發(fā)布時(shí)間：2020-03-21 19:17

【摘要】：目的:通過高糖誘導(dǎo)損傷RSC96細(xì)胞,建立糖尿病周圍神經(jīng)病變的細(xì)胞模型,采用中藥葛根的有效成分葛根素進(jìn)行干預(yù),觀察葛根素治療前后凋亡、自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)情況,旨在探討葛根素對高糖誘導(dǎo)的RSC96細(xì)胞凋亡和自噬的影響及其作用機(jī)制。方法:實(shí)驗(yàn)用RSC96細(xì)胞株購自ATCC細(xì)胞庫,建立體外RSC96細(xì)胞高糖損傷模型,采用蛋白質(zhì)免疫印跡(Western Blot,WB)方法檢測Cleaved Caspase-3蛋白表達(dá)情況判定造模成功后,確定造模用葡萄糖濃度為400 mmol.L~(-1)。采用CCK-8法確定葛根素干預(yù)濃度為0.5mmol.L~(-1),之后隨機(jī)分為空白對照組、高糖組、葛根素干預(yù)組。其中空白對照組不添加任何藥物;高糖組:正常培養(yǎng)48h后,加400 mmol.L~(-1)高糖孵育1 h;葛根素干預(yù)組:正常培養(yǎng)48h后,用0.5mmol.L~(-1)的葛根素預(yù)處理RSC96細(xì)胞15min,隨后加400 mmol.L~(-1)的高糖孵育1 h。采用CCK-8法觀察細(xì)胞存活率;免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測Beclin-1蛋白的表達(dá);WB檢測Cleaved Caspase-3、LC3-II、p62、Beclin-1蛋白的表達(dá)。結(jié)果:與高糖組相比,葛根素預(yù)處理可顯著提高高糖誘導(dǎo)后的RSC96細(xì)胞存活率(P0.05),抑制Cleaved Caspase-3、LC3-II和Beclin-1蛋白的表達(dá)(P0.05),增強(qiáng)p62蛋白的表達(dá)(P0.05)。具體如下:1.400 mmol.L~(-1)高糖處理6h導(dǎo)致RSC96細(xì)胞損傷。用400 mmol.L~(-1)高糖處理0、3、6、9、12、24h;WB方法檢測各組Cleaved Caspase-3蛋白的表達(dá),結(jié)果顯示400 mmol.L~(-1)葡萄糖處理6h時(shí),RSC96細(xì)胞中Cleaved Caspase-3蛋白的表達(dá)顯著提高(P0.01)。2.葛根素預(yù)處理可提高高糖誘導(dǎo)的RSC96細(xì)胞存活率,經(jīng)(0.1-1)mmol.L~(-1)濃度范圍的葛根素處理15min,葛根素干預(yù)濃度為0.5 mmol.L~(-1)時(shí),RSC96細(xì)胞存活率高于對照組(P0.05),隨著葛根素濃度的增加,細(xì)胞的存活率隨之下降。3.與對照組相比,葛根素干預(yù)組可降低Cleaved Caspase-3蛋白表達(dá),經(jīng)高糖處理后,Cleaved Caspase-3蛋白表達(dá)顯著增加(P0.01);用0.5 mmol.L~(-1)葛根素預(yù)孵育15min后,Cleaved Caspase-3蛋白的表達(dá)量明顯下降(P0.05)。4.與對照組相比,400 mmol.L~(-1)高糖處理1h可誘導(dǎo)RSC96細(xì)胞p62蛋白的表達(dá)明顯降低(P0.05);因此,后續(xù)檢測自噬相關(guān)蛋白時(shí),我們選擇用400mmol.L~(-1)高糖處理1h。5.葛根素抑制高糖誘導(dǎo)的RSC96細(xì)胞自噬的水平,葛根素干預(yù)組相較于高糖組,LC3-II蛋白表達(dá)下降(P0.05),p62蛋白表達(dá)升高(P0.05);Beclin-1蛋白的表達(dá)在免疫細(xì)胞化學(xué)法和WB法趨勢一致。免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示Beclin-1蛋白在高糖組中呈中陽性,在葛根素干預(yù)組中呈弱陽性;WB結(jié)果表明,葛根素干預(yù)組較高糖組可顯著抑制Beclin-1蛋白的表達(dá)(P0.05)。結(jié)論:葛根素預(yù)處理可顯著改善高糖誘導(dǎo)的RSC96細(xì)胞凋亡。葛根素對高糖誘導(dǎo)的RSC96細(xì)胞自噬的保護(hù)作用可能與其抑制LC3-II和Beclin-1蛋白表達(dá)、提高p62蛋白表達(dá)有關(guān)。
【圖文】：

圖 1 不同濃度 HG 處理 24h，對 Cleaved Caspase-3 蛋白表達(dá)的影響Fig. 1 Effects of 24 h treatment with different concentrations of HG on Cleaved Caspase-3protein (#P<0.05vs control)圖 2-1 400mmol.L-1HG 處理不同時(shí)間，RSC96 細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化（200×）

圖 1 不同濃度 HG 處理 24h，對 Cleaved Caspase-3 蛋白表達(dá)的影響Fig. 1 Effects of 24 h treatment with different concentrations of HG on Cleaved Caspase-3protein (#P<0.05vs control)
【學(xué)位授予單位】：湖北民族大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

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10 張少瀚;康洋;顧志鵬;吳鈞;;具有抗氧化作用的聚多巴胺-葛根素納米粒保護(hù)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞[A];中國化學(xué)會2017全國高分子學(xué)術(shù)論文報(bào)告會摘要集——主題G：藥物控釋載體高分子[C];2017年

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5 張生林；陳蕓；張毅;葛根素可治老年VBI[N];中國醫(yī)藥報(bào);2005年

6 陶春祥;葛根素的臨床應(yīng)用[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2002年

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8 程書權(quán);葛根素的臨床應(yīng)用[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2003年

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3 郭東艷;葛根素衍生物納米凍干粉針的藥學(xué)研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2004年

4 苗維納;葛根素抗快速性心律失常的細(xì)胞、分子電生理機(jī)制研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2000年

5 婁海燕;腦缺血再灌注損傷的炎癥分子生物學(xué)機(jī)制及羥乙葛根素的保護(hù)作用[D];山東大學(xué);2005年

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9 張三印;葛根素誘導(dǎo)血管生成的作用及分子機(jī)制研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2006年

10 劉西京;葛根素衍生物4ac納米粒的制備和體內(nèi)外評價(jià)[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2006年

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8 王s

本文編號：2593810