發(fā)布時(shí)間：2018-01-05 23:16

  本文關(guān)鍵詞：高鹽飲食對(duì)小鼠腸道免疫平衡和TNBS結(jié)腸炎影響的研究　出處：《浙江大學(xué)》2017年博士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】：研究背景和目的鹽的主要化學(xué)成份是氯化鈉(sodium chloride,NaCl),鹽給人體提供必須的Na+和Cl-離子,對(duì)于維持機(jī)體的健康必不可少。但是,目前大部分人的日均鹽攝入量都明顯超過(guò)了其生理需求量。高鹽攝入對(duì)健康的危害得到了社會(huì)的廣泛關(guān)注,目前已經(jīng)明確過(guò)量的鹽攝入會(huì)增加心血管相關(guān)疾病的風(fēng)險(xiǎn),也有研究提示高鹽攝入對(duì)腎臟、骨骼系統(tǒng)、和代謝功能等都會(huì)造成一定的影響。非常有趣的是,越來(lái)越多的研究提示攝入過(guò)量的鹽會(huì)影響機(jī)體的免疫系統(tǒng),甚至可能增加自身免疫性疾病的患病風(fēng)險(xiǎn)。腸道是消化系統(tǒng)的重要組成部分,在對(duì)食物的消化和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收中發(fā)揮著關(guān)鍵的作用;同時(shí),腸道也是一個(gè)非常重要的免疫器官,它在機(jī)體的局部和全身的免疫中都發(fā)揮著舉足輕重的作用。腸道的固有層含有豐富的輔助性 T 細(xì)胞 17(T helper cell 17,Th17)和調(diào)節(jié)性 T 細(xì)胞(regulatory T cells,Treg),Th17通常促進(jìn)炎癥發(fā)生甚至增加自身免疫性疾病的風(fēng)險(xiǎn),然而Treg起到抑制炎癥和降低自身免疫性疾病發(fā)生的作用,Th17/Treg平衡對(duì)于維持腸道的正常免疫發(fā)揮關(guān)鍵作用。我們攝入的食物在通過(guò)腸道過(guò)程中,所含的抗原和其它各類(lèi)物質(zhì)都可以直接或間接的和腸道的淋巴細(xì)胞接觸,而且越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn)不同的飲食習(xí)慣會(huì)改變腸道的免疫環(huán)境。然而,長(zhǎng)期攝入含鹽量高的食物是否會(huì)改變腸道的免疫平衡還不清楚。炎癥性腸病(inflammatory bowel diseases,IBD)是一種慢性復(fù)發(fā)性的腸道自身免疫性疾病,全球每年因IBD死亡的病例非常多,IBD給人類(lèi)健康帶來(lái)巨大威脅同時(shí)給社會(huì)帶來(lái)很大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。動(dòng)物腸炎模型是目前用于研究IBD發(fā)病機(jī)制的主要工具,比如用三硝基苯磺酸(trinitrobenzenesulfonic acid,TNBS)誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎是研究IBD發(fā)病機(jī)制的經(jīng)典模型。根據(jù)以往的報(bào)道,免疫因素是IBD發(fā)病過(guò)程的一個(gè)重要調(diào)控因素,比如Th17細(xì)胞和其相關(guān)細(xì)胞因子在IBD的發(fā)病過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。近些年來(lái),世界各國(guó)的IBD的發(fā)病率逐年增高,不良的飲食習(xí)慣和西方飲食習(xí)慣的流行可能與IBD的高發(fā)病率相關(guān)。根據(jù)報(bào)道,攝入過(guò)多的脂肪和肉類(lèi)會(huì)增加IBD的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn),然而增加膳食纖維的攝入和多吃蔬菜水果卻可以明顯的降低IBD的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。但是,長(zhǎng)期攝入含鹽量高的食物是否會(huì)影響IBD的發(fā)病率還不清楚。綜上所述,目前大部分人的日均鹽攝入量都明顯超過(guò)了其生理需求量,高鹽飲食對(duì)免疫系統(tǒng)的影響已經(jīng)有研究報(bào)道,腸道不僅是重要的消化器官同時(shí)也是重要的免疫器官,IBD是一種主要累及腸道的自身免疫性疾病,但是高鹽飲食是否會(huì)影響腸道的免疫平衡甚至影響IBD的發(fā)病還不甚清楚。所以,本研究通過(guò)建立高鹽飲食(high salt diet,HSD)和普通飲食(normal salt diet,ND)的小鼠模型來(lái)探究過(guò)量的鹽攝入對(duì)腸道免疫的影響,并結(jié)合TNBS誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎模型探究過(guò)量鹽攝入和IBD之間的關(guān)聯(lián)。第一部分:高鹽飲食影響小鼠腸道Th17/Treg平衡目的:通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)來(lái)探究過(guò)量鹽攝入對(duì)小鼠腸道免疫環(huán)境的影響。方法:1)用不同鹽濃度的飼料和飲水,建立HSD和ND兩種小鼠模型。2)用密度梯度離心和機(jī)械研磨等方法分離出腸道相關(guān)淋巴組織內(nèi)的淋巴細(xì)胞。3)用流式細(xì)胞技術(shù)、酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)、液相懸浮芯片技術(shù)、熒光定量PCR和細(xì)胞功能檢測(cè)實(shí)驗(yàn)等比較HS D和N D兩種小鼠模型中腸道相關(guān)淋巴組織的免疫特征差異。結(jié)果:1)HSD增加小鼠腸道固有層中產(chǎn)IL-17A淋巴細(xì)胞的百分率。2)小鼠腸道固有層中產(chǎn)IL-17A細(xì)胞主要是Th17細(xì)胞,并且HSD增加小鼠腸道固有層的Th17細(xì)胞。3)HSD增加小鼠小腸和結(jié)腸固有層中Th17細(xì)胞的反應(yīng)性,并且HSD顯著促進(jìn)腸道固有層Th17相關(guān)細(xì)胞因子和轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)。但是HSD對(duì)腸道固有層以外的其它腸道相關(guān)淋巴器官的Th17反應(yīng)性沒(méi)有顯著影響。而且,HSD不影響CD4+TCRβ+細(xì)胞、CD8 T細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞中的IFN-γ表達(dá)。4)HSD不影響腸道固有層Treg細(xì)胞的數(shù)量,但是會(huì)顯著降低Treg的IIL-10分泌水平,會(huì)降低Treg對(duì)T細(xì)胞增殖的抑制能力。第二部分:高鹽飲食加重TNBS誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎目的:評(píng)價(jià)過(guò)量鹽攝入對(duì)TNBS誘導(dǎo)小鼠結(jié)腸炎的影響,以此來(lái)探究過(guò)量鹽攝入是否為IBD發(fā)病的一個(gè)潛在危險(xiǎn)因素。方法:1)用鹽濃度不同的飼料和飲水,建立HSD和ND兩種小鼠模型。在HSD和ND模型的基礎(chǔ)上給予TNBS誘導(dǎo)小鼠結(jié)腸炎,建立特殊飲食與TNBS誘導(dǎo)結(jié)腸炎的聯(lián)合模型。2)通過(guò)監(jiān)測(cè)小鼠體重、統(tǒng)計(jì)死亡率、結(jié)腸炎評(píng)分和腸道病理等方法比較HSD和ND小鼠TNBS結(jié)腸炎嚴(yán)重程度的差異。分離小鼠結(jié)腸固有層淋巴細(xì)胞進(jìn)行流式檢測(cè),并用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)和熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)結(jié)腸Th17相關(guān)細(xì)胞因子和膠原纖維的表達(dá)水平。并且通過(guò)體外細(xì)胞共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)IL-17A在淋巴細(xì)胞對(duì)腸道上皮細(xì)胞殺傷中發(fā)揮的作用。結(jié)果:1)HSD加重TNBS誘導(dǎo)的小鼠急性和慢性結(jié)腸炎。2)HSD增強(qiáng)TNBS結(jié)腸炎模型中結(jié)腸固有層的Th17細(xì)胞反應(yīng)性,增加結(jié)腸組織中Th17相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)水平。3)體外細(xì)胞共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),IL-17A可以加強(qiáng)淋巴細(xì)胞對(duì)腸道上皮細(xì)胞的殺傷作用。結(jié)論:本研究發(fā)現(xiàn)飲食中攝入過(guò)量的鹽可以破壞小鼠腸道Th17/Treg平衡,表現(xiàn)為增加腸道固有層Th17細(xì)胞的反應(yīng)性,降低Treg細(xì)胞的免疫抑制功能。并且,過(guò)量的鹽攝入會(huì)加重TNBS誘導(dǎo)的急性和慢性的小鼠結(jié)腸炎,這個(gè)過(guò)程和Th17細(xì)胞及其相關(guān)細(xì)胞因子有明顯的關(guān)聯(lián)。這些結(jié)果提示,高鹽飲食習(xí)慣會(huì)破壞腸道的免疫平衡狀態(tài),可能增加IBD的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。減少日常飲食中鹽的攝入量對(duì)于IBD的預(yù)防和治療可能有重要的臨床意義。
[Abstract]:The main chemical components of the study background and target salt are sodium chloride ( sodium chloride , NaCl ) , which provides the necessary Na + and Cl - ions to the human body , which is essential for maintaining the health of the organism . The effects of excessive salt intake on the intestinal immune environment of mice were studied by means of flow cytometry , enzyme linked immunosorbent assay , liquid phase suspension chip technique , fluorescence quantitative PCR and cell function test . In vitro cell co - culture experiment was used to evaluate the effect of IL - 17A on intestinal epithelial cells .

【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R574.62

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本文編號(hào)：1385278