發(fā)布時(shí)間：2020-11-12 16:50

　　 目的:通過采用Western-blot法和RT-PCR法分別檢測永生化人支氣管上皮細(xì)胞(BEP2D)在不同濃度屋塵螨抗原Der p的作用下TGF-β1、Smad2、IL-13和TGF-β1 mRNA、Smad2 mRNA、IL-13 mRNA的表達(dá)變化,并采用細(xì)胞免疫化學(xué)技術(shù)檢測人胚肺成纖維細(xì)胞(HLF)在不同濃度屋塵螨抗原Der p作用下的纖連蛋白(FN)和平滑肌肌動蛋白(α-SMA)的表達(dá)變化,探討支氣管上皮細(xì)胞在哮喘氣道重建中的作用。 方法: (1)培養(yǎng)永生化人支氣管上皮細(xì)胞(BEP2D),根據(jù)加入屋塵螨抗原濃度的不同分為四組:空白對照組、0.2 ug/mL Der p1組、2.0 ug/mL Der p1組和10.0 ug/mL Der p1組,每組均按照不同的作用時(shí)間進(jìn)行培養(yǎng):24 h、48h和72 h,然后收集細(xì)胞,采用Western blot法和RT-PCR法測定BEP2D在不同濃度Der p1、不同作用時(shí)間下的TGF-β1、Smad2、IL-13和TGF-β1 mRNA、Smad2 mRNA、IL-13 mRNA的表達(dá)水平變化。 (2)培養(yǎng)人胚肺成纖維細(xì)胞(HLF),按照屋塵螨抗原Der p濃度的不同分為四組:空白對照組、0.2 ug/mL Der p1組、2.0 ug/mL Der p1組、10.0ug/mL Der p1組和LHC-8*組(LHC-8,為支氣管上皮細(xì)胞培養(yǎng)液,是加入10.0ug/mL Der p1后培養(yǎng)BEP2D 72 h后收集的),每組均按照不同的作用時(shí)間24h、48 h和72 h進(jìn)行培養(yǎng),然后采用細(xì)胞免疫化學(xué)的方法,觀察纖連蛋白(FN)和平滑肌肌動蛋白(α-SMA)的表達(dá)水平變化。 (3)統(tǒng)計(jì)處理用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件,所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((?)±s)表示,樣本間均數(shù)的比較采用t檢驗(yàn),變量間的關(guān)系采用Pearson直線相關(guān)分析,P＜0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果: (1)永生化人支氣管上皮細(xì)胞系(BEP2D)在0.2 ug/mL Der p1組中經(jīng)過24 h、48 h、72 h的培養(yǎng),根據(jù)Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果和RT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果,TGF-β1、Smad2、IL-13蛋白的表達(dá)量和相應(yīng)mRNA的表達(dá)水平與空白對照相比沒有明顯增加;在2.0 ug/mL濃度Der p1作用時(shí),各時(shí)間點(diǎn)的TGF-β1、Smad2、IL-13蛋白的表達(dá)量和相應(yīng)mRNA的表達(dá)水平均較0.2ug/mL Der p1相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)水平明顯上升,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);10 ug/mL濃度Der p1作用時(shí),各時(shí)間點(diǎn)上述蛋白和相應(yīng)mRNA的表達(dá)水平較2 ug/mL相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)水平有增加明顯,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 (2)人胚肺成纖維細(xì)胞(HLF)在空白對照組、0.2 ug/mL Der p1組、2.0 ug/mL Der p1組和10.0 ug/mL Der p1組中,在3個(gè)不同時(shí)間的作用下,纖連蛋白(FN)和肌動蛋白(α-SMA)的表達(dá)均呈陰性或弱陽性,無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差別。在LHC-8*組中成纖維細(xì)胞在24 h、48 h、72 h培養(yǎng)下,纖連蛋白(FN)和平滑肌肌動蛋白(α-SMA)的表達(dá)隨著時(shí)間增加呈上升趨勢,各時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 結(jié)論: 屋塵螨抗原不能直接作用于成纖維細(xì)胞使其表達(dá)發(fā)生改變,但可通過作用于支氣管上皮細(xì)胞,激發(fā)其合成釋放的TGF-β1、Smad2、IL-13激增,導(dǎo)致氣道炎癥增加。支氣管上皮細(xì)胞通過表達(dá)這些細(xì)胞因子的增加作用于肺成纖維細(xì)胞,引起纖連蛋白(FN)和平滑肌肌動蛋白(α-SMA)表達(dá)上升,在基底膜纖維化中發(fā)揮作用,從而參與哮喘的氣道重建過程。
【學(xué)位單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2008
【中圖分類】：R562.25
【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
符號說明
前言
資料與方法
結(jié)果
討論
結(jié)論
附圖
參考文獻(xiàn)
致謝
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1 許淑云;支氣管哮喘氣道重構(gòu)發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué).呼吸系統(tǒng)分冊;2002年05期

2 董常生;閆永平;賀俊平;赫曉燕;任玉紅;白瑞;;轉(zhuǎn)化生長因子-β1及其信號傳導(dǎo)分子Smad2與Smad4在羊駝睪丸的表達(dá)[J];解剖學(xué)報(bào);2007年04期

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本文編號：2880989