發(fā)布時(shí)間：2020-11-12 23:34

　　 背景隨著高通量測(cè)序技術(shù)的發(fā)展,越來越多的環(huán)狀RNA(circular RNA,circRNA)新分子被發(fā)現(xiàn)。多個(gè)circRNA被報(bào)道在惡性腫瘤的進(jìn)展中發(fā)揮重要作用,然而circRNA在卵巢癌中的研究甚少。本研究對(duì)卵巢癌中的差異circRNA表達(dá)譜及其中circHIPK3的功能和作用機(jī)制進(jìn)行分析。方法本研究利用高通量測(cè)序技術(shù)分析了上皮性卵巢癌組織(epithelial ovarian cancer,EOC)及正常卵巢上皮組織(normal ovarian tissues,NOT)中差異表達(dá)的circRNA表達(dá)譜。隨后根據(jù)表達(dá)豐度高及組間差異大的原則選擇六條circRNA,采用qRT-PCR(quantitative real-time-PCR,qRT-PCR)、RNase實(shí)驗(yàn)及RT-PCR(reverse-transcription PCR,RT-PCR)后的Sanger測(cè)序進(jìn)行驗(yàn)證。而后選擇測(cè)序結(jié)果中表達(dá)豐度最高的circHIPK3行功能研究,合成circHIPK3特異性的siRNA并證明其可有效沉默circHIPK3的表達(dá)后,分別利用劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell小室實(shí)驗(yàn)、CCK8細(xì)胞存活實(shí)驗(yàn)(cell counting-kit 8)及流式細(xì)胞技術(shù)分析上皮性卵巢癌細(xì)胞A2780及SKOV3的遷移、侵襲、增殖及凋亡功能。結(jié)合高通量測(cè)序結(jié)果、生物信息學(xué)分析及基于已有卵巢癌數(shù)據(jù)庫(kù)的生存曲線分析對(duì)circHIPK3的作用機(jī)制進(jìn)行了預(yù)測(cè)。結(jié)果利用高通量測(cè)序,我們共篩選出7333條circRNA,4505條(61.43%)新的circRNA分子被測(cè)序獲得,在上皮性卵巢癌中高表達(dá)的circRNA有2431條,差異低表達(dá)的有3120條。對(duì)選擇的六條circRNA:circHIPK3(circBase編號(hào):hsa_circ_0000284)、circRHOBTB3(hsa_circ_0007444)、circPCMTD1(hsa_circ_0001801)、circSETD3(hsa_circ_0000567)、circATRNL1(hsa_circ_0020093)及hsa_circRNA003397(本研究首次發(fā)現(xiàn),circbase未報(bào)道)進(jìn)行驗(yàn)證。利用RNase實(shí)驗(yàn)及RT-PCR后的Sanger測(cè)序驗(yàn)證了六條circRNA的成環(huán)性,采用qRT-PCR在18例上皮性卵巢癌組織及18例正常卵巢組織中驗(yàn)證了表達(dá),結(jié)果表明六條circRNA均可成環(huán),表達(dá)趨勢(shì)及反向交接口處的堿基序列與高通量測(cè)序結(jié)果一致。沉默circHIPK3后促進(jìn)了卵巢癌細(xì)胞的遷移、侵襲及增殖,抑制了其凋亡。生物信息學(xué)分析預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn),circHIPK3可能通過circHIPK3-miRNA-mRNA的ceRNA(competing endogenous RNA,ceRNA)機(jī)制在卵巢癌中發(fā)揮調(diào)控作用。結(jié)論本研究分析了卵巢癌中的circRNA表達(dá)譜,并進(jìn)一步驗(yàn)證了六條circRNA的表達(dá)及成環(huán)性。另外選擇表達(dá)豐度最高的circHIPK3進(jìn)行功能研究,發(fā)現(xiàn)沉默circHIPK3后促進(jìn)了卵巢癌上皮細(xì)胞的惡性行為。通過生物信息學(xué)分析預(yù)測(cè)circHIPK3可能通過ceRNA機(jī)制在卵巢癌中發(fā)揮調(diào)控功能。因此,我們認(rèn)為circHIPK3是卵巢癌惡性進(jìn)展中重要的調(diào)節(jié)分子。
【學(xué)位單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R737.31
【部分圖文】：

圖 1 上皮性卵巢癌組織以及正常卵巢組織中差異 circRNA 表達(dá)譜分析A：差異表達(dá)的 circRNA 散點(diǎn)圖，紅點(diǎn)表示在癌中高表達(dá)的 circRNA，而綠點(diǎn)表示低表達(dá)的 circRNA，表達(dá)差異倍數(shù)大于兩倍且 FDR < 0.05；B：在上皮性卵巢癌組織及正常卵巢組織中特異性表達(dá)的 circRNA，僅 3414 個(gè) circRNA 在兩組

圖 2 差異表達(dá) circRNA 來源親本基因的 GO 分析紅色部分：生物學(xué)功能；藍(lán)色部分：分子功能；綠色部分：細(xì)胞成分。4. 差異表達(dá) circRNA 親本基因的 pathway 分析進(jìn)一步行 pathway 分析提示親本基因的產(chǎn)物參與到多個(gè)信號(hào)通路中。圖 3列出了排名前 20 的信號(hào)通路，與上皮性卵巢癌相關(guān)通路包括泛素化介導(dǎo)的蛋白

差異表達(dá)circRNA來源親本基因的pathway分析
【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 田佳勛;徐蘭;高巖;張宇華;;卵巢癌風(fēng)險(xiǎn)指數(shù)值在絕經(jīng)前上皮性卵巢癌盆腔轉(zhuǎn)移中診斷價(jià)值研究[J];中國(guó)實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志;2018年12期

2 劉利峰;姜計(jì)芹;;早期上皮性卵巢癌保留生育功能手術(shù)的安全性和臨床療效的研究[J];浙江創(chuàng)傷外科;2018年06期

3 姜亮亮;王晶;;上皮性卵巢癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的診治進(jìn)展[J];實(shí)用腫瘤學(xué)雜志;2018年05期

4 張國(guó)楠;朱熠;黃建鳴;;紫杉醇在上皮性卵巢癌化療中的雙刃劍效應(yīng)與對(duì)策思考[J];中國(guó)實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志;2017年01期

5 夏楊;吳海根;吳瀾;都三平;蘭秋紅;;復(fù)發(fā)性上皮性卵巢癌治療時(shí)機(jī)及治療方案的選擇對(duì)預(yù)后的影響[J];實(shí)用癌癥雜志;2016年12期

6 奚美麗;鹿欣;;上皮性卵巢癌保留生育功能的手術(shù)治療[J];實(shí)用婦產(chǎn)科雜志;2016年11期

7 戴宇;劉凱;姚秀華;;鈣網(wǎng)蛋白在上皮性卵巢癌中的表達(dá)及臨床意義[J];黑龍江醫(yī)學(xué);2017年01期

8 魏旭;張國(guó)楠;;早期上皮性卵巢癌術(shù)后輔助化療及療程對(duì)其預(yù)后的影響[J];腫瘤預(yù)防與治療;2017年02期

9 張炎如;楊大明;;復(fù)發(fā)性上皮性卵巢癌的治療進(jìn)展[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2017年08期

10 李芬琴;尹如鐵;;新輔助化療治療晚期上皮性卵巢癌的研究進(jìn)展[J];實(shí)用婦產(chǎn)科雜志;2017年07期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 滕芳;卵巢癌相關(guān)circRNA的篩選及circHIPK3功能和機(jī)制的初步研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2019年

2 趙靈;化療對(duì)上皮性卵巢癌免疫逃逸相關(guān)分子CD47和PD-L1表達(dá)的影響[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2018年

3 喬谷媛;NF1抑制上皮性卵巢癌惡性進(jìn)展及其機(jī)制的探究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2017年

4 劉晶晶;miR-424-5p負(fù)向調(diào)控CCNE-1抑制上皮性卵巢癌發(fā)生發(fā)展及其作用機(jī)制的研究[D];山東大學(xué);2018年

5 王穩(wěn);尼日菌素對(duì)人上皮性卵巢癌細(xì)胞的抑制作用及其機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2017年

6 龍行濤;長(zhǎng)鏈非編碼RNA-LSINCT5調(diào)控上皮性卵巢癌惡性進(jìn)展及機(jī)制研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2018年

7 李楠;miR-16在上皮性卵巢癌中的表達(dá)及抑制卵巢癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的作用與機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2018年

8 王蕾;HtrA2/Omi在上皮性卵巢癌組織中的表達(dá)及作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[D];青島大學(xué);2016年

9 吳裕中;循環(huán)DNA在原發(fā)性上皮性卵巢癌中的診斷價(jià)值研究[D];浙江大學(xué);2004年

10 徐常恩;趨化因子受體在漿液性上皮性卵巢癌腹腔內(nèi)轉(zhuǎn)移中的作用[D];復(fù)旦大學(xué);2004年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 周沙沙;老年上皮性卵巢癌臨床特點(diǎn)及療效分析[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2019年

2 劉麗萍;上皮性卵巢癌外泌體蛋白標(biāo)志物檢測(cè)的研究[D];西南醫(yī)科大學(xué);2019年

3 邊靜;晚期上皮性卵巢癌腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)中淋巴結(jié)切除的臨床價(jià)值分析[D];鄭州大學(xué);2019年

4 李妍;PD-1和TIM-3在上皮性卵巢癌中的表達(dá)及意義[D];鄭州大學(xué);2019年

5 楊一君;長(zhǎng)鏈非編碼RNA分子UCA1介導(dǎo)上皮性卵巢癌轉(zhuǎn)移的的機(jī)制研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2016年

6 臧星卉;上皮性卵巢癌組織中Nanog、FOXD3 mRNA及蛋白質(zhì)的表達(dá)變化[D];鄭州大學(xué);2018年

7 魚志琪;血清FOLR1在上皮性卵巢癌中的表達(dá)[D];鄭州大學(xué);2018年

8 何靜;艾司奧美拉唑?qū)ι掀ば月殉舶┘?xì)胞紫杉醇化療增敏的實(shí)驗(yàn)研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2018年

9 楊麗娟;107例上皮性卵巢癌的臨床特征及預(yù)后分析[D];揚(yáng)州大學(xué);2018年

10 陳元平;著絲粒蛋白F在上皮性卵巢癌中的臨床意義評(píng)估和功能研究[D];蘇州大學(xué);2018年

本文編號(hào)：2881388