本文關(guān)鍵詞：SIRT1調(diào)控自噬對(duì)人椎間盤髓核細(xì)胞退變的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《重慶醫(yī)科大學(xué)》 2015年

SIRT1調(diào)控自噬對(duì)人椎間盤髓核細(xì)胞退變的影響

江維  

【摘要】：第一部分人椎間盤髓核組織分離、鑒定及髓核細(xì)胞培養(yǎng)目的：掌握人椎間盤髓核細(xì)胞的分離、培養(yǎng)方法,為后續(xù)實(shí)驗(yàn)打下基礎(chǔ)。方法：采用Collagen Ⅱ免疫組化、透射電鏡觀察鑒定從青壯年腰椎爆裂骨折及中老年脊柱退行性疾病手術(shù)中取得的椎間盤標(biāo)本經(jīng)分離后的髓核組織；應(yīng)用0.25%胰酶、2%Ⅱ型膠原酶聯(lián)合消化從中老年椎間盤突出癥／腰椎滑脫癥手術(shù)中取得的椎間盤經(jīng)分離后的髓核組織進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),光鏡觀察、Collagen Ⅱ免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定髓核細(xì)胞。結(jié)果：Collagen Ⅱ免疫組化、透射電鏡觀察證實(shí)從青壯年腰椎爆裂骨折及中老年脊柱退行性疾病手術(shù)中取得的椎間盤標(biāo)本經(jīng)分離后的部分為髓核組織；成功培養(yǎng)出人退變椎間盤髓核細(xì)胞,形態(tài)學(xué)觀察及Collagen Ⅱ免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定證實(shí)培養(yǎng)的為髓核細(xì)胞。結(jié)論：成功分離鑒定人椎間盤髓核組織；0.25%胰酶、2%Ⅱ型膠原酶聯(lián)合消化法成功培養(yǎng)出原代人椎間盤退變髓核細(xì)胞,并行傳代培養(yǎng),光鏡下形態(tài)學(xué)觀察、Collagen Ⅱ免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定證實(shí)培養(yǎng)細(xì)胞為髓核細(xì)胞。第二部分自噬活性在人正常椎間盤髓核細(xì)胞及退變髓核細(xì)胞中的表達(dá)及意義目的：明確人正常椎間盤髓核細(xì)胞及退變髓核細(xì)胞中自噬活性的差異,SIRT1表達(dá)差異以及不同髓核細(xì)胞凋亡情況。方法：電鏡觀察不同髓核細(xì)胞中自噬體的數(shù)量；熒光定量PCR Western Blot方法檢測不同髓核標(biāo)本中SIRT1、LC3、Beclin-1的基因及蛋白表達(dá)差異；免疫組化檢測不同髓核標(biāo)本中SIRT1、Collagen Ⅱ、 Caspase3的蛋白表達(dá)差異；TUNEL法檢測不同髓核標(biāo)本中凋亡率差異。結(jié)果：退變髓核細(xì)胞中自噬體數(shù)量,SIRT1、LC3、Beclin-1的基因表達(dá),SIRT1、LC3 Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、Collagen Ⅱ的蛋白表達(dá)均較正常髓核細(xì)胞明顯降低(P0.05)；退變髓核細(xì)胞Caspase3蛋白表達(dá)及凋亡率較正常髓核細(xì)胞明顯升高(P0.05)。結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)證實(shí)人退變髓核細(xì)胞中SIRT1低表達(dá)、自噬活性降低、細(xì)胞凋亡率增高；SIRT1與髓核細(xì)胞自噬活性呈正向關(guān)系,與細(xì)胞凋亡呈反向關(guān)系,髓核細(xì)胞自噬活性與凋亡呈反向關(guān)系。第三部分SIRT1調(diào)控自噬對(duì)人退變髓核細(xì)胞凋亡的影響及分子機(jī)制研究目的：探討SIRT1是否能夠通過調(diào)節(jié)人退變髓核細(xì)胞的自噬從而調(diào)控髓核細(xì)胞凋亡及可能的分子機(jī)制。方法：首先用SIRT1激動(dòng)劑resveratrol、抑制劑nicotinamide、 SIRT1-siRNA處理退變髓核細(xì)胞后用Western Blot法檢測SIRT1、LC3 Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1的表達(dá),用流式細(xì)胞儀檢測凋亡率變化。然后resveratrol處理髓核細(xì)胞后用自噬抑制劑bafilomycin A抑制自噬,Western Blot法檢測LC3 Ⅱ/Ⅱ、cleaved caspase3的表達(dá),用流式細(xì)胞儀檢測凋亡率變化。最后分別用P13K抑制劑LY294002和MEK抑制劑PD98059處理髓核細(xì)胞后,Western Blot法檢測Akt及Erkl/2信號(hào)通路相關(guān)蛋白激活表達(dá)情況。結(jié)果：SIRT1激動(dòng)劑resveratrol處理細(xì)胞后能提高LC3 Ⅱ/Ⅰ、 Beclin-1的表達(dá),同時(shí)降低髓核細(xì)胞凋亡率(P0.05)。SIRT1抑制劑nicotinamide、SIRT1-siRNA處理退變髓核細(xì)胞后降低LC3 Ⅱ/Ⅰ、 Beclin-1的表達(dá),同時(shí)髓核細(xì)胞凋亡率增加(P0.05)。bafilomycin A能夠提高LC3 Ⅱ/Ⅰ表達(dá)(P0.05),使凋亡率增加(P0.05),同時(shí)能抵消resveratrol降低髓核細(xì)胞凋亡率的作用。Western Blot結(jié)果顯示LY294002能夠通過抑制Akt磷酸化從而抑制LC3 Ⅱ/Ⅰ表達(dá)(P0.05),但resveratrol能部分抵消LY294002對(duì)LC3 Ⅱ/Ⅰ表達(dá)的抑制作用；PD98059能夠通過抑制Erk1/2的磷酸化部分降低LC3 Ⅱ/Ⅰ表達(dá),而resveratrol不能逆轉(zhuǎn)PD98059抑制LC3 Ⅱ/Ⅰ表達(dá)的作用。結(jié)論：SIRT1通過促進(jìn)自噬抑制退變髓核細(xì)胞的凋亡,SIRT1通過磷酸化Erk1/2信號(hào)發(fā)揮調(diào)節(jié)人退變髓核細(xì)胞自噬的功能。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R681.5
【目錄】：

下載全文 更多同類文獻(xiàn)

CAJ全文下載

(如何獲取全文？ 歡迎：購買知網(wǎng)充值卡、在線充值、在線咨詢)

CAJViewer閱讀器支持CAJ、PDF文件格式

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張麗;關(guān)曉明;馬迅;滿孝旭;趙勝;;人端粒酶反轉(zhuǎn)錄酶基因感染對(duì)人髓核細(xì)胞基本特性的影響[J];中國藥物與臨床;2013年S1期

2 李鋒;李光輝;陶鳳華;郭風(fēng)勁;許濤;潘峰;;兔髓核細(xì)胞誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為髓核細(xì)胞的研究[J];生物骨科材料與臨床研究;2006年06期

3 李旭;侯筱魁;湯亭亭;李惠武;郭剛;裴國獻(xiàn);;人轉(zhuǎn)化生長因子β_1重組腺病毒轉(zhuǎn)染傳代髓核細(xì)胞對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)合成的影響[J];中國修復(fù)重建外科雜志;2007年12期

4 伊友明;陶鳳華;杜靜;潘峰;李鋒;;轉(zhuǎn)化生長因子-β1和胰島素樣生長因子-1對(duì)兔退變髓核細(xì)胞生物學(xué)活性的影響[J];華中醫(yī)學(xué)雜志;2009年03期

5 劉瑞平;徐南偉;;退變兔髓核細(xì)胞和正常髓核細(xì)胞生物學(xué)特性的比較[J];實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志;2009年21期

6 梁偉國;葉冬平;戴麗冰;沈雁;;體外培養(yǎng)人正常椎間盤髓核細(xì)胞與退變髓核細(xì)胞的生物學(xué)性狀比較:可以為干預(yù)退變髓核細(xì)胞提供最佳時(shí)機(jī)嗎?[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2010年28期

7 王鋒;朱悅;;影響髓核細(xì)胞表達(dá)水通道蛋白1相關(guān)因素的實(shí)驗(yàn)研究[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2011年06期

8 牛建鵬;衛(wèi)陳剛;任龍韜;;髓核細(xì)胞及其生物力學(xué)研究進(jìn)展[J];臨床醫(yī)藥實(shí)踐;2011年08期

9 李鋒生;梁偉國;葉冬平;戴麗冰;陳鴻輝;;體外培養(yǎng)人退變髓核細(xì)胞的生物學(xué)性狀[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2011年28期

10 滿孝旭;馬迅;關(guān)曉明;張麗;;肝細(xì)胞生長因子對(duì)體外培養(yǎng)的人退變髓核細(xì)胞生物學(xué)活性影響[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2011年24期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 趙秀寶;馬信龍;馬劍雄;李稚君;李爽;孫曉雷;;周期性牽張力聯(lián)合灌注培養(yǎng)對(duì)大鼠髓核細(xì)胞影響的研究[A];天津市生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會(huì)第30次學(xué)術(shù)年會(huì)暨生物醫(yī)學(xué)工程前沿科學(xué)研討會(huì)論文集[C];2010年

2 王會(huì)仁;董健;周曉崗;李熙雷;林紅;;人脂肪及骨髓來源間充質(zhì)干細(xì)胞與髓核細(xì)胞非接觸共培養(yǎng)后的類髓核分化效應(yīng)研究[A];第十九屆全國中西醫(yī)結(jié)合骨傷科學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2012年

3 李長青;周躍;羅剛;張傳志;;仿生髓核組織工程支架材料對(duì)體外培養(yǎng)髓核細(xì)胞合成代謝的影響[A];第八屆全國脊柱脊髓損傷學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2007年

4 余磊;廖華;熊紹虎;;人髓核細(xì)胞體外培養(yǎng)體系的建立[A];解剖學(xué)雜志——中國解剖學(xué)會(huì)2002年年會(huì)文摘匯編[C];2002年

5 梁偉國;葉冬平;戴麗冰;陳鴻輝;;BMP-2對(duì)人退變椎間盤髓核細(xì)胞影響的實(shí)驗(yàn)研究[A];第20屆中國康協(xié)肢殘康復(fù)學(xué)術(shù)年會(huì)論文選集[C];2011年

6 梁偉國;葉冬平;戴麗冰;陳鴻輝;;bFGF對(duì)人退變椎間盤髓核細(xì)胞影響的實(shí)驗(yàn)研究[A];第20屆中國康協(xié)肢殘康復(fù)學(xué)術(shù)年會(huì)論文選集[C];2011年

7 王海強(qiáng);;CK8在退變椎間盤髓核細(xì)胞中的表達(dá)[A];中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)脊柱醫(yī)學(xué)專業(yè)委員會(huì)第六屆學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2013年

8 葉冬平;梁偉國;戴麗冰;沈雁;;GFP-hTERT轉(zhuǎn)染人正常髓核細(xì)胞構(gòu)建永生化髓核細(xì)胞株的實(shí)驗(yàn)研究[A];第20屆中國康協(xié)肢殘康復(fù)學(xué)術(shù)年會(huì)論文選集[C];2011年

9 李長青;周躍;羅剛;張傳志;;仿生髓核組織工程支架材料對(duì)體外培養(yǎng)髓核細(xì)胞生長增殖的影響[A];第八屆全國脊柱脊髓損傷學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2007年

10 伍耀宏;徐寶山;李秀蘭;楊強(qiáng);張楊;夏群;張春秋;許海委;;軟骨脫細(xì)胞基質(zhì)多孔支架與山羊髓核細(xì)胞生物相容性研究[A];第十九屆全國中西醫(yī)結(jié)合骨傷科學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2012年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 葉冬平;microRNA-155通過下調(diào)ERK1/2水平影響人正常椎間盤髓核細(xì)胞退變的實(shí)驗(yàn)研究[D];暨南大學(xué);2015年

2 王崢;FOXC2和BMP-7在椎間盤退變性疾病中的作用及其機(jī)制的相關(guān)研究[D];吉林大學(xué);2016年

3 江維;SIRT1調(diào)控自噬對(duì)人椎間盤髓核細(xì)胞退變的影響[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

4 高鋒;低強(qiáng)度脈沖超聲波促進(jìn)人髓核細(xì)胞合成胞外基質(zhì)功能性成分的體外實(shí)驗(yàn)研究[D];蘇州大學(xué);2011年

5 李喜功;人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與退變髓核細(xì)胞體外共培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)研究[D];蘇州大學(xué);2011年

6 張曉軍;低強(qiáng)度脈沖超聲對(duì)立體培養(yǎng)的人退變椎間盤髓核細(xì)胞的影響實(shí)驗(yàn)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

7 馬凱歌;自噬參與壓力誘導(dǎo)的髓核細(xì)胞損傷及其機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2014年

8 石健;人骨形態(tài)發(fā)生蛋白-7基因轉(zhuǎn)染對(duì)原代培養(yǎng)兔髓核細(xì)胞生物學(xué)活性的影響[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2006年

9 李政;瘦素在人腰椎間盤髓核退變中的作用及機(jī)制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

10 王大武;SIRT1對(duì)退變椎間盤髓核細(xì)胞凋亡調(diào)控及分子機(jī)制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2012年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 任國梁;退變髄核細(xì)胞拉伸實(shí)驗(yàn)的形態(tài)學(xué)研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

2 唐浩;CD24在人髓核細(xì)胞鑒定應(yīng)用中的相關(guān)研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2015年

3 劉永明;過表達(dá)NDRG2基因促進(jìn)人髓核細(xì)胞衰老的體外實(shí)驗(yàn)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

4 楊晨;活化T細(xì)胞核因子對(duì)髓核細(xì)胞中ADAMTS-4及-5表達(dá)的調(diào)控作用[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

5 胡津銓;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)于髓核細(xì)胞炎性損傷的保護(hù)作用[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

6 趙光宇;不同共培養(yǎng)條件下兔NPCs誘導(dǎo)BMSCs向類髓核細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2015年

7 周栩;Id1基因?qū)�BMP-2維持兔髓核細(xì)胞軟骨特性的影響[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

8 宋鵬;高氧微環(huán)境刺激與細(xì)胞連續(xù)分裂在體外人髓核細(xì)胞老化中作用的初探[D];東南大學(xué);2015年

9 崔佳瞿;老化髓核細(xì)胞的致退變效應(yīng)及其機(jī)制的探索[D];東南大學(xué);2015年

10 孫灰灰;人老化髓核細(xì)胞的炎性因子表達(dá)變化分析[D];東南大學(xué);2015年

  本文關(guān)鍵詞：SIRT1調(diào)控自噬對(duì)人椎間盤髓核細(xì)胞退變的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。