發(fā)布時間：2020-10-22 15:22

　　 多不飽和脂肪酸作為機(jī)體不可或缺的必需脂肪酸,參與許多生理活動的調(diào)控,其廣泛的生物學(xué)功能成為研究熱點(diǎn)。大量證據(jù)表明,多不飽和脂肪酸不僅能夠調(diào)節(jié)脂類代謝、提高機(jī)體免疫功能、預(yù)防心血管疾病,同時還能夠促進(jìn)機(jī)體生長發(fā)育。隨著人們生活水平的不斷提高,飲食習(xí)慣越來越趨向于西方化的高脂膳食,大量臨床研究表明,過量攝入膳食脂肪在引發(fā)肥胖以及脂代謝紊亂的同時,對女性生殖健康造成影響。另外,本課題組前期的研究發(fā)現(xiàn)補(bǔ)充多不飽和脂肪酸的高脂飲食對雄性小鼠精子生成與精子活力有顯著促進(jìn)作用,然而,對于補(bǔ)充ω-3多不飽和脂肪酸的高脂飲食對雌性小鼠卵巢功能有何影響仍不明確。因此,我們以C57BL/6J雌鼠為動物模型進(jìn)行了以下研究:目的:研究補(bǔ)充ω-3多不飽和脂肪酸的高脂飲食對小鼠卵巢功能的影響。方法:8周齡雌性C57BL/6J小鼠隨機(jī)分為對照組(CON)、高脂組(HFD)和ω-3 PUFA組(HFFO),每組12只,對照組喂食基礎(chǔ)飼料,高脂組喂食60%高脂飼料,ω-3 PUFA組喂食5%魚油加60%高脂飼料。(1)每周記錄小鼠體重;(2)通過陰道脫落細(xì)胞檢查來監(jiān)測小鼠動情周期;(3)造模結(jié)束前一周檢測小鼠葡萄糖耐受情況;(4)小鼠生殖實(shí)驗(yàn):將飲食干預(yù)28周的雌鼠與性成熟的雄性C57BL/6J小鼠以1:1的比例進(jìn)行交配,觀察小鼠生育情況。(5)利用ELISA試劑盒檢測血清中卵泡刺激素、黃體生成素、雌激素和睪酮等激素水平變化;(6)采用Real-time PCR和Western blot以及免疫組化方法檢測相關(guān)激素受體基因及蛋白的表達(dá)變化;(7)利用病理組織染色觀察小鼠卵巢組織的形態(tài)學(xué)變化、卵泡發(fā)育情況,并進(jìn)行卵泡計數(shù);(8)利用TUNEL染色檢測卵巢組織卵泡凋亡。(9)利用16S-rDNA高通量測序技術(shù)分析腸道微生物組成及其變化。結(jié)果:(1)體重結(jié)果:飲食干預(yù)5周后,HFD組小鼠體重顯著高于基礎(chǔ)飲食組,飲食干預(yù)8周后,HFFO組小鼠體重顯著高于基礎(chǔ)飲食組;飲食干預(yù)18周后,HFFO組小鼠體重顯著低于HFD組。(2)糖耐量比較:HFD和HFFO組小鼠的空腹血糖顯著高于CON組,而HFFO組的空腹血糖水平明顯低于HFD組;與CON組相比,HFD和HFFO組均出現(xiàn)了葡萄糖不耐受情況,且AUC顯著升高,空腹血清胰島素水平也顯著升高。(3)動情周期情況:與CON組相比,HFD組小鼠動情前期減少,補(bǔ)充FO增加了高脂飲食誘導(dǎo)的動情前期數(shù),且相同時間內(nèi)周期循環(huán)數(shù)顯著高于HFD組。(4)生殖情況:HFD組小鼠懷孕率和產(chǎn)仔數(shù)顯著低于CON組和HFFO組。(5)生殖激素水平比較:高脂飲食干預(yù)下,小鼠血清中E_2水平顯著降低,FSH、LH、睪酮水平顯著升高;與HFD組相比,HFFO組FSH、LH水平顯著降低。(6)基因表達(dá):高脂飲食干預(yù)下,小鼠卵巢組織中FSHR和LHR蛋白表達(dá)顯著降低,補(bǔ)充FO組與CON組無顯著差異;與HFD組相比,HFFO組Lhr mRNA水平顯著升高。(7)組織形態(tài)變化:CON組卵巢組織形態(tài)正常,細(xì)胞核清晰可見,周圍顆粒細(xì)胞排列整齊致密;高脂飲食干預(yù)下,小鼠卵巢中顆粒細(xì)胞排列松散、紊亂,細(xì)胞層數(shù)減少,間質(zhì)增生,閉鎖卵泡顯著增多;相較于HFD組,HFFO組閉鎖卵泡減少。(8)TUNEL結(jié)果:高脂飲食干預(yù)下,小鼠卵巢組織卵泡凋亡增加,補(bǔ)充FO緩解了卵泡凋亡。(9)高脂飲食及補(bǔ)充FO改變了小鼠腸道微生物組成,并且補(bǔ)充FO顯著降低了疣微菌門的相對豐富度。結(jié)論:高脂飲食導(dǎo)致小鼠肥胖,FSH、LH和睪酮水平升高以及雌激素水平降低,伴隨動情周期的紊亂,影響了小鼠卵巢的功能,致使小鼠不孕;補(bǔ)充ω-3 PUFAs對高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖有改善作用,影響性激素水平,改善動情周期紊亂程度,增加高脂飲食干預(yù)下小鼠的懷孕率,改善了高脂飲食對卵巢功能的影響。補(bǔ)充ω-3 PUFAs改變了高脂飲食干預(yù)下小鼠的腸道微生物組成。
【學(xué)位單位】：華南理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R151
【部分圖文】：

圖 2.2-1 小鼠陰道脫落細(xì)胞涂片驗(yàn)7 周后，于實(shí)驗(yàn)前一天晚上 20:00 至次日早上 8:00，移驗(yàn)開始前先稱量每組小鼠體重并記錄，并從尾巴取血 體重劑量灌胃 20%葡萄糖注射液，分別于 15、30、6值并記錄。實(shí)驗(yàn)8 周后，觀察小鼠所處動情周期，當(dāng)小鼠處于動情前期常的雄鼠，按 1：1 進(jìn)行合籠，并于次日早上 8:00 檢測道栓時，將雄鼠移出，若無陰道栓則繼續(xù)合籠，并記錄鼠懷孕則為可孕母鼠，不再繼續(xù)合籠；若連續(xù) 20 天合三次，計算交配率及懷孕率。

圖 3-1 不同飲食干預(yù)對小鼠體重的影響a.各組小鼠體重增長曲線，橫坐標(biāo)為干預(yù)時間周數(shù)，縱坐標(biāo)為小鼠體質(zhì)量數(shù)，相比*p﹤0.05，** p﹤0.01，*** p﹤0.001，**** p﹤0.0001；HFD 組與 HFFO#p﹤0.05，## p﹤0.01。b.造模結(jié)束各組小鼠體重增加量，縱坐標(biāo)為體重增加量間相比較** p﹤0.01，*** p﹤0.001，**** p﹤0.0001。所有數(shù)值用 X±S.E.M 表3.2.2 ω-3 PUFAs 對高脂飲食誘導(dǎo)小鼠糖耐量的影響為了評估飲食干預(yù)后，小鼠對葡萄糖的調(diào)節(jié)能力，我們對不同飲食條件下耐量情況進(jìn)行了檢測，發(fā)現(xiàn) HFD 組與 HFFO 組小鼠的空腹血糖均顯著高于 CHFFO 組小鼠的空腹血糖顯著低于 HFD 組（圖 3-2a），說明 ω-3 PUFAs 能在一加空腹?fàn)顟B(tài)下機(jī)體對葡糖糖的調(diào)節(jié)能力；有趣的是，我們發(fā)現(xiàn)在給予葡萄糖 HFFO 組小鼠的血糖水平顯著高于 HFD 組，但在 60min 時恢復(fù)到與 HFD 組相負(fù)荷 30min 以后 FO 才對葡萄糖的調(diào)節(jié)作用顯著，然而在 120min 后這兩組小

糖的調(diào)控能力越弱[126]，結(jié)果顯示，HFD和HFFO組AUC值均顯著高于CON組（圖3-2c），說明高脂飲食導(dǎo)致小鼠對葡萄糖負(fù)荷下血糖的調(diào)節(jié)能力較弱，而且補(bǔ)充 FO 沒有明顯改善糖耐量異常，可能是 ω-3 PUFAs 的代謝產(chǎn)物使得糖脂代謝的過程受到了抑制而引起機(jī)體糖代謝異常，具體機(jī)制尚不清楚，有待進(jìn)一步的研究。另外，我們檢測了小鼠空腹血清胰島素水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，HFD 組和 HFFO 組小鼠血清中胰島素水平顯著高于 CON 組，對胰島素敏感性降低，HFFO 組小鼠血清中胰島素水平相比 HFD 組稍有改善
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2851769