年

8 程艷;惡性腫瘤并發(fā)血栓形成52例臨床分析[D];大連醫(yī)科大學(xué);2009年

9 劉世;DVT患者中TpP的表達變化及意義的臨床研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2013年

10 武建;溶栓治療預(yù)防血栓形成后綜合征的臨床研究[D];濱州醫(yī)學(xué)院;2013年

，

本文編號：1408500