發(fā)布時間：2018-01-07 07:31

  本文關鍵詞：端粒穩(wěn)態(tài)和DNA損傷修復基因FAM175A、TLK1與早發(fā)性卵巢功能不全相關性研究　出處：《山東大學》2017年博士論文　論文類型：學位論文

  更多相關文章： 早發(fā)性卵巢功能不全 端粒長度 端粒酶活性 顆粒細胞 外周血白細胞 早發(fā)性卵巢功能不全 FAM175A DNA損傷 早發(fā)性卵巢功能不全 TLK1 SNP DNA損傷

【摘要】：第一章生化異常期早發(fā)性卵巢功能不全患者外周血和顆粒細胞中端粒穩(wěn)態(tài)分析目的:早發(fā)性卵巢功能不全(POI)是女性生育力的一種病理性衰老。按照疾病的發(fā)展進程,臨床上將POI分為4個階段:正常期、隱匿期、生化異常期和臨床異常期。端粒穩(wěn)態(tài)是指端粒長度和端粒酶活性的相互調節(jié)和平衡,是反映衰老程度的重要指標之一。端粒損耗與年齡及多種衰老相關疾病之間存在一定關系。前期研究提示端粒穩(wěn)態(tài)與隱匿期和臨床異常期POI均具有相關性,但端粒穩(wěn)態(tài)與生化異常期POI是否具有相關性目前未見報道。本研究擬通過測定生化異常期POI患者外周血端粒長度、結合顆粒細胞端粒長度及端粒酶活性探討端粒穩(wěn)態(tài)與早期卵巢功能衰退的相關性。方法:納入在山東大學附屬生殖醫(yī)院就診的生化異常期POI患者120例和正常對照女性279例。留取外周血和卵泡液,提取卵泡液中顆粒細胞。通過改良的定量聚合酶鏈反應技術測定外周血和顆粒細胞相對端粒長度,采用改進的端粒重復序列延伸法測定顆粒細胞中相對端粒酶活性,比較分析病例和對照組中端粒長度和端粒酶活性差異。結果:在校正年齡因素的影響后,生化異常期POI患者外周血(0.75 ±0.09 vs.1.79±0.12,P0.001,OR = 0.54,95%置信區(qū)間(CI)= 0.43-0.68)和顆粒細胞(0.78±0.09vs.1.90±0.23,P0.001;OR = 0.54,95%CI = 0.41-0.70)端粒長度均明顯短于正常對照。POI患者顆粒細胞端粒酶活性明顯低于正常對照(1.57±0.59vs.4.63 ±0.93,P = 0.025;OR = 0.84,95%CI = 0.72-0.98)。差異均有統(tǒng)計學意義。結論:首次在生化異常期POI患者中同時測定了外周血和顆粒細胞中的端粒長度以及顆粒細胞中的端粒酶活性,發(fā)現(xiàn)縮短的端粒長度和降低的端粒酶活性和生化異常期POI密切相關,提示端粒長度和端粒酶活性或可作為監(jiān)測卵巢功能進行性下降的指標之一。第二章 FAM175A基因在早發(fā)性卵巢功能不全發(fā)病中的機制研究目的:早發(fā)性卵巢功能不全(POI)病因高度異質,目前已知病因包括染色體異常、基因突變、自身免疫、醫(yī)源性因素、感染、代謝性因素以及環(huán)境因素等,但半數(shù)以上的患者病因并不明確,目前已知的POI致病基因包括生殖激素合成相關、卵子發(fā)生相關、以及影響卵巢功能的多效性孟德爾遺傳疾病相關基因等。近來,有研究證實DNA損傷修復相關基因突變是POI的致病原因。FAM175A基因是重要的DNA損傷修復相關基因,參與DNA損傷的抵抗和修復過程,以及G2-M細胞周期檢驗點的調控。Fam175a基因敲除的純合子和雜合子小鼠,均表現(xiàn)出生存率的降低和腫瘤發(fā)生率的增加,但研究者并未觀察小鼠的生育能力。一項納入22個GWAS結果的Meta分析發(fā)現(xiàn)13個與女性自然絕經(jīng)年齡相關的新發(fā)SNP位點,后續(xù)的生物學通路分析發(fā)現(xiàn)其中的SNPrs4693089與FAM175A基因緊密連鎖在一起。FaM175A基因突變與POI發(fā)病機制的相關研究目前未見報道。本研究對特發(fā)性POI患者進行FAM175A基因測序分析,并探討該基因突變與POI發(fā)病的相關性。方法:納入400例特發(fā)性POI患者和400例卵巢功能正常的婦女。對POI患者的FAM175A基因外顯子部分及外顯子和內(nèi)含子交接區(qū)域進行測序,發(fā)現(xiàn)的序列變異在400例對照中進行驗證。為闡明發(fā)現(xiàn)突變對FAM175A基因功能的影響,進一步利用絲裂霉素誘導DNA雙鏈斷裂損傷,檢測磷酸化H2AX水平,評估DNA損傷敏感性及修復能力;流式細胞儀檢測有絲分裂期細胞比例,評估G2-M檢驗點調控能力。結果:測序發(fā)現(xiàn)2例患者同時攜帶FAM175A基因的雜合突變C.C727G(p.L243V),在Hela細胞中過表達野生型以及p.L243V突變型FAM175A,絲裂霉素誘導損傷后,突變型細胞對損傷的敏感性以及修復能力較野生型細胞未發(fā)現(xiàn)明顯變化,兩種細胞的G2-M檢驗點調控能力也未見顯著差異。結論:首次在特發(fā)性POI患者中進行了FAM1 75A基因突變篩查,并發(fā)現(xiàn)FAM175A基因突變c.C727G(p.L243V),但該突變未影響FAM175A對DNA損傷的敏感性及修復能力,可能不是POI患者的發(fā)病原因。第三章 TLK1基因在早發(fā)性卵巢功能不全發(fā)病中的機制研究目的:TLK1基因隸屬DNA損傷修復基因家族,通過RAD9-TLK1-ASF1通路參與DNA雙鏈斷裂損傷修復,并通過調節(jié)染色質動力學參與調控染色質裝配。既往全基因組關聯(lián)薈萃分析報告了 13個新發(fā)自然絕經(jīng)年齡相關位點,其中包括TLK1在內(nèi)的涉及DNA損傷修復的8個候選基因。進一步研究證實,TLK1基因rs10183486位點與歐洲女性的早絕經(jīng)和POI有關。但TLK1是否參與以及如何參與POI發(fā)病目前未見報道。方法:研究共納入192例特發(fā)性POI患者,對TLK1基因外顯子及外顯子與內(nèi)含子交接部分進行直接測序,測序結果與數(shù)據(jù)庫中正常中國北方(CHB)人群進行基因型和等位基因頻率比較,SPSS軟件進行統(tǒng)計分析。結果:192例特發(fā)性POI患者篩查出6個已知SNP位點,分別為位于8號外顯子的 rs149844334,rs11553951 和 rs771244101;位于 21 號外顯子的 rs2277339;位于1號內(nèi)含子區(qū)域的rs113416007和位于6號內(nèi)含子區(qū)域的rs17283147。其中前4個位于外顯子上的SNP均為同義突變。未發(fā)現(xiàn)TLK1的新發(fā)變異。結論:首次在中國POI患者中進行了TLK1基因突變分析,未發(fā)現(xiàn)致病突變,提示TLK1基因突變可能不是中國POI患者發(fā)病的常見病因。TLK1基因對POI的致病性有待進一步探討。
[Abstract]:Objective : To study the relationship between telomerase activity and telomerase activity in peripheral blood and granular cells of patients with early - onset ovarian dysfunction . In this study , we have found that the gene mutation is closely linked to the pathogenesis of POIs . In this study , we have found that the gene mutation is closely linked to the pathogenesis of POIs . Results : Six known SNP sites were screened from 192 idiopathic POI patients , rs149844334 , rs11553951 and rs771244101 located in exon 8 , rs2277339 in exon 21 , rs1134007 in intron 1 and rs17283147 in intron 6 . Conclusion : The mutation of TLK1 gene is not found .

【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R711.75

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本文編號：1391594