發(fā)布時(shí)間：2020-11-18 14:37

　　 目的:研究EpCAM-ING1-CART在三陰性乳腺癌及卵巢癌中的治療作用。方法:免疫組化檢測(cè)三陰性乳腺癌組織中EpCAM及EGFR抗原的表達(dá)差異,以及EpCAM在癌旁組織中的表達(dá)水平。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同人乳腺癌細(xì)胞系之間EpCAM的表達(dá)差異以及卵巢癌細(xì)胞系SKOV3的EpCAM表達(dá)情況。針對(duì)EpCAM抗原的Exon2序列設(shè)計(jì)CAR,稱為EpCAM-ING1-CAR。慢病毒系統(tǒng)構(gòu)建EpCAM-ING1-CAR陽(yáng)性表達(dá)的T細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)EpCAM-ING1-CAR的表達(dá)情況。流式細(xì)胞術(shù)分析殺傷效應(yīng),ELISA實(shí)驗(yàn)檢測(cè)IFN-γ的釋放量。細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)惡性漿膜腔誘導(dǎo)后的SKOV3是否發(fā)生EMT變化。結(jié)果:免疫組化結(jié)果顯示EpCAM和EGFR在三陰性乳腺癌組織中均高表達(dá),而Ep CAM表達(dá)尤為顯著。Western Blot和流式細(xì)胞術(shù)提示EpCAM在MDA-MB-468細(xì)胞及SKOV3細(xì)胞中表達(dá)水平較高。MDA-MB-231細(xì)胞部分表達(dá)EpCAM抗原。ELISA實(shí)驗(yàn)證實(shí)EpCAM-ING-1-CART與MDA-MB-468及SKOV3共培養(yǎng)時(shí),其IFN-γ的釋放量高于Control-T。在三陰性乳腺癌細(xì)胞治療中,流式細(xì)胞術(shù)顯示EpCAM-ING-1-CART可有效殺傷高表達(dá)EpCAM抗原的MDA-MB-468細(xì)胞,而對(duì)低表達(dá)EpCAM的MDA-MB-231細(xì)胞也具有殺傷作用。細(xì)胞免疫熒光證實(shí)惡性漿膜腔積液誘導(dǎo)后,SKOV3會(huì)發(fā)生EMT變化。流式細(xì)胞術(shù)分析顯示,EpCAM-ING1-CART既可殺傷SKOV3細(xì)胞,也可殺傷發(fā)生EMT變化后的SKOV3細(xì)胞。結(jié)論:EpCAM-ING1-CART對(duì)三陰性乳腺癌及卵巢癌均有治療作用。
【學(xué)位單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R737.9;R737.31
【部分圖文】：

MDA-MB-468 MDA-MB-231 SKOV3圖 2 EpCAM 在乳腺癌細(xì)胞株及卵巢癌細(xì)胞株中的表達(dá)量Figure 2 The expression of EpCAM in breast cancer cell lines and ovarian cancer cell lines2.3 EpCAM-ING1-CAR 的表達(dá)及 IFN-γ釋放檢測(cè)病毒感染后 48h 檢測(cè) CAR 的表達(dá)情況。以未感染 T 細(xì)胞為對(duì)照（Control-T），則 EpCAM-ING1-CAR 的表達(dá)量為 57.74%（見(jiàn)圖 3A.）。將 Control-T 細(xì)胞、EpCAM-ING1-CART 細(xì)胞分別與陽(yáng)性靶細(xì)胞 MDA-MB-468 及 SKOV3 按效靶比為8:1，4:1，2:1，1:1 的比例混合培養(yǎng)后，檢測(cè) IFN-γ的釋放量。其檢測(cè)結(jié)果如下：以 MDA-MB-468 為靶細(xì)胞，CAR-T 組的 IFN-γ濃度分別為 3083.56±38.14pg/ml、3507.53±72.51pg/ml、3337.68±67.60pg/ml、2421.45±79.55pg/ml，而 Control-T 組 IFN-γ 濃 度 分 別 為 -28.34±6.40pg/ml 、 -45.20±2.70pg/ml 、 -42.97±4.23pg/ml 、

19A：流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè) EpCAM-ING1-CART 在效靶比為 1:1,2:1 及 4:1 條件下，陰陽(yáng)靶細(xì)胞的存活比例；B：流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè) Control-T 在效靶比為 1:1,2:1 及 4:1 條件下，陰陽(yáng)靶細(xì)胞的存活比例；C：無(wú) T 細(xì)胞時(shí)的陰陽(yáng)靶細(xì)胞比例；D：EpCAM-ING1-CAR-T 與 Control-T殺腫瘤效應(yīng)計(jì)算。圖 4 EpCAM-ING-1-CART 可有效殺傷 MDA-MB-468 細(xì)胞Figure 4 The EpCAM-ING1-CART works in the killing of MDA-MB-468 cells2.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè) EpCAM-ING-1-CART 對(duì) MDA-MB-231 的殺傷效應(yīng)以 MDA-MB-231 為陽(yáng)性靶細(xì)胞，MCF7 為陰性靶細(xì)胞，流式分別檢測(cè)每種效

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文靶比下，CAR-T 及 Control-T 的殺傷效應(yīng)。在效靶比為 2:1，4:1，8:1 時(shí)，CAR-T組的陽(yáng)性靶細(xì)胞比例分別為 29.1%，7.7%，0.975%,陰性靶細(xì)胞比例分別為 25.5%，14.8% ，3.83%(如圖 5A.)；而 Control-T 組的陽(yáng)性靶細(xì)胞比例分別為 67.6%，65.3%，65.6%，陰性靶細(xì)胞比例分別為 29.4%，26.9%，23.3%（如圖 5B.）；無(wú) T 細(xì)胞對(duì)照組陽(yáng)性靶細(xì)胞比例為 66.5%，陰性靶細(xì)胞比例為 32.1%（見(jiàn)圖 5C.）；CAR-T 組的殺傷活性分別為 45.0%，75.0%，88.0%，Control-T 組殺傷活性為-11%，-17%，-36%。CAR-T 組殺傷活性遠(yuǎn)高于 Control-T 組（P=0.0439）（見(jiàn)圖 5D.）
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 ;Breast Cancer Immunotherapy[J];Cellular & Molecular Immunology;2004年04期

本文編號(hào)：2888830