發(fā)布時間：2024-07-06 22:53

　　背景與目的:特發(fā)性肺纖維化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是一種常見的呼吸內(nèi)科疾病,通常表現(xiàn)為肺功能下降,漸進(jìn)性勞力性呼吸困難,咳嗽少痰,發(fā)紺,出現(xiàn)胸痛及杵狀指,病情進(jìn)一步發(fā)展較為嚴(yán)重的患者最終可能會死于呼吸衰竭,通常IPF患者疾病診斷后的生存時間均不足5年。近年來的研究指出IPF疾病的發(fā)生和發(fā)展具有流行病學(xué)的部分特征,存在家族易感性,與基因突變相關(guān)等,目前大多數(shù)的機(jī)制研究都表明IPF的發(fā)生及進(jìn)展過程是上皮細(xì)胞損傷和異常損傷修復(fù)途徑的激活所導(dǎo)致的,這種損傷后持續(xù)的上皮異常修復(fù)使得上皮細(xì)胞不斷地向間質(zhì)細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)變,另外在細(xì)胞的轉(zhuǎn)變過程中也會分泌其他生長因子,例如轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)、血小板衍生細(xì)胞因子(platelet-de-rived growth factor,PDGF)和血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)等,這些作用于多條信號通路的細(xì)胞因子的增加使得信號通路也過度激活,造成肌成纖維細(xì)胞在間質(zhì)中過度沉積,加速疾病...

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
中英文縮略詞表
第1章 前言
    1.1 特發(fā)性肺纖維化概述
    1.2 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞
    1.3 Sirt6 基因
    1.4 研究問題和目的
第2章 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 實驗儀器
        2.1.3 其他
        2.1.4 實驗試劑
    2.2 主要試劑的配制
        2.2.1 10%水合氯醛溶液的配制
        2.2.2 10%BMSCs完全培養(yǎng)基
        2.2.3 10%DMSO BMSCs凍存液
        2.2.4 1×電泳液
        2.2.5 1×轉(zhuǎn)膜緩沖液
        2.2.6 1×TBST緩沖液
        2.2.7 5%脫脂奶粉封閉液
        2.2.8 細(xì)胞蛋白提取裂解液
        2.2.9 10%SDS溶液
        2.2.10 10%過硫酸銨
        2.2.11 SDS-PAGE的凝膠配制
    2.3 實驗方法
        2.3.1 IPF與 SIRT6 之間的聯(lián)系
        2.3.2 BMSCs的體外分離培養(yǎng)和鑒定
        2.3.3 SIRT6 慢病毒侵染大鼠BMSCs
        2.3.4 Western Blot法檢測慢病毒轉(zhuǎn)染BMSCs后 SIRT6 蛋白表達(dá)
        2.3.5 qPCR檢測慢病毒轉(zhuǎn)染BMSCs后 SIRT6 mRNA表達(dá)
        2.3.6 TGF-β1 誘導(dǎo)BMSCs肺纖維化預(yù)實驗
    2.4 統(tǒng)計學(xué)方法
第3章 結(jié)果
    3.1 基于GEO數(shù)據(jù)庫的SIRT6 變化規(guī)律
    3.2 BMSCs的形態(tài)觀察及鑒定
    3.3 慢病毒侵染細(xì)胞的最佳MOI值
    3.4 LV-GFP和 LV-SIRT6 侵染BMSCs
    3.5 Western-Blot檢測轉(zhuǎn)染后BMSCs中 SIRT6 的表達(dá)
    3.6 QPCR檢測慢病毒轉(zhuǎn)染后SIRT6 基因的表達(dá)
    3.7 QPCR檢測不同濃度TGF-β1 刺激BMSC后 SIRT6 基因及纖維化基因表達(dá)
    3.8 Western-Blot檢測TGF-β1 刺激LV-GFP、LV-SIRT6 及空白處理control組三組的相關(guān)纖維化因子的表達(dá)
    3.9 QPCR檢測TGF-β1 刺激LV-GFP、LV-SIRT6 及空白處理control組三組的相關(guān)纖維化因子的表達(dá)
    3.10 對差異基因進(jìn)行富集分析
第4章 討論
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    References



本文編號：4002756