發(fā)布時(shí)間：2020-07-05 21:31

【摘要】：目的:探討蠣昆一號(hào)抑制人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-116增殖及其對(duì)5-Fu誘導(dǎo)小鼠骨髓抑制損傷保護(hù)作用與作用機(jī)制。方法:(1)采用不同濃度(0.25、0.5、1、2、4mg/ml)蠣昆一號(hào)處理人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-116,CCK8法檢測(cè)HCT-116細(xì)胞增殖情況,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)HCT-116細(xì)胞凋亡率,Western blot檢測(cè)HCT--116凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bad、Bcl-2、Akt、caspase3表達(dá);(2)60只純系雄性BALB/c小鼠,隨機(jī)分為正常對(duì)照組(Control)、5-Fu組(Model)、重組人粒細(xì)胞集落刺激因子組(rhG-CSF)、蠣昆一號(hào)制劑低、中、高劑量組(133、200、300mg/kg)。腹腔注射5-Fu(250mg/kg)復(fù)制小鼠骨髓抑制模型,對(duì)照組注射等容積生理鹽水;注射后第2天,灌胃給予不同劑量的蠣昆一號(hào),正常組和模型組灌胃給予等容積的生理鹽水,陽性對(duì)照組腹腔注射rhG-CSF(250μg/kg),連續(xù)給藥7天。每天觀察小鼠的一般狀況(毛發(fā),飲食,活動(dòng),是否腹瀉等),在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),眼眶采血,骨髓涂片,頸椎脫臼法處死小鼠,解剖取脾臟凍存于-80℃冰箱,用于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。采用全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀,計(jì)數(shù)外周血細(xì)胞(WBC、PLT、LY、MO%);ELISA法檢測(cè)血清TNF-α、IL-2的含量;Western blot法檢測(cè)脾臟組織JAK2、STAT5、p-JAK2、p-STAT5蛋白表達(dá)。結(jié)果:(1)不同濃度蠣昆一號(hào)處理HCT-116細(xì)胞48h,各濃度顯著抑制結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-116增殖(P0.01),1mg/ml蠣昆一號(hào)處理不同小時(shí),24h時(shí)抑制其增殖(P0.05),時(shí)間延長(zhǎng),顯著抑制其增殖(P0.01),2mg/ml、4mg/ml促進(jìn)其凋亡(P0.05),蠣昆一號(hào)顯著性上調(diào)Bax、Bad、caspase-3蛋白的表達(dá)(P0.05),2mg/ml、4mg/ml顯著下調(diào)Bcl-2、Akt、p-Akt蛋白的表達(dá)(P0.01);(2)與正常對(duì)照組比較,模型組小鼠體重顯著性下降(P0.05),且均出現(xiàn)腹瀉癥狀(P0.05),骨髓涂片結(jié)果顯示,模型組小鼠骨髓增生極度低下,外周血白細(xì)胞、血小板、淋巴細(xì)胞的數(shù)量顯著性減少(P0.05),單核細(xì)胞比率顯著性升高(P0.05),TNF-α的含量顯著性升高(P0.05),IL-2的含量顯著性下降(P0.05),脾臟組織中p-JAK2、p-STST5蛋白表達(dá)明顯下降(P0.05);與模型組比較,蠣昆一號(hào)低劑量組體重減輕癥狀明顯改善(P0.05),能夠顯著改善5-Fu引起的腹瀉癥狀,骨髓涂片結(jié)果顯示,給予不同劑量的蠣昆一號(hào)后,增生程度有所改善,血常規(guī)檢測(cè)結(jié)果顯示,蠣昆一號(hào)低劑量組小鼠白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞均有不同程度的升高(P0.05),單核細(xì)胞比率降低(P0.05),中、高劑量顯著升高白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和血小板數(shù)(P0.01),降低單核細(xì)胞比率(P0.01),蠣昆一號(hào)各劑量組小鼠血清TNF-α的水平顯著下降(P0.01),中、高劑量組IL-2的水平升高(P0.05),Western blot結(jié)果顯示,蠣昆一號(hào)中、高劑量組能夠顯著上調(diào)p-JAK2、p-STAT5的表達(dá)(P0.05)。結(jié)論:(1)蠣昆一號(hào)能抑制結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-116細(xì)胞增殖,可能是通過上調(diào)Bax、Bad、cleaved caspase-3蛋白,下調(diào)Bcl-2、Akt、p-Akt蛋白,促進(jìn)細(xì)胞凋亡,發(fā)揮抗腫瘤作用(2)蠣昆一號(hào)能夠緩解5-Fu所致小鼠的腹瀉癥狀,減輕5-Fu所致骨髓抑制損傷,其機(jī)制可能是通過上調(diào)p-JAK2、p-STAT5蛋白的表達(dá),減輕TNF-α的釋放,增加IL-2的含量來實(shí)現(xiàn)的。
【學(xué)位授予單位】：貴州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R285.5
【圖文】：

圖 1 蠣昆一號(hào)對(duì) HCT-116 細(xì)胞活力的影響（ x±S，n=5Fig1 Li kun No.1 inhibited cell viablitity( x±S，n=5）抑制結(jié)腸癌細(xì)胞 HCT-116 增殖。用 0.25，0.5，1，2 或 4mg/m

圖 2 蠣昆一號(hào)對(duì) HCT-116 細(xì)胞活力的影響（ x±S，n=Fig2 Li kun No.1 inhibited cell viablitity( x±S，n=5）抑制結(jié)腸癌細(xì)胞 HCT-116 增殖。1mg/ml 干預(yù)細(xì)胞 0 至 96h，＜0.01

圖 3 蠣昆一號(hào)對(duì) HCT-116 細(xì)胞凋亡的影響（ x±S，n=5）Fig3 Li kun No.1 induced apoptosis ( x±S，n=5）：蠣昆一號(hào)誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞 HCT-116 凋亡，與對(duì)照組比較：*P＜0.053 蠣昆一號(hào)對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞 HCT-116Bax、Bad、Bcl-2 的影響

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本文編號(hào)：2743150