發(fā)布時間：2017-12-23 10:28

  本文關(guān)鍵詞：番茄SlSWEET11b基因的表達及遺傳轉(zhuǎn)化　出處：《沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 番茄 SlSWEET11b 實時定量分析 瞬時表達 遺傳轉(zhuǎn)化

【摘要】：SWEET蛋白是一種新型的糖轉(zhuǎn)運蛋白,在糖的輸出轉(zhuǎn)運過程中起重要作用,近來的研究表明SWEET蛋白在擬南芥、水稻中,在離子的轉(zhuǎn)運過程、生長和發(fā)育、以及對環(huán)境的適應(yīng)性方面都起著重要作用。本課題組前期研究表明SlSWEETT11b基因在番茄果實中大量表達,該基因在番茄果實發(fā)育的過程中所發(fā)揮的具體作用還不清楚。本研究通過生物信息學(xué)及實時定量PCR方法明確SlSWEE7116基因的特征,并通過構(gòu)建基因的過表達和沉默載體,采用瞬時表達和穩(wěn)定遺傳轉(zhuǎn)化的方法對SlSlSWEET11b基因的功能進行初步分析,獲得的主要結(jié)果如下:1.根據(jù)番茄數(shù)據(jù)庫獲得SlSWWEET11b基因全長1124bp,由375個氨基酸編碼,跨膜結(jié)構(gòu)分析表明該基因具有7跨膜結(jié)構(gòu),包含兩個MtN3結(jié)構(gòu)域。與擬南芥SWEET家族的系統(tǒng)進化樹分析表明,該蛋白位于CladeⅡ。根據(jù)該分支其它SWEET蛋白的功能分析,該蛋白可能主要負責(zé)蔗糖和果糖的轉(zhuǎn)運。2.采用實時定量PCR技術(shù),對番茄果實的不同發(fā)育時期表達分析,結(jié)果表明SlSWEET11b基因在番茄花后21d表達量達到峰值,隨后下降。在果實成熟過程中,該基因的表達部位也不盡相同,其中在綠果期的膠質(zhì)胎座、轉(zhuǎn)色期的心室隔壁、紅果期的萼片與果實維管束中表達量較高。3.成功克隆到SlWEET11b基因的全長,采用雙酶切的方法進行過表達載體的構(gòu)建,同時利用Gateway技術(shù)構(gòu)建沉默表達載體。利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的番茄果實注射方法將構(gòu)建好的過表達和沉默載體在番茄花后21d的果實中進行瞬時表達,qRT-PCR結(jié)果分析表明過表達載體注射番茄果實3d后SlSWEET11b基因表達量明顯高于對照果實;同樣將構(gòu)建好的沉默載體注射到番茄的果實后SlSWEET11b基因的表達量明顯降低。以上結(jié)果表明構(gòu)建的過表達載體和沉默載體能夠影響SlSWEET11b基因的表達,可以用于進一步的番茄遺傳轉(zhuǎn)化分析。4.利用Micro-Tom番茄建立了穩(wěn)定的遺傳轉(zhuǎn)化體系,通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)將基因的沉默載體轉(zhuǎn)化番茄,已獲得SlSWEET11b沉默株系7株,通過PCR鑒定分析后獲得4株顯示陽性的番茄植株,可用于進一步的功能分析。
【學(xué)位授予單位】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S641.2

【參考文獻】

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1 韓佳軒;姜晶;;擬南芥、水稻和番茄SW EET/MtN3/saliva基因家族的分析[J];分子植物育種;2015年03期

2 玄元虎;朱毅勇;胡一兵;;SWEET蛋白家族研究進展[J];中國科學(xué):生命科學(xué);2014年07期

3 賀璽強;徐恒戩;趙汝鳳;;番茄遺傳轉(zhuǎn)化影響因素及其應(yīng)用研究進展[J];北方園藝;2013年20期

4 周丹丹;俞嘉寧;;植物細胞中瞬時表達系統(tǒng)的建立及研究進展[J];中國農(nóng)學(xué)通報;2013年24期

5 楊春文;唐寧;李正國;;番茄NAM基因的克隆與遺傳轉(zhuǎn)化[J];熱帶作物學(xué)報;2012年08期

6 趙岑;呂立堂;趙德剛;;花青素調(diào)節(jié)基因VlmybA2對番茄遺傳轉(zhuǎn)化[J];基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué);2012年03期

7 鄒禮平;高和平;鐘亞琴;;八氫番茄紅素脫氫酶基因超表達載體的構(gòu)建及表達鑒定[J];湖北農(nóng)業(yè)科學(xué);2012年02期

8 吳英杰;姜波;張巖;李彥邦;賀琳;王玉成;;農(nóng)桿菌介導(dǎo)的煙草瞬時表達試驗條件優(yōu)化[J];東北林業(yè)大學(xué)學(xué)報;2010年09期

9 高少培;牛向麗;羅笛;常麗娟;喻旭;李欲翔;劉永勝;;利用煙草瞬時表達系統(tǒng)檢測高等植物基因的剪接加工[J];生物化學(xué)與生物物理進展;2010年06期

10 陳雙臣;劉愛榮;王鳳華;王菲;周洲;;農(nóng)桿菌介導(dǎo)的番茄Micro-Tom遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立[J];華北農(nóng)學(xué)報;2010年02期

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1 楊X;無核葡萄胚珠發(fā)育相關(guān)MADS-Box基因的克隆與功能分析[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2012年

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本文編號：1323526